2. 1. Historia
Los orígenes de la técnica de conservación mediante la liofilización remontan en la época
de los Incas, ene el siglo XV, este proceso era utilizado para la conservación de los
alimentos, llevándolos a la cima de montañas, donde las bajas temperaturas congelaban
sus reservas de alimentos y el agua del interior de los alimentos es evaporada lentamente
a bajas presiones del aire en esas altitudes. Un ejemplo conocido es la elaboración del
chuño, que tras pasar las papas por estos procesos podemos obtener el producto del chuño
y se puede conservar a más de 4 años.
2. Diseño de conservación
El diseño de conservación de microrganismo mediante el proceso de liofilización
contempla los siguientes pasos:
a. Formulación
Es de importancia para optimizar la eficiencia de la liofilización, estabilidad,
la seguridad y la fácil aplicación del producto. En la etapa de cultivación, hay
dos tipos, una de ellas es por medio líquido, se centrifuga y se suspenden en
un medio adecuado para la liofilización, lioprotector. Otro tipo de cultivo es
el uso de agar, en este caso solo se realiza el lavado con el medio
lioprotector. Evitando el paso de centrifugado. Dato a tomar es cuenta es de
que los cultivos estén en etapa de crecimiento activo. Algunos de los
lioprotectores son: la leche en polvo descremada, glicerol y sacarosa.
b. Proceso de liofilización
Contempla 3 etapas: congelado, secado primario y secado secundario.
i. Congelado:
Permite la inmovilización de los componentes de solución, reduce la
desnaturalización del producto por calor en el secado y previene la ebullición
evitando así la formación de espuma. Se puede congelar en un congelador a -
12°C, -20°C o -80°C, someterlo a una congelación progresiva -4°C, -12°C y
-20°C o utilizando nitrógeno líquido (17,26,27).
ii. Secado Primario
Sublimación, es el paso en el cual se eleva la temperatura de la muestra
congelada y se da la migración del agua desde la misma.
Existe un punto, el punto triple, en el cual los tres estados coexisten, a
presiones atmosféricas el hielo puede convertir directamente en vapor
mediante sublimación.
Crecimiento de cultivo bacteriano Formulación Proceso de liofilización
Sellado al vacío
Almacenamiento
Reconstitución
3. La sublimación al vacío minimiza los efectos de concentración de producto
lo cual garantiza un producto poroso, seco, activo y fácilmente soluble. Se
debe mantener la temperatura a la que el producto es liofilizado. Para
mantener la integridad del producto congelado y que sea una temperatura que
maximice la presión de vapor del producto.
iii. Secado Secundario
Durante este proceso, la húmeda residente ligada es removida para lograr una
estructura seca. Inicia por el aumento de la temperatura manteniendo baja
presión para reducir el contenido de agua residual hasta el nivel deseado,
para alcanzar un estado estable.
iv. Sellado
Los viales deben ser sellados al vacío, evitando el ingreso de reactivos, gases
atmosféricos y aire húmedo que puedan provocar una desestabilización o
contaminación del producto.
v. Almacenamiento
Alcanza mayor supervivencia cuando menor sea la temperatura de
almacenamiento.
vi. Reconstitución
Adición de diluyente a la torta seca, los celulares viables se ven afectada por
diferentes condiciones como el volumen de rehidratación, la temperatura, el
pH y osmolaridad.
3. Insumos y Equipos
a. Liofilizador de cultivos microbianos.
i. Manivela de sellado.
ii. Cámara de secado.
iii. Condensador.
iv. Sensor de temperatura y presión.
v. Bomba de vacío.
b. Congelador
c. Vial para liofilizacion y tapas de goma
4. Bibliografía
• Grauer, A. , Grunberg, K. y Zardo, S. (2015). Puesta a punto de un protocolo
de liofilización para la creación de bancos bacterianos. Recuperado de :
https://dspace.ort.edu.uy/bitstream/handle/20.500.11968/3172/Material%20co
mpleto.pdf?sequence=-1&isAllowed=y
• Castro F., Jean Franco (ed.) (2020) Conformación de colecciones de cultivos
microbianos [en línea]. Chillan: Boletín INIA - Instituto de Investigaciones
Agropecuarias. no. 428. Disponible
en: https://hdl.handle.net/20.500.14001/6945 (Consultado: 9 mayo 2022).
