La liofilización es un proceso de conservación de microorganismos que data de los incas y vikingos. Consiste en eliminar el agua de una sustancia congelada mediante sublimación directa del hielo a vapor de agua, sin pasar por la fase líquida. Esto se logra mediante bajas temperaturas y presión en un liofilizador, protegiendo la viabilidad de los microorganismos. Se requiere equipamiento como liofilizadores, viales de vidrio, tapas, crimpadores y congeladores para realizar el

1. DESCRIBIR LA TECNICA DE CONSERVACION DE MICROORGANISMOS POR
LIOFILIZACION
1.HISTORIA
Un proceso rudimentario de liofilización tuvo su origen en el imperio Inca, alrededor del año 200
a.C., en la zona del altiplano andino a 4.000 msnm, el cual era utilizado para la fabricación del
chuño y charqui posteriormente, los vikingos utilizaron este proceso para la conservación de
pescado.
El proceso de liofilización fue renovado en 1906 por Arsène d’Arsonval y Frédéric Bordas,
mientras que en el año 1911 surgen los primeros métodos de liofilización para bacterias,
empleando suero y leche como agentes protectores. Se desarrolla en forma industrial durante la
Segunda Guerra Mundial y fue aplicada, fundamentalmente, a la liofilización de plasma humano
y producción de penicilina.
Uno de los principios básicos de la liofilización es la interrupción del crecimiento microbiano,
donde prevalece la viabilidad y estabilidad genética del cultivo por un período prolongado. Este
método proporciona una ventaja respecto a otras metodologías de preservación como la crio
preservación, ya que no requiere de suministro eléctrico o de nitrógeno líquido constante.
En la Colección Chilena de Recursos Genéticos Microbianos se utiliza la liofilización como una
de las técnicas para la preservación de microorganismos a largo plazo. Este proceso consta de
cuatro grandes etapas:
Figura 1. Esquema general del proceso de preservación de microorganismos por liofilización.
2.TECNICA DE LIOFILIZACION
Consiste en la eliminación del agua presente en una sustancia congelada, a través de la sublimación
del hielo; es decir, el agua en estado sólido pasa a estado gaseoso directamente, sin pasar por estado
líquido.
Para lograr la sublimación del agua congelada, la temperatura y la presión parcial del vapor de
agua deben ser inferiores a la del punto triple del agua, es decir menor que 0,0099 °C y menor que
0,006 atm y, cuando la muestra se calienta, el hielo se sublima directamente a vapor sin pasar por
estado líquido El proceso físico de deshidratación producido en la liofilización puede afectar la
estructura de las células, debido a la formación de cristales de hielo, tanto dentro como fuera de la
célula, disminuyendo su viabilidad. El uso de sustancias protectoras de la liofilización para
proteger a las células durante el proceso de liofilización es ampliamente utilizado en las
colecciones de cultivos microbianos, por lo cual se recomienda su uso encarecidamente.

2. 3.EQUIPAMIENTO NECESARIO
3.1. Liofilizador
La deshidratación de una muestra por sublimación se realiza en un liofilizador, equipo que puede
tener múltiples configuraciones. Se compone de cuatro partes fundamentales:
La primera es una cámara de secado, por lo general se encuentra a temperatura ambiente, y es el
lugar donde se produce la sublimación del solvente contenido en la muestra congelada, bajo
condiciones de vacío. La segunda es un condensador, lugar donde ocurre la condensación del vapor
del solvente sublimado en la cámara de secado, y corresponde a un recipiente de acero inoxidable
que se comunica con la cámara de secado y que, dependiendo de las especificaciones del equipo,
puede alcanzar una temperatura de -50 °C. La tercera parte es un sensor de temperatura y presión
que permite monitorear estos parámetros en tiempo real. La cuarta parte, y sólo en el caso de un
liofilizador de bandejas, corresponde a una manivela ubicada en la parte superior del equipo y que
está conectada a un tornillo sinfín. La manivela permite bajar las bandejas superiores y sellar los
viales que se encuentran dentro del equipo.
Figura 2. Equipo para la liofilización de cultivos microbianos
3.2. INSUMOS, ACCESORIOS Y OTROS EQUIPOS REQUERIDOS
Manivela de sellado
Cámara de secado
Sensor de temperatura y
presión
Condensador
Bomba de vacío
Para preservar microorganismos por medio de
liofilización se requieren viales de vidrio de 2 ml,
que necesitan de una tapa de goma para cerrarlos.
Luego del proceso de liofilización, los viales son
sellados con una tapa metálica para evitar la
entrada de aire al material biológico contenido
dentro del vial, lo cual se realiza con un alicate
llamado crimpador manual de viales. Las muestras
requieren ser congeladas antes de introducirlas en
el liofilizador, por lo que se requiere de un
congelador que alcance temperaturas de -20 °C. Se
recomienda utilizar para la rotulación de los tubos,
etiquetas adhesivas con el número correspondiente
u otra información relevante.
Figura 3. Insumos y equipos
requeridos para el sistema de
criopreservación