El documento detalla diversas pruebas bioquímicas utilizadas para identificar características metabólicas de bacterias, como la fermentación de azúcares y la producción de enzimas. Se describen pruebas específicas como TSI, LIA, SIM, urea y citrato, con fundamentos y resultados esperados para el crecimiento bacteriano. La incubación y las condiciones del medio son cruciales para la correcta interpretación de los resultados de estas pruebas.

1. “AÑO DE LA UNIDAD, LA PAZ Y EL DESARROLLO”
INSTITUTO DE EDUCACION SUPERIOR TECNOLOGICO PRIVADO HIPOLITO UNANUE
DOCENTE: Blgo.Mbgo. JOSUE SEGUNDO SILVA ORA
LABORATORIO CLINICO
UNIDAD: METODOS Y TECNICAS DE ESTUDIO MICROBIOLOGICO II
TEMA: PRUEBAS BIOQUIMICAS
ALUMNO: DROATBE QUITO AMASIFUEN
CICLO:
IV
TARAPOTO-PERU

2. PRUEBAS BIOQUIMICAS
• Permiten determinar las características
metabólicas de las bacterias objeto de
identificación.
• Estas pruebas se fundamentan en
demostrar si el microorganismo:
- Es capaz de fermentar azucares
- Presencia de enzimas
- Degradación de compuestos
- Producción de compuestos

3. PRUEBAS BIOQUÍMICAS
TSI (Triple Azúcar de
Hierro)
LIA (lisina Hierro Agar)
SIM (Sulfuro Indol
Movilidad)
UREA
CITRATO

4. TSI (Triple –Sugar- Iron)
FUNDAMENTO:
• el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los
nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano.
• La lactosa 1%, sacarosa 1% y glucosa 0,1% son los
hidratos de carbono fermentables.
• El sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones
Fe3+ , los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico
y producen sulfuro de hierro, de color negro.
• . El rojo de fenol es el indicador de pH.
• En aerobiosis, a 33-37°C durante 18 a 24 horas.
SE SIEMBRA POR PICADURA PROFUNDA LUEGO POR
ESTRIAS
Empleado para la diferenciación de enterobacterias en base a la
fermentación(glucosa, sacarosa, lactosa) y producción de acido sulfhídrico.

5. RESULTADOS:
 Fuente de carbono utilizada
(produce un viraje del rojo al amarillo).
 El tiosulfato es reducido a H2S quien
reacciona con el citrato férrico de
amoniacal para dar formación al sulfuro de
hierro que es de color negro.
 la presencia de gas se debe al CO2
producto de la fermentación.
M.O
SUPERFICIE/
PROFUNDID
AD
PRODUCCION DE GAS H2S
Escherichia coli A/A + -
Klebsiella
pneumoniae
A/A + -
Proteus mirabilis K/A - +

6. LIA (Lisina-Hierro- Agar)
utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente
Salmonella spp., basado en la descarboxilación y desaminación
de la lisina y en la producción de ácido sulfhídrico.
FUNDAMENTO:
 la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes
para el desarrollo bacteriano.
 La glucosa es el hidrato de carbono fermentable y la lisina
es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las
enzimas decarboxilasa y deaminasa.
 El citrato de hierro y amonio y el tiosulfato de sodio son
los indicadores de la producción de ácido sulfhídrico.
 El purpura de bromocresol, es el indicador de pH
 Incubación En aerobiosis, a 33-37 ºC durante 18-24
horas.
LA SIEMBRA POR PICADURA PROFUNDA Y POR ESTRIAS.

7. RESULTADOS:
Descarboxilación de lisina:
Positivo: Pico Violeta/Fondo Violeta
Negativo: Pico Violeta/ Fondo Amarillo
Desaminación de lisina:
Pico Rojizo/ Fondo Amarillo
Ennegrecimiento del medio producción de acido
sulfhídrico.

8. SIM (Sulfuro-Indol-Motilidad)
Destinado a verificar la movilidad, producción de
indol y de sulfuro de hidrógeno por los
microorganismos.
FUNDAMENTO:
 la tripteína y la peptona aportan nutrientes para el
desarrollo microbiano.
 El triptófano es un aminoácido constituyente de
muchas peptonas y particularmente de la tripteína
y puede ser metabolizado por algunas bacterias
para formar indol.
 El indol producido se combina con el aldehído del
reactivo de Ehrlich o de Kovács, para originar un
compuesto de color rojo.
 Incubación En aerobiosis. a 33-37 °C, durante 18-
24 horas.
SE SIEMBRA POR PICADURA RECTA

9. RESULTADOS:
 Movilidad:
Resultado positivo: presencia de turbidez o difusa.
Resultado negativo: crecimiento solamente en la línea de
siembra.
 Producción de SH2 :
Resultado positivo: ennegrecimiento del medio de cultivo
a lo largo
de la línea de siembra o en todo el medio.
 Prueba del indol:
Resultado positivo: color rojo.
M.O CRECIMIENTO
MOVILIDA
D
INDOL H2S
Escherichia coli satisfactorio + + -
Salmonella
typhimurium
masticatorio + - +
Klebsiella
pneumoniae
satisfactorio - - -
Proteus mirabilis satisfactorio + - +

10. CALDO DE UREA
Diferenciar microorganismos en base a la actividad
ureásica.
Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea,
tales como Proteus spp. otras enterobacterias y
estafilococos.
FUNDAMENTO:
 La tripteína y la glucosa, aportan los
nutrientes para el desarrollo de
microorganismos.
 El cloruro de sodio mantiene el balance
osmótico
 el rojo de fenol es el indicador de pH.
 Incubación En aerobiosis, a 33-37 ºC,
durante 18-24
horas.
SIEMBRA:ESTRIAR LA SUPERFICIE DEL MEDIO EN

11. RESULTADOS:
 Microorganismos que hidrolizan la urea:
el medio de cultivo es de color rosado-
rojizo.
 Microorganismos que no hidrolizan la
urea: el medio de cultivo permanece de
color amarillo.

12. CITRATO (Simmons Citrato Agar)
Utilizado para la diferenciación de enterobacterias
en base a la capacidad de usar citrato como única
fuente de carbono.
FUNDAMENTO:
 El fosfato monoamónico es la única fuente de
nitrógeno.
 El citrato de sodio es la única fuente de
carbono.
 Las sales de fosfato forman un sistema buffer.
 El magnesio es cofactor enzimático.
 El cloruro de sodio mantiene el balance
osmótico.
 El azul de bromotimol es el indicador de pH.
 Incubación En aerobiosis 33-37 ºC durante
24-72 horas.
Algunos microorganismos pueden requerir
hasta 7 días de

13. RESULTADOS:
- Positivo: crecimiento bacteriano con un
intenso color azul en el pico de flauta.
- Negativo: ausencia de crecimiento y
permanencia del
color verde del medio de cultivo.
MICROORGANISMOS CRECIMIENTO COLOR DEL MEDIO
Klebsiella pneumoniae Satisfactorio Azul
Salmonella
typhimurium
Satisfactorio Azul
Pseudomonas
aeruginosa
satisfactorio Azul
Escherichia coli Negativo Verde
Shigella flexneri negativo Verde