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Agar manitol salado
Se utiliza para el aislamiento selectivo de estafilococos y para
la detección de Staphylococcus aureus a partir de muestras
clínicas.
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la
pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrógeno,
vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono
fermentable, contiene una alta concentración de sal (NaCl)
que es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la
flora acompañante, y el rojo fenol es el indicador de pH.
Staphylococcus
Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las
colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante.
Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona
roja o púrpura.
Las colonias sospechosas, se repicarán en un medio sin exceso de cloruro de sodio
para efectuarles, posteriormente, la prueba de la coagulasa.
Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones
Extracto de carne 1.0
Suspender 111 g de polvo por litro de agua destilada.
Reposar 5 minutos y mezclar calentando a ebullición
durante 1 o 2 minutos. Distribuir y esterilizar en
autoclave a 118-121°C durante 15 minutos.
Pluripeptona 10.0
d-Manitol 10.0
Cloruro de sodio 75.0
Agar 15.0
Rojo de fenol 0.025
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Características del medio Medio deshidratado: color beige rosado, homogéneo
Medio preparado: rojo
Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
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Siembra Sembrar en superficie un inóculo denso de la muestra.
Incubación
De rutina: durante 18-24 horas a 35-37 °C, en aerobiosis.
Resultados
• Microorganismos fermentadores de manitol: colonias de color amarillo rodeadas o no de un
halo amarillo.
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Staphylococcus aureus ATCC
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sulfhídrico, el sulfato de hierro y
amonio, los cuales se combinan con
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de hierro, de color negro. El rojo de
fenol es el indicador de pH, y el
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Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de
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Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones
Extracto de carne 3.0
Suspender 62,5 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar bien y
calentar con agitación frecuente, hervir 1 o 2 minutos hasta disolución
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a 121°C por 15 minutos. Enfriar en pico de flauta profundo.
Pluripeptona 20.0
Cloruro de sodio 5.0
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medio
Medio deshidratado: color beige rosado, homogéneo
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Siembra A partir de un cultivo puro, sembrar en TSI, picando el fondo y
extendiendo sobre la superficie del medio.
Incubación A 35-37°C durante 24 horas, en aerobiosis.
Resultados
1-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.
2-Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico.
Microorganismo Pico/Fondo Producción de gas Producción deácido
sulfhídrico
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K. pneumoniae ATCC 700603 A/A + -
P. mirabilis ATCC 43071 K/A + +
S. typhimurium ATCC 14028 K/A - +
S. enteritidis ATCC 13076 K/A + +
S. flexneri ATCC 12022 K/A - -
P. aeruginosa ATCC 27853 K/K - -
A: ácido
K: alcalino
Referencia
• Laboratorios Britania S.A. Agar Manitol Salado. 11/2015. Rev. 01.
[Online]. Disponible en:
http://www.britanialab.com/productos/B02118%20REV%2001-
MANITOL%20SALADO%20AGAR.pdf
• Laboratorios Britania S.A. T.S.I Agar (Triple Sugar Iron Agar). 11/2015.
Rev. 01. [Online]. Disponible en:
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Agar manitol salado

  • 1. Agar manitol salado Se utiliza para el aislamiento selectivo de estafilococos y para la detección de Staphylococcus aureus a partir de muestras clínicas. En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, contiene una alta concentración de sal (NaCl) que es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompañante, y el rojo fenol es el indicador de pH. Staphylococcus
  • 2. Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o púrpura. Las colonias sospechosas, se repicarán en un medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la coagulasa.
  • 3. Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones Extracto de carne 1.0 Suspender 111 g de polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar calentando a ebullición durante 1 o 2 minutos. Distribuir y esterilizar en autoclave a 118-121°C durante 15 minutos. Pluripeptona 10.0 d-Manitol 10.0 Cloruro de sodio 75.0 Agar 15.0 Rojo de fenol 0.025 pH final: 7.4 ± 0.2 Características del medio Medio deshidratado: color beige rosado, homogéneo Medio preparado: rojo Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10-35 ºC. Medio preparado: a 2-8 ºC. Siembra Sembrar en superficie un inóculo denso de la muestra. Incubación De rutina: durante 18-24 horas a 35-37 °C, en aerobiosis.
  • 4. Resultados • Microorganismos fermentadores de manitol: colonias de color amarillo rodeadas o no de un halo amarillo. • Microorganismos no fermentadores de manitol: Colonias del color del medio rojas rodeadas o no de halo rojizo-purpura. Microorganismos Crecimiento Características de las colonias Staphylococcus aureus ATCC 25923 Excelente Amarilla rodeadas de un halo amarillo Staphylococcus epidermidis ATCC 14990 Bueno Roja sin cambio del color del medio Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido Inhibido Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Inhibido Inhibido Sin inocular - Rojo
  • 5. T.S.I Agar (Triple Sugar Iron Agar) Medio universalmente empleado para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de glucosa, lactosa, sacarosa y a la producción de ácido sulfhídrico. En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.
  • 6. Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol,el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro. Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones Extracto de carne 3.0 Suspender 62,5 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar bien y calentar con agitación frecuente, hervir 1 o 2 minutos hasta disolución total. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo. Esterilizar a 121°C por 15 minutos. Enfriar en pico de flauta profundo. Pluripeptona 20.0 Cloruro de sodio 5.0 Lactosa 10.0 Sacarosa 10.0 Glucosa 1.0 Sulfato de hierro y amonio 0.2 Tiosulfato de sodio 0.2 Rojo de fenol 0.025 Agar 13.0 pH final: 7.3 ± 0.2
  • 7. Características del medio Medio deshidratado: color beige rosado, homogéneo Medio preparado: rojo Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10-35 ºC. Medio preparado: a 2-8 ºC. Siembra A partir de un cultivo puro, sembrar en TSI, picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio. Incubación A 35-37°C durante 24 horas, en aerobiosis.
  • 8. Resultados 1-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa. 2-Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa. 3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares. 4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas. 5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico. Microorganismo Pico/Fondo Producción de gas Producción deácido sulfhídrico E. coli ATCC 25922 A/A + - K. pneumoniae ATCC 700603 A/A + - P. mirabilis ATCC 43071 K/A + + S. typhimurium ATCC 14028 K/A - + S. enteritidis ATCC 13076 K/A + + S. flexneri ATCC 12022 K/A - - P. aeruginosa ATCC 27853 K/K - - A: ácido K: alcalino
  • 9. Referencia • Laboratorios Britania S.A. Agar Manitol Salado. 11/2015. Rev. 01. [Online]. Disponible en: http://www.britanialab.com/productos/B02118%20REV%2001- MANITOL%20SALADO%20AGAR.pdf • Laboratorios Britania S.A. T.S.I Agar (Triple Sugar Iron Agar). 11/2015. Rev. 01. [Online]. Disponible en: http://www.britanialab.com/productos/B02134%20REV%2001- TSI%20AGAR.pdf