1. El documento describe varias pruebas bioquímicas utilizadas para identificar bacterias, incluyendo pruebas de metabolismo de carbohidratos, aminoácidos y producción de enzimas. 2. Algunas de las pruebas discutidas incluyen Citrato de Simons, Kligler, TSI, Voges-Proskauer, Rojo de Metilo, LIA, MIO y SIM. 3. Los resultados de las pruebas pueden ayudar a diferenciar géneros y especies bacterianas basados en su capacidad para fer

1. COPROCULTIVO

2. PRUEBAS BIOQUIMICAS
Las pruebas bioquímicas son un conjunto de
reacciones que determinan la actividad de una
vía metabólica de la bacteria a partir de un
sustrato que se incorpora en un medio de
cultivo y que la bacteria al crecer transforma o
no.

3. PRUEBAS BIOQUIMICAS
CITRATO DE SIMONS
FUNDAMENTO: Se utiliza para determinar si un
organismo es capaz de utilizar el citrato como
única fuente de carbono para el metabolismo en
condiciones aeróbicas, provocando alcalinidad.
INDICADOR: Azul de Bromotimol.
pH INICIAL: 6.9

4. INOCULACIÓN: Estría en la
superficie.
INTERPRETACIÓN: El ensayo
es positivo cuando se
observa crecimiento a lo
largo de la estría,
acompañado o no de un
viraje de verde a azul por el
indicador (pH: 7.6).

6. DIFERENCIACIÓN DE GENERO: Salmonella (+), Serratia
(+), Klebsiella (+), Edwardsiella (-), Yersinia
pseudotuberculosis (-), Yersinia enterocolitica (-).
DIFERENCIACIÓN DE ESPECIE: Aeromonas hydrophilia (+),
Aeromonas salmonicida ( - ), Bordetella pertussis ( - ),
otras Bordetella (+), Moraxella osloensis (+),
Pseudomonas cepacia (+), Pseudomonas maltophilia(-).

7. AGAR HIERRO DE KLIGLER (AHK) y TSI Ó AHTA (AGAR
HIERRO TRIPLE AZUCAR)
FUNDAMENTO: Determinar la capacidad de un
organismo de atacar el hidrato de carbono especifico
incorporado en un medio de crecimiento básico, con
producción o no de gases, con la determinación posible
de H2S (ác. sulfhídrico).

8. El agar se prepara en forma de pico de flauta. Esto
determina que existan 2 cámaras de reacción dentro del
mismo tubo.
La porción inclinada (pico) expuesta en toda su
superficie al oxígeno es aerobia y la porción inferior
(fondo) está protegida del aire y es relativamente
anaerobia.
La porción inclinada del tubo que está expuesta al
oxígeno atmosférico tiende a tornarse alcalina (roja por
el rojo fenol) por la utilización aerobia de las peptonas.

9. En el fondo del tubo, donde no hay oxígeno, la
degradación proteica es mínima y se pueden detectar
pequeñas cantidades de ácido por la aparición de un color
amarillo (indicador: rojo fenol). En ausencia de
fermentación de carbohidratos, no se formarán ácidos y
por la producción de aminas en el pico, todo el medio
quedará rojo. Esto se da en organismos no fermentadores.
INDICADOR: Para ambos rojo de fenol.
pH INICIAL: 7.3
INOCULACIÓN: Por picadura y estría.

10. PROCEDIMIENTO: utilizaremos tubos inclinados de agar
"Kligler-Iron". Sembramos con la bacteria problema
comenzando por realizar una picadura desde el centro
del "slant" hasta el fondo del tubo y al retroceder
realizamos una estría en la superficie del agar inclinado.
Se lleva a incubar a 37oC durante 24 horas.

11. Si transcurrido este tiempo aparece coloración
amarilla en el pico de flauta, la lactosa que
contiene el medio ha sido utilizada aerobiamente,
produciendo suficiente acidez como para virar el
medio de cultivo; si aparece esta coloración en el
fondo, ha habido fermentación de la glucosa y si
además observamos que en el fondo del tubo se
ha roto el agar, podemos decir que ha habido
producción de gas en la fermentación de la
glucosa.

12. KLIGLER

13. A/A/G A/K K/H2S MEDIO SIN INOCULAR
MEDIO TSI

14. A/A/G o SIN GAS. En medio TSI
Escherichia.
Klebsiella.
Enterobacter.
Serratia.
A/A/H2S TSI
Arizona.
Citrobacter.
Proteus mirabilis.
Proteus bulgaris.
A/A TSI
Yersinia enterocolitica.
K/A. TSI
Yersinia pestis.
K/A TSI
Yersinia pseudotuberculosis
K/A/G/ H2S. Kligler y TSI
Edwarsiella.
Arizona.
Citrobacter.
Salmonella typhi, S. enteritidis; S.
cholera-suis.
Proteus mirabilis y vulgaris.

15. FERMENTACIÓN DE CARBOHIDRATOS
(VP Y RM)
VOGES - PROSKAUER
(Producción de Acetoína)
FUNDAMENTO VP: Uno de los test del IMViC ( Indol, Rojo de
Metilo, Voges Proskauer, Citrato) para enterobacterias es el
Voges Proskauer. Las especies que llevan a cabo la
fermentación a butanodiol de la glucosa acumulan acetoína
(acetilmetilcarbinol) en el medio. Las bacterias se inoculan
en caldo glucosa-peptona.

16. Las especies que llevan a cabo la fermentación
butanodiólica de la glucosa forman acetoína en
el medio. Se añade alfanaftol y hidroxido de
potasio en medio alcalino. La acetoína se
convierte en diacetilo con la aparición de un
color rojo.

17. INDICADOR: NINGUNO.
pH INICIAL: Ajustar a 6.9
PROCEDIMIENTO: Inocular el caldo VP con un cultivo puro
de no más de 24 horas del microorganismo en estudio.
Incubar a 37°C durante 24 horas. Luego de finalizado el
tiempo de incubación transferir 1 ml del caldo VP a un
tubo limpio y agregar 0,6 ml (6 gotas)de alfa-naftol al 5% y
0,2 ml (2 gotas) de KOH al 40%. Agitar el tubo
cuidadosamente para exponer el medio al oxígeno
atmosférico y dejarlo reposar durante 20 a 30 minutos.

18. POSITIVO pH 4.2 NEGATIVO pH 6.0
•INTERPRETACIÓN: prueba positiva se da
por aparición de un color rojo en el tubo
(acetilmetilcarbinol). pH: 4.2, negativa sin
cambio de color pH:6.0., sin inocular pH
6.9.

19. DIFERENCIACIÓN DE GENERO: Klebsiella pneumoniae
(+), Enterobacter (+), Escherichia coli (-)
DIFERENCIACIÓN DE ESPECIE: Klebsiella pneumoniae
(+), K. ozaenae (-), K. rhinoscheromatis (-),
Enterobacter hafniae 25 ºC (+), a 37ºC generalmente
(+), Yersinia enterocolitica a 25ºC (+), a 37 ºC (-).

20. FUNDAMENTO PARA RM. Comprobar la capacidad de un
organismo de producir y mantener estables los productos
terminales de la fermentación de la glucosa que son ácidos,
como ác. fórmico, ác. acético, ác. láctico, y ác. succínico. Para
vencer la capacidad amortiguadora del sistema.
INDICADOR: NINGUNO.
pH INICIAL: 6.9
PROCEDIMIENTO: Inocular el caldo RM con un cultivo puro de
no más de 24 horas del microorganismo en estudio. Incubar a
37°C durante 24 horas. Añadir al tubo 5 gotas del reactivo
rojo de metilo sin agitar.
RM

21. POSITIVO NEGATIVO
•INTERPRETACIÓN: La presencia de
un anillo rojo en la parte superior del
tubo es una prueba positiva, si no se
forma es negativa.

22. DIFERENCIACIÓN DE GENERO: Escherichia coli.
(+), Enterobacter aerogenes (-), Enterobacter
cloacae, (-), Klebsiella por lo general (-).
DIFERENCIACIÓN DE ESPECIE: Yersinia (+), no
entéricos Gram negativos (-). Listeria
monocytogenes (-)

23. METABOLISMO DE AMINOACIDOS
LIA (AGAR DE HIERRO Y LISINA) (Lysine Iron Agar)
FUNDAMENTO: Permite diferenciar los
microorganismos que producen descarboxilación o
desaminación de la lisina, se puede detectar además
H2S, y es más sensible que el TSI para la detección de
H2S, por la reacción de H2S con la sal pesada, citrato
férrico de amonio para darnos un precipitado negro.

24. PROCEDIMIENTO: Inocular por picadura
y estría, en un tubo con medio LIA
incubar los tubos a 37ºC durante 24 Hrs.
INDICADOR: Púrpura de Bromocresol
pH INICIAL: 6,7 +/- 0,2

25. INTERPRETACIÓN:
Sin inocular: Color violeta
– Descarboxilación positiva: color púrpura en el
fondo.
– Descarboxilación negativa: color amarillo en el
fondo.
– Desaminación positiva: color rojo naranja en la
superficie del medio.
– Desaminación negativa: sin cambio en el color en la
superficie.
– Producción H2S: presencia de precipitado negro.

26. 1. Descarboxilación de la lisina negativo.
2. Descarboxilación positiva, con gas y H2S.
3. Descarboxilación negativa, pero
desaminación positiva, con utilización de
Glucosa en el fondo y gas

27. OTRAS PRUEBAS
MIO (MOVILIDAD, INDOL y ORNITINA)
FUNDAMENTO: Pone de manifiesto la presencia de
enzimas ornitina descarboxilasa y triptofanasa,
además el medio es semisólido, permitiendo
evidenciar así la movilidad entre el medio a las
bacterias con flagelos. También permite observar la
presencia de indol que es el producto metabolico del
aminoácido triptofano

28. En el caso de la ornitina es descarboxilada por una
enzima ornitina descarboxilasa dando como
producto final la putrescina, durante la
descarboxilación el pH aumenta.
INDICADOR: Púrpura de bromocresol
pH INICIAL: 6.0 color púrpura intenso brillante.
PROCEDIMIENTO: Inocular por picadura.

29. INTERPRETACIÓN.
MOVILIDAD. En el caso de la movilidad, se observa en
todo el medio crecimiento.
INDOL. Para visualizar la presencia de indol, agregar 5
gotas de Kovacs o 5 gotas de Erlinch, este con 5 mL de
cloroformo. Indol positivo se observa un anillo rojo en la
superficie (no agitar).
ORNITINA La descarboxilación provoca una desviación del
pH hacia la alcalinidad dando un color más intenso, lo
que indica que es positiva, en caso de ser una prueba
negativa el medio se vuelve amarillo.

30. MIO
La reacción positiva a la
ornitina está dada por un
color púrpura del medio.
Debido a la fermentación de
la glucosa se reduce el pH
produciendo una condición
ácida y originando que el
indicador de pH púrpura de
bromocresol vire al amarillo.
MOVILIDAD (+)
ORNITINA (-)
MEDIO SIN
INOCULAR

31. MIO
El indol, es producido a partir
del triptofano por los
microorganismos que
contienen la enzima
triptofanasa. El desarrollo de
un color rojo luego de agregar
unas gotas de reactivo de
Kovac´s o de Erlich, indica un
resultado positivo.

32. INTERPRETACION DEL MEDIO MIO
Movilidad:
-Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento mas allá de la línea
de siembra.
-Resultado negativo: crecimiento solamente en la línea de siembra.
2-Ornitina decarboxilasa:
-Resultado positivo: color púrpura.
-Resultado negativo: color amarillo. A veces se puede desarrollar un color
violáceo en la superficie del medio.
3-Prueba del indol:
La prueba de indol se realiza una vez que se ha determinado la movilidad y la
prueba de ornitina.
-Resultado positivo: color rojo al agregar el reactivo revelador.
-Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro-
amarillento.

33. DIFERENCIACIÓN DE GENERO: Edwarsiella ( + ),
Salmonella ( - ), Escherichia coli (por lo general +), de
Klebsiella-Enterobacter (por lo general -)
DIFERENCIACIÓN DE ESPECIE: Bacillus alvei ( + ), otras
especies de Bacillus ( - ), Haemophilus influenzae y
Haemophilus haemoglobinophilus (+), de otras que son ( - ),
Pasteurella multocida y Pasteurella pneumotropica ( + ), de
la Pasteurella haemolytica, y Pasteurella ureae ( - ), Proteus
mirabilis ( - ), de otras especies ( + ).

34. SIM (MOVILIDAD, INDOL y SULFURO)
FUNDAMENTO: MOVILIDAD. Sirve para ver la movilidad
de ciertas bacterias con flagelos, esto a que el agar es
semisólido. Las cepas móviles pueden apreciarse en
este medio, por la turbidez que producen alrededor de
la punción de siembra.
INDOL. Permite evidenciar la producción de Indol que
es el producto metabólico del aminoácido triptofano.

35. PRUEBA DE ÁCIDO SULFHÍDRICO. Determinar si
se libera ácido sulfhídrico (H2S), por acción
enzimática de los aminoácidos que contienen
azufre, como la peptona, cisteína, la cistina y el
tiosulfato, todos son fuente de azufre
produciendo una reacción visible de color negro,
la enzima responsable es la cisteinasa. por la
reacción de H2S con la sal pesada, citrato férrico
de amonio para darnos un precipitado negro.

36. INDICADOR. Ninguno. Medio preparado color ámbar.
pH INICIAL. pH final: 7.3 ± 0.2
PROCEDIMIENTO. Inoculación por picadura.

37. FENILALANINA
FUNDAMENTO. Determina la capacidad de la
bacteria para desaminar el aminoácido
fenilalanina en ácido fenil pirúvico por acción de
la enzima Fenilalanina desaminasa, esto va a
producir una acidificación del medio.
pH INICIAL: 7.3 ± 0.2
INOCULACIÓN: Estría en la superficie.

38. Reactivo: agregar 4-5 gotas de cloruro férrico al 10%
Reacción positiva: Aparece una coloración verde-
azulada en la superficie después de 1- 5 minutos.

39. Positivo: Especies de Proteus, Moraxella phenylpyrouvica.
Negativo: otro tipo de Moraxella.

40. UREASA
FUNDAMENTO: Determinar la capacidad de un
microorganismo de desdoblar la urea, formando dos
moléculas de amoníaco por la acción de la enzima
ureasa. Esta actividad es característica de todas las
especies de Proteus y da positivo también para Klebsiella
Positivo: Bordetella parapertussis. Bordetella
bronchispetica, Moraxellla phenylpyrouvica, Pasteurella
pneumotropica.
Negativo: Bordetella pertussis, Escherichia coli, Yersenia
pestis,

41. pH inicial: 6.8
Ácido: Color amarillo. pH 6.8
Alcalino: Color rojo a rosado pH 8.4
Medio no inoculado: Color amarillo naranja pH 6.8
INDICADOR: Rojo de fenol.
INOCULACIÓN: Asada

42. Incubar a 35 °C
Observar la reacción en 8, 12, 24 y 48 de incubación.