Este documento describe los métodos de diagnóstico de laboratorio para la sífilis en Chile. Incluye la detección microscópica de Treponema pallidum, pruebas serológicas como VDRL y RPR, y pruebas treponémicas como FTA-Abs. También discute el diagnóstico de sífilis congénita mediante pruebas en suero materno y sangre de cordón, y el uso potencial de PCR para detectar T. pallidum en sangre y LCR. Finalmente, presenta resultados preliminares sobre el diagnóst

1. Experiencia chilena de
diagnóstico de laboratorio de
sífilis
Dra. Patricia García
Laboratorio de Microbiología
Departamento de Laboratorios Clínicos

2. DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO
Larsen SA; Pope V; Johnson RE;Kennedy EJ. Manual of tests for Syphilis 1998
Detección de Treponema pallidum en tejidos
* Diagnóstico definitivo
a) Microscopía de campo oscuro*
b) Detección con anticuerpos fluorescentes*
c) Test de infectividad en conejo*
d) Reacción en cadena de la polimerasa
Pruebas Serológicas
Diagnóstico presuntivo
a) Detección de anticuerpos anti- cardiolipinas
b) Detección de anticuerpos anti- Treponema pallidum
c) Detección de DNA en sangre/LCR por PCR

3. Composición antigénica de Treponema pallidum
Blanco et al. EID 1997; 3:11-20
1. Difosfatidil-glicerol (cardiolipinas):
Componentes del tejido del hospedero (mitocondrias) incorporado a la
bacteria.
2. Antígenos treponémicos:
Lipoproteínas de OMP inmunodominantes: 47, 37, 35, 33, 17 y 15kD
Proteínas de transmembrana
PG
PF=Flagelo periplásmico
OS=membrana externa
PG= péptidoglicano

4. DIAGNOSTICO DE SIFILIS: Dificultades
• Enfermedad que cursa en etapas
• Bacteria no crece in vitro
• Sifilis congénita – Neurosífilis (1° 2° y 3° VIH
, )-
Primaria Secundaria Terciaria
Sintomática
Asintomática
Latencia
Semanas Años

5. Detección de Treponema pallidum en tejidos y exudados
MICROSCOPIA DE CAMPO OSCURO
• Método de diagnóstico definitivo.
• Test de elección cuando hay lesiones activas.
• Muestra fresca (<20 minutos): observar motilidad
• Raspado de lesiones sólo con suero fisiológico.
• ↓ sensibilidad analítica: 105 Tp/mL: Test (-) no descarta la enfermedad.
• Microscopio de campo oscuro y personal entrenado.
• No diferencia T. pallidum de otras especies no patógenas: No
realizar en muestras orales o rectales

6. Serología: CONSIDERACIONES
• SIFILIS 1° Respuesta humoral se inicia 1-3
:
semanas del desarrollo del chancro Serología es
complementaria a la
• SIFILIS 2° Altos títulos de anticuerpos
: observación directa.
• SIFILIS 3° Títulos de anticuerpos disminuyen
: Serología es la única
forma de diagnóstico
Limitaciones: Baja sensibilidad en sífilis primaria y terciaria
Baja sensibilidad en neurosífilis
Difícil interpretación en el recién nacido
Difícil interpretación en pacientes que han tenido sífilis

7. Serología: TEST NO TREPONEMICOS
Microscópica: VDRL ( Veneral Disease Research Laboratories)
Requiere preparación diaria del antígeno
Test validado el LCR: Baja sensibilidad (50%)
Macroscópica: RPR (Rapid Plasma Reagins) con carbón
Disponible comercialmente

8. VDRL y RPR pueden ser usados cuantitativos
•Niveles de anticuerpos en suero de
pacientes seguidos por 18 meses post-
tratamiento.
•Títulos varían entre VDRL y RPR por lo
que la terapia debe ser evaluada con el
mismo test inicial.
•Usualmente los títulos son mayores en
test macroscópicos que en
microscópicos.

9. Serología: RPR CUANTITATIVO
Análisis comparativo UC-ISP 1995
140
120
100
80
60
40
20
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27
SHIELD 0 0 0 0 1 1 2 2 4 4 4 4 8 8 8 16 32 32 32 64 32 64 128128 128 64 64
BEC_DICK 0 0 1 1 1 1 2 2 2 4 4 4 4 4 8 8 16 16 32 64 32 64 64 64 128 64 64
VDRL 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 4 4 4 4 4 4 8 16 32 32 32 64 128
Títulos varían entre VDRL y RPR: la terapia debe ser evaluada con el mismo
test inicial.
Usualmente los títulos son mayores en test macroscópicos que en
microscópicos.

10. Serología: TEST TREPONEMICOS
Test confirmatorios de no treponémicos: 1% Falsos (+)
Antígenos: - De membrana externa de T. pallidum
- Antígenos recombinantes
No sirven para monitoreo de terapia: Ac persisiten ↑
No sirven para re-infección
Sólo cualitativo
No sirven en Neurosífilis ?: FTA-Abs sería de utilidad
1. FTA- Abs ( Abs. Ac Treponémicos Fluorescentes)
2. MHA-TP ( Microhemaglutinación TP)
3. ELISA para Ig G, Ig M
4. Test rápidos (Latex –inmunocromatográficos)
5. Inmunoensayos en línea (LIA)
6. Western blot

11. 60 binomios madre /RN
43 Madres con sífilis en embarazo 17 madres VDRL F(+)/Serología residual
43 RN con riesgo de sífilis congénita 17 RN sin riesgo de SC
17 RN Sífilis congénita 26 RN Sífilis congénita
presuntiva descartada
13 RN sólo serología (+) 4 RN con serología (+) Madres adecuadamente
sin clínica sugerente con clínica/alt Rx, alt LCR tratadas
MADRES RN MADRES RN MADRES RN
13/13 IgG (+) 13/13 IgG (+) 4/4 IgG (+) 4/4 IgG (+) 26/26 IgG (+) 26/26 IgG (+)
10/13 IgM (+) 0/13 IgM (+) 4/4 IgM (+) 3/4 IgM (+) 16/26 IgM (+) 0/26 IgM (-)
• Ig G permite descartar falsos positivos de test no treponémicos
• IgM materna no permite diferenciar a los RN que presentaran mayor riesgo de SC
• IgM RN (+) permite realizar diagnóstico precoz de SC
• Un resultado negativo no descarta la enfermedad.

12. Evaluación de métodos de diagnóstico para sífilis
congénita
60 binomios madre/RN
120 muestras para análisis
Captura Captura Ag sonicado Ag sonicado
Ag recombinantes Inmunocromatográfico

13. Evaluación de métodos de diagnóstico para sífilis
congénita
Concordancia Test IgG= 90% → 12 discordancias sólo para MHA-Tp: falsos (-)
Concordancia Test IgM= 88%
3 discordancias absolutas: el (+)
pathozyme y (-) Captia era SC
sintomática
• Los 3 ELISA y el test inmunocromatográfico mostraron mejor sensibilidad que MHA-Tp
• Pathozyme M presenta mejor sensibilidad que Captia IgM en SC

14. Diagnóstico de sífilis congénita al
momento del parto:
¿Suero materno o sangre de
cordón?
Fernando Abarzúa , Cristián Belmar J, Alonso Rioseco R, Jacqueline Parada B, Teresa Quiroga G, Patricia
García C.
Departamento de Obstetricia y Ginecología
Departamento de Laboratorios Clínicos
Facultad de Medicina. Pontificia Universidad Católica de Chile
En Prensa, Rev Chil Infectol

15. Descripción de los pacientes que ingresaron al estudio
Junio 1999- Agosto 2000
Muestras suero materno y sangre de cordón
Binomios atendidos Maternidad UC
Screening con RPR
Suero materno o Sangre de Cordón (+)
Test Treponémicos confirmatorios
MHA-Tp
ELISA Captia IgG
ELISA Captia IgM
Visita por el especialista
37 reactivos
(1.3%)
Grupo I Grupo II Grupo III
11 binomios 9 binomios 17 binomios

16. Resultados de los test no treponémicos y treponémicos en los
binomios.
3.314 partos
Muestra en el binomio: Sólo muestra de cordon:
2.741 (83%) 573 (17%)
2.704 no reactivos 37 reactivos
(98.7%) (1.3%)
Grupo I Grupo II Grupo III
11 binomios 9 binomios 17 binomios
7/11 (64%) 4/11(36%) 9/9 (100%) 11/17 (65%) 6/17 (35%)
verdaderos (+) falsos (+) falsos (+) falsos (+) verdaderos (+)
Sífilis materna RPR RPR RPR suero Madre Sífilis materna
6 RN 3 RN
recibieron recibieron
tratamiento tratamiento

17. Resultados de los test no treponémicos según el tipo de muestra
en que se realiza la pesquisa en los 9 casos catalogados como
sífilis congénita
9 RN catalogados como sífilis congénita
9 SC / 2741 partos
Tasa SC = 3.3/1000 RN vivos
6/9 (67%) 3/9 (33%)
RPR sangre materna R RPR sangre materna R
RPR sangre cordón R RPR sangre cordón NR

18. Detección de Treponema pallidum en sangre y LCR
REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)
• Varios PCR dirigidos hacia distintas regiones:
a) Año 1991: Grupo de la Universidad de Texas
PCR que amplifica el gen que codifica para la OMP de 47 kD.
Sensibilidad analítica de 10-50 microorganismos (no mejor que RIT)
b) Año 1997: Grupo de la Universidad de Washington
PCR transcriptasa reversa (TR-PCR): ↑ de la sensibilidad (10-3 Tp) pero
PCR a partir de RNA son laboriosos y riesgo de contaminación.
c) Año 2001: Grupo del CDC
PCR dirigido contra el gen de DNA polimerasa I: alta sensibilidad y
especificidad.

19. Detección de Treponema pallidum en LCR y suero por
PCR en el diagnóstico de Sífilis congénita y neurosífilis
1 1335
5´ Gen de T. Pallidum 47 kD 3´
47-1 47-2
627-648
1284-1263
627 658 pb 1284 Producto de PCR
47-3 47-4
692-713 1187-1166
692 496 pb 1187 Sonda interna
•Target: Fragmento de 658 pb del gen que codifica para la Lp de 47kD.
• Muestra: sangre, LCR; LA y orina
• Lisis: alcalina
• Extracción: Fenol-cloroformo c/ppt
• Detección producto PCR: EGA y Dot blot (Especificidad)
• Límite de detección: Menor que RIT.
• Problemas con inhibidores en la muestra
Sanchez PJ; Wendwl GD; Grimprel E, et al. . JID 1993 ;167:148-157

20. Detección de Treponema pallidum en
LCR por PCR y WB en el diagnóstico
de neurosífilis
García P, Araya L. Soto J, Poggi H, Lagos M, Vásquez P, Urra L, León P, Pérez C.
Depto. Laboratorios Clínicos, Depto. Medicina Interna,
Pontificia Universidad Católica de Chile.
Neurología, Infectología, Hospital San Juan de Dios.
Laboratorio Espiroquetas, ISP
2004-2006

21. Detección de Treponema pallidum en LCR por PCR y WB
en el diagnóstico de neurosífilis
32 pacientes con infecciones del SNC LCR claro
17 pacientes con sospecha de neurosífilis 5 m.herpética, 5 m. tuberculosa y 5 m. criptocococica
VDRL (+) en LCR 15 WB (-)
IgM por WB para 4 proteínas recombinantes de Tp
rTpN47, rTpN17, rTpN15 y rTmpA
3 niños con sospecha de sífilis congénita 14 adultos
3 WB (+) 12 WB (+) 2 WB (-)
VDRL R 1:8

22. Diagnóstico de la infección por T. pallidum en pacientes
con sífilis mucocutánea y pacientes con neurosífilis
mediante reacción en cadena de la polimerasa.
Resultados Preliminares
García P, Grassi B, Fich F, Araya L, Salvo A. Soto J, Poggi H, Lagos M, Vásquez P,
Urra L, León P, Pérez C.
Depto. Laboratorios Clínicos, Depto. Dermatología, Depto. Medicina Interna,
Pontificia Universidad Católica de Chile.
Neurología, Infectología, Hospital San Juan de Dios. ETS Hospital Sótero del Río
Laboratorio Espiroquetas, ISP
Junio 2007
Presentado en el XXIII Congreso Chileno de Infectología

23. Antecedentes:
La Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) permite detección
directa de ADN bacteriano alternativa para diagnóstico de
sífilis mucocutánea (SMC) y neurosífilis (NS)
– 2 parejas de partidores para genes tpn47 y polA
– Sensibilidad descrita para úlceras >95%
para LCR 31 – 65%
Objetivo:
Implementar la reacción en cadena de la polimerasa de
Treponema pallidum para el diagnóstico de sífilis mucocutánea y
neurosífilis.

24. Junio 05 –Julio 07
SMC NS
Muestras: úlceras de piel Muestras: LCR
y mucosas
Diagnóstico: clínica,
Diagnóstico: clínica, RPR VDRL en LCR, respuesta
en suero y MCO a tratamiento y ausencia
de otra enfermedad.
PCR
3 parejas de partidores:
1 tpn47 y 2 polA
Sensibilidad analítica: Sensibilidad clínica:
cepa de Referencia (Nichols) muestras de pacientes

25. Resultados
• Evaluación Sensibilidad
Analítica: K03-K04: partidores 47kDa
– Partidores para tpn47 1,75
espiroquetas/tubo
– 10 veces superior que una
pareja de partidores para
polA F1-R1: partidores polA
– 100 veces superior a la otra
pareja de partidores para
polA

26. Resultados neurosífilis
30 pacientes con Sospecha NS
23 otras
7 Diagnóstico NS
enfermedades
♂ = 86% ♂ = 78%
VIH(+) = 57% VIH(+) = 70%
Cel. ↑= 29% Cel. ↑ = 4%
VDRL = 1/2 a 1/8 VDRL = NR
NS (+) NS (-) Total
PCR (+) 3 0 3
PCR (-) 4 23 27
Total 7 23 30
Sensibilidad = 3/7 = 43% Especificidad = 0/23 = 100%

27. Resultados sífilis mucocutánea
1 2 3 4 5 6 7 1: PM
2: CN
3: LCR paciente
4: LCR paciente
5: Lesión plantar
6: CN
7: CP (1/1000)
1 2 3 4 5 6
1: PM
2: CN
3: Ulcera glande
4: Ulcera perianal
5: CP (1/1000)
6: CP (1/1000)
SMC (+) SMC (-) Total
12/15 tenían microscopía de
PCR (+) 13 0 13 campo oscuro (MCO):
5/12 fue positiva.
PCR (-) 2* 5 7 Sensibilidad:42%
Fue negativa en las 2
Total 15 5 20 muestras negativas por PCR
*1 PCR inhibido
Sensibilidad = 13/15 = 87%% Especificidad = 0/5 = 100%

28. DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO
Conclusión
Test no treponémicos cuantitativos permiten el seguimiento
del tratamiento (con el mismo test).
Están disponibles comercialmente Test treponémicos con
excelente rendimiento para confirmación y sífilis 3° o latente.
En sífilis congénita IgM (ELISA) puede ser de gran utilidad en
suero.
El screening al momento del parto debe ser realizado en
sangre materna y no con sangre de condón.
PCR ni WB no ha mostrado ser mejor que VDRL para el
diagnóstico de neurosífilis en LCR.
PCR excelente test para diagnóstico de sífilis mucocutánea,
donde la MCO sólo tiene una sensibilidad < 50%