Este documento describe los métodos de diagnóstico y seguimiento de la infección por VIH. Explica las pruebas de tamizaje como ELISA y pruebas rápidas, la prueba confirmatoria de Western Blot, y pruebas complementarias como recuento de CD4, carga viral, y exámenes de rutina. También cubre factores que afectan los resultados, prevención, y medidas de bioseguridad.

1. VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA (V.I.H.) DIAGNOSTICO LABORATORIAL

2. PRUEBAS LABORATORIALES Diagnóstico de la Infección del VIH Screening (tamizaje) Confirmatorio Pruebas complementarias para el seguimiento de paciente con la infección Recuento de de Linfocitos CD4/CD8 Carga Viral Pruebas de Rutina Hemograma Orina Baciloscopia Parasitológico Otros leucopenia linfopenia trombocitopenia VSG elevada

3. DIAGNOSTICO DE LA INFECCION POR EL VIH

4. METODOS METODOS DIRECTOS - Aislamiento viral: Cultivo viral H9 - PCR : Detección de fracciones antigénicas del virus ó genoma viral METODOS INDIRECTOS - Detectan la presencia de anticuerpos específicos contra el VIH por medio de técnicas serológicas. * TEST RAPIDOS * IFI * ELISA * WESTERN BLOT * LIA La técnica mas utilizada actualmente para el screening serológico es el test de ELISA y en menor proporción los Test Rápidos (OMS)

5. TAMIZAJE SEROLOGICO ELISA Negativo Positivo/Indeterminado Repetidamente Correr una nueva muestra Repetidamente POSITIVO Etapa (1) WESTERN BLOT Negativo Indeterminado Positivo Correr una nueva muestra 30 a 60 días después Repetir etapas 1 y 2 Etapa (2)

6. TEST VENTAJAS DESVENTAJAS PRUEBAS RAPIDAS Buena sensibilidad Económicas y rápidas Baja Especificidad CULTIVOS VIRALES Buena especificidad Lentas, baja sensibilidad Complicado. Costo ELISA Buena Sensibilidad y Especificidad Sencillo y rápido Periodo de Ventana Costo WESTERN BLOT Confirmatorio, alta Sensibilidad y Especificidad. Seguro Elevado Costo Contaminación Especificidad Costo Genotipificación Periodo de Ventana PCR

7. PRUEBA RAPIDA PARA VIH (INMUNOCROMATOGRAFIA) Gaby Fabiola Mamani V. BIOQUIMICA

8. PRUEBA RAPIDA PARA VIH (INMUNOCROMATOGRAFIA) Objetivo “ Detectar anticuerpos anti-VIH ½ y no componentes virales ” Fundamento - Método cualitativo indirecto basado en el principio de adsorción selectiva de inmunoglobulinas.

9. Prueba rápida para VIH

10. Prueba rápida para VIH

11. Prueba rápida para VIH

12. Prueba rápida para VIH 8. Coloque la muestra de sangre completa colectada en el capilar en la superficie absorbente, y espere un minuto

13. Prueba in Vitro Tarjetas de ensayo recubiertas de antígeno recombinante del VIH 1 y VIH 2 y de péptidos sintéticos. Laboratorios Abbott

15. ENZIMOINMUNOENSAYO (ELISA)

16. TEST DE ENZIMOINMUNOENSAYO (ELISA) Objetivo “ Detectar anticuerpos anti-VIH ½ y no componentes virales ” Fundamento - Método enzimático, cualitativo indirecto basado en el principio de “Sandwich” en un solo paso

17. FUNDAMENTO H 2 SO 4 Antígenos VIH1/2 Anticuerpos Suero o Plasma Conjugado Antígenos HIV1/2 marcado con Enzima HPR Sustrato (Sustrato Enzimático + Cromógeno)

18. PLACA DE ELISA POSITIVO Presencia de anticuerpos HIV 1/2 (color amarillo) NEGATIVO Ausencia de Anticuerpos para VIH1/2 (Sin color)

19. L E C T O R D E E L I S A Lectura de la reacción final Se lee a 450/630 nm

20. INTERPRETACIÓN DE LA PRUEBA CALCULOS (Organón Teknika) Validación del Test * CN < 0.250 (Control Negativo) * CP1 - CNx > 0.400 (Control Positivo) * El CP2 - CNx > 0.400 * El Cutt Off = CNx + 0.100 = valor “x” Valores mayores al Cutt Off, son Positivos Valores menores al Cutt Off, son Negativos Valores +/- 10% del Cutt Off, Indeterminados

21. WESTERN BLOT (TEST CONFIRMATORIO)

22. TEST DE WESTERN BLOT Objetivo - Detectar anticuerpos específicos contra el VIH1/2 Fundamento Test Inmunolineal o ELISA en banda, que detecta anticuerpos Lisado viral de células infectadas, sometidos a electroforésis en gel de poliacrilamida y transferido a hojas de nitrocelulosa

23. POSITIVO Si dos bandas presentan intensidad >1+ en relación al control , Una banda de envoltura y la p24 Presencia de bandas gp120, gp41, p31, p24 y p17 para HIV1 Proteínas gp105 y gp36 para HIV2 Criterios de interpretación gp120 gp41 p31 p24 p17 3+ 1+ +/- Control gp105 gp36

24. INDETERMINADO Si dos o mas bandas presentan intensidad +/- Si una banda presente intensidad <1+ y el resto son negativos en relación al control Criterios de interpretación Gp120 p24 NEGATIVO Si todas las bandas presentan valoración <+/- Ausencia de proteínas 3+ 1+ +/- Control 3+ 1+ +/- Control

25. PRUEBAS COMPLEMENTARIAS PARA EL SEGUIMIENTO DE PACIENTES POSITIVOS

26. PRUEBAS COMPLEMENTARIAS Test para el seguimiento de pacientes VIH Positivos Recuento de Linfocitos CD4/CD8 Carga Viral

27. RECUENTO DE LINFOCITOS CD4/CD8 Citometría de flujo Tamaño celular Complejidad interna o gránulos internos Intensidad relativa de la Fluorescencia ELISA (Enzimoinmunoensayo) Inmunofluorescencia (IFI)

28. CITOMETRO DE FLUJO EPICS XL PECKMAN COULTER

29. Fundamento del Citómetro de Flujo

30. El Recuento de CD4/CD8, tiene como finalidad de evaluar el estado inmunológico de la persona infectada Valores de referencia: Células CD4+ varían entre 600 a 1500 células por mm3 de sangre Células CD8+ varia entre 300 a 800 células por mm3 de sangre Relación de células CD4+ vs. CD8+ es de 2:1 PARAMETROS DEL RECUENTO DE CELULAS CD4/CD8

31. Superiores a 500 celulas CD4+ (Buen estado de salud) Entre 200 y 500 celulas CD4+ Incrementa riesgo de Herpes, Aftas, Infecciones en piel, Infecciones pulmonares, TB Enfermedades Oportunistas Pneumonia por Pneumocistis Carini, Citomegalovirus Entre 50 y 200 células CD4+ Se incrementa el riesgo por PCP y otras enfermedades oportunistas Se recomienda ya el tratamiento preventivo Inferiores a 100, considerar el tratamiento preventivo para enfermedades oportunistas e infecciones masivas por hongos. Inferiores a 50 células CD4+ Se incrementa riesgo de enfermedades oportunistas Continuar con terapias preventivas VALORES ABSOLUTOS

32. CARGA VIRAL

33. DETECCIÓN DE RNA VIRAL AMPLICOR HIV MONITOR TM Test (Roche Diagnostic Systems) Quantiplex TM HIV RNA Assay (Chiron Corporation) NASBA HIV-1 RNA QT (Organon Teknika) CARGA VIRAL

34. La carga viral nos indica la actividad del virus Herramientas Niveles de RNA Viral Nivel de riesgo del desarrollo de la enfermedad Reacción a la terapia antirretroviral: Iniciar, modificar o incrementar medicamentos Si la droga o medicamento esta dando o no resultado y cuando empieza a perder su efectividad CARGA VIRAL

35. Muestra de sangre (plasma sanguíneo) Múltiples copias del virus presente en la muestra Proceso matemático se da el número estimado de las partículas virales presentes en la muestra (200 –1.000.000 copias/ml) Margen de error del 20% Utilizar el mismo laboratorio y examen para el seguimiento y los cambios de la carga viral CARGA VIRAL

36. Los niveles altos de RNA Viral se correlacionan con bajos recuentos de Linfocitos CD4+ Niveles superiores a 100.000 copias/ml propensas a desarrollar la enfermedad SIDA Niveles inferiores a 10.000 copias/ml disminuye el riesgo a la enfermedad CARGA VIRAL

37. CARGA VIRAL 2000 ul 1000 ul 200 ul Volumen de plasma 240 400 200 Nivel de detección mínimo (Sensibilidad copias/ml) 500-800.000 400-10.000.000 200-750.000 Rango de detección QUANTIPLEX HIV-1 RNA NASBA HIV-1 RNA QT Amplificación isotérmica de RNA AMPLICOR (Roche) RT-PCR METODO

38. DIAGNOSTICO PEDIATRICO

39. La presencia de IgG materna en el recién nacido dificulta el diagnóstico. Seguimiento durante 15 a 18 meses con WB en forma seriada. Detección de antígeno, aislamiento viral y la PCR son de utilida, pero debe ser evaluado con: Clínico Inmunológico

40. Factores que pueden influir en los resultados: Laboratorio Reactivos Tiempo de procesamiento Horario de la toma de muestra Presencia de infecciones Falta de sueño Estrés Otros factores biológicos

41. Para el diagnóstico de la Infección por el VIH PRUEBA RAPIDA, nos permite realizar el tamizaje serológico, mediante la detección de anticuerpos Anti -VIH1/2, con buena sensibilidad. ELISA, nos permite detectar los anticuerpos Anti-VIH1/2, con una alta sensibilidad y especificidad Es importante realizar el Test Confirmatorio de Western Blot, para dar un resultado final CONCLUSIONES

42. Para el seguimiento de pacientes con la infección, es importante: El Recuento de Linfocitos CD4/CD8, debe ir paralelo a la prueba Carga Viral Evaluar el estado clínico del paciente Realizar seguimiento al paciente VIH positivo, en coordinación de: Médico-Clínico, Laboratorio y Consejería Adherencia permanente CONCLUSIONES

43. PREVENCIÓN Promoción a todo nivel social del uso del preservativo Tratamiento y prevención de otras enfermedades de transmisión sexual Programa de reparto de jeringas para drogadictos

44. BIOSEGURIDAD TODO MATERIAL BIOLOGICO DEBE SER CONSIDERADO Y MANIPULADO COMO POTENCIALMENTE INFECCIOSO

45. Gracias