Este documento describe el diagnóstico de laboratorio de la sífilis. Explica que la sífilis es causada por la bacteria Treponema pallidum. Luego describe las pruebas serológicas como las pruebas no treponémicas (VDRL, RPR) y treponémicas (EIA, FTA-ABS, TPPA), así como métodos de detección directa como PCR y DFA-TP. Finalmente, aborda el diagnóstico de sífilis congénita y neurosífilis en recién nacidos y LCR respectivamente.

1. DIAGNOSTICO
LABORATORIAL DE SIFILIS

3. TREPONEMA PALLIDIUM
Subespecie: Pallidum
Familia Spirochetaceae,
Microorganismo unicelular, que
puede medir de 6 a 15 μm de longitud y
aproximadamente unos 0,2 μm de
diámetro, presenta una estructura
helicoidal, flexible, móvil y que es
capaz, al igual que la mayoría de
microorganismos, de dividirse por fisión
binaria.

4. EPIDEMIOLOGIA
TRANSMISION:
 Via sexual
 Vertical
EPIDEMIOLOGIA
 6 millones de nuevos casos al año de personas entre 15 – 49 años
 300.000 muertes fetales y neonatales se atribuyen a la sífilis
 215.000 bebés corren un mayor riesgo de muerte prematura
6 MILLONES 300000 215000

7. DIAGNOSTICO
1. PRUEBAS SEROLÓGICAS PARA DETECTAR LA SÍFILIS
Principal método de cribado, diagnóstico y seguimiento de la actividad de la enfermedad.
PRUEBAS TREPONEMICAS
PRUEBAS NO TREPONEMICAS

8. Pruebas no treponémicas
.e
Se realizan con sueros diluidos en serie.
Detecta anticuerpos totales (IgM e IgG) dirigidos contra antígenos lipoidales (cardiolipina y la lecitina)
Estos anticuerpos son inespecíficos y no suelen ser detectables hasta unas semanas después de la infección
Laboratorio de Investigación de Enfermedades Venéreas (VDRL),
la reagina plasmática rápida (RPR),
la reagina sérica no calentada (USR)
la prueba de suero no calentado con rojo de toluidina (TRUST)
Son cuantitativas y se informan en títulos.
Se utilizan para controlar la actividad de la enfermedad
Una disminución de 4 veces o más en el título de seguimiento con respecto al título de referencia analizado en paralelo
utilizando el mismo ensayo, por ejemplo, de 1:8 a 1:2, o la seroreversión indican un tratamiento exitoso
Es útil para el diagnóstico de reinfección o recaída, como se pone de manifiesto cuando el título se multiplica por
4 o más
Las pruebas no treponémicas no están automatizadas y dependen de una
interpretación subjetiva

9. • es una prueba de microfloculación para detectar anticuerpos en el suero de los pacientes
contra la re- agina, es decir , un antígeno formado por una combinación de cardiolipina,
lecitina y colesterol.
• Requiere microscopía (magnificación x100) para su interpretación .
• Aceptable que puede realizarse en el líquido cefalorraquídeo (LCR) para el diagnóstico de la
neurosífilis
• requiere la preparación diaria de la suspensión de antígeno y el precalentamiento del
suero a 56°C durante 30 minutos para inactivar el complemento
VDRL
• es una prueba basada en una tarjeta de macrocultivo que utiliza el mismo antígeno que la
VDRL, excepto que está unido a una partícula de carbón y utiliza
partículas de carbón vegetal como agente visualizador.
• Una reacción positiva aparece como un grumo negro sobre un fondo blanco. La RPR es una
de las pruebas no treponémicas más realizadas
• El TRUST es similar al RPR pero utiliza rojo de toluidina como agente visualizador en lugar de
carbón. Tiene una sensibilidad similar pero una especificidad ligeramente mejor
RPR

10. Pruebas treponÉmicas
Son ensayos CUALITATIVOS realizados en suero .
Detectan anticuerpos contra una variedad de antígenos de T. pallidum
Los resultados se suelen comunicar como reactivos o no reactivos, sin títulos.
Son más sensibles en las primeras etapas de la infección y, una vez que son positivas,
suelen permanecer activas indefinidamente.

11. • Prueba de cribado automática.
• Utilizan antígenos treponémicos recombinantes (Tp15, Tp17 y
Tp47) para detectar IgM, IgG o ambas
• La sensibilidad y especificidad generales son comparables a las
del ensayo de aglutinación de partículas de T. pallidum (TPPA) o
de absorción de anticuerpos fluorescentes (FTA-ABS)
• Está disponible en formatos de captura en sándwich y de ensayo
competitivo
Inmunoensayo enzimático IgG/IgM.
• Utiliza partículas paramagnéticas recubiertas con antígeno
recombinante para capturar IgM y/o IgG, seguido de la adición
de un sustrato de quimioluminiscencia para generar una señal
relativa en proporción a la cantidad del complejo antígeno-
anticuerpo unido.
• TIEMPO DE RESPUESTA < 1 HORA
El inmunoensayo de quimioluminiscencia (CLIA)

12. PRUEBA DE INMUNOBLOT.
• Prueba confirmatoria
• Se trata de un Western blot, altamente específico y capaz de detectar IgM e IgG por separado
• Es un inmunoblot original que utiliza el organismo de células enteras como antígeno y detecta anticuerpos contra los
principales antígenos de superficie de T. pallidum (TpN15, TpN17, TpN44.5 y TpN47).
• Es laborioso y puede ser difícil de interpretar debido a las reacciones no específico
• INNO-LIA SYPHILIS  inmunoensayo de línea que detecta tres antígenos recombinantes (TpN15, TpN17 y TpN47) y un
péptido sintético con una sensibilidad y especificidad cercanas al 100%. Requiere una incubación de una noche.
• VIRABLOT utiliza antígenos recombinantes similares a los de INNO-LIA y un antígeno adicional específico (VDRL),
pueden completarse en 2 horas. Ambos tienen un mejor rendimiento y concordancia con otros ensayos treponémicos
(EIA, FTA-ABS y TPPA).
• MarDx, que utiliza lisado completo de T. pallidum.
ANTICUERPO DE ABSORCIÓN FLUORESCENTE IGG/M.
• Se trata de una inmunofluoresencia indirecta.
• Pretratamiento del suero con un absorbente (extracto del Treponema phagedenis no.se añaden diluciones de sueros
de prueba a portaobjetos punteados con organismos fijados de un extracto de cultivo de T. pallidum (cepa Nichols) se
utiliza inmunoglobulina antihumana conjugada con fluorescencia para visualizar los organismos marcados con
anticuerpos
• TIEMPO :1,5 horas en completarse.
• El FTA-ABS no se recomienda como prueba de cribado (interpretación subjetiva) la incapacidad de automatizar un gran
número de muestras y al requisito de un microscopio de fluorescencia.
• Todavía pueden producirse reacciones no específicas, dando un resultado falso.

13. • (MHA-TP) y el ensayo de hemaglutinación de T.pallidum (TPHA) son ensayos manuales de
hemaglutinación indirecta que se realizan en placas de microtitulación utilizando eritrocitos
de oveja y de ave sensibilizados con el antígeno de T. pallidum, respectivamente, que se
aglutinan con anticuerpos IgM e IgG antitreponema
• El suero se mezcla primero con diluyente absorbente hecho de treponemas de Reiter no
patógenos y otros absorbentes para reducir las posibles reacciones falsas positivas El suero
que contiene los anticuerpos reticulará los glóbulos rojos y formará una alfombra lisa en la
base del pozo .
El TPPA ha sustituido tanto al MHA-TP como al TPHA, ya que tiene una mejor sensibilidad y
una sensibilidad comparable a la del FTA-ABS . También se realiza en placas de microtitulación
y suele requerir un mínimo de 2 h de incubación .
Ensayo de microhemaglutinación, ensayo de hemaglutinación de T.
pallidum y ensayo de aglutinación de partículas de T. pallidum.
• Se trata de un ensayo citométrico automatizado de flujo basado en la tecnología de perlas
fluorescentes de Luminex que permite un alto rendimiento.
• Mediante la citometría de doble láser, la identidad y la cantidad de anticuerpo de captura se
determinan por la firma defluorescencia de las perlas teñidas y su intensidad
Inmunoensayo de flujo múltiple

14. • La IgM antitreponémica puede ser un indicador de infecciosidad reciente.
en adultos y en neonatos.
• Después del tratamiento, suele disminuir alrededor de los 4 meses, pero puede
permanecer elevada durante más tiempo si la enfermedad no se trata
• La detección de IgM antitreponémica se limita en gran medida a casos
seleccionados, principalmente para el diagnóstico de la sífilis genital. Los métodos
para la detección de IgM antitreponémica
• Una IgM antitreponémica reactiva puede indicar una sífilis activa, pero no excluye la
posibilidad de una infección crónica debido a la liberación prolongada de IgM
• El uso de la IgM antitreponémica en el diagnóstico de la sífilis congénita.
IgM antitreponémica.

15. Algoritmos de diagnóstico de la sífilis.

16. 2. MÉTODOS DE DETECCIÓN DIRECTA
Cultivo
• T. pallidum no puede cultivarse en los medios de cultivo habituales del laboratorio
• La prueba de infectividad en conejos, que implica la inoculación de una muestra clínica en los testículos de conejos vivos, es
el único método disponible para el aislamiento de T. pallidum.
• No es práctico para el diagnóstico de rutina debido al tiempo y al coste, a la necesidad de personal capacitado y a las
cuestiones éticas de utilizar animales vivos.
PRUEBAS DE AMPLIFICACIÓN DEL ÁCIDO NUCLEICO (NAAT)
• Detecta el ADN de T. pallidum se utilizan para la detección directa a fin de mejorar la sensibilidad del diagnóstico.
• PCR, la PCR anidada, la PCR cuantitativa y la PCR de transcriptasa inversa
• Ninguno de estos ensayos está todavía disponible en el mercado.
• complementaria a la serología en el diagnóstico de la sífilis temprana, la reinfección y la sífilis congénita
• La especificidad oscila entre el 97% y el 100%, pero la sensibilidad varía según el tipo de muestra y los estadios de la
infección
La mayor sensibilidad global de la detección de T. pallidum por NAAT se observó en
las lesiones primarias, pero se redujo en las lesiones de la sífilis secundaria, lo que sugeriría un papel
limitado de la detección por PCR más costosa que la serología en el diagnóstico de esta
enfermedad.

17. • Ensayo de inmunofluorescencia que utiliza anticuerpos monoclonales o policlonales para
detectar los antígenos de T. pallidum
directamente de la muestra.
• Para la interpretación se requiere una microscopía de inmunofluorescencia
DFA-TP no depende de la motilidad y es más fácil de interpretar.
• También es capaz de distinguir entre T. pallidum y espiroquetas no patógenas, pero no
otros treponemas patógenos.
• NO ESTÁN AUTORIZADOS POR LA FDA
ANTICUERPO FLUORESCENTE DIRECTO PARA T . PALLIDUM. (DFA-TP)

18. SIFILIS CONGENITA
DIAGNOSTICO
Las modalidades de prueba más utilizadas son la
serología emparejada de la madre y
el recién nacido, la PCR y la histopatología de la
placenta
No usar sangre del cordón umbilical, ya que podría
contener sangre materna, lo que daría lugar
a falsos positivos
Todas las pruebas de IgG basadas en el treponema
tienen poco valor en el recién nacido debido a la
transferencia materna de IgG
En su lugar, se realizan pruebas paralelas de
anticuerpos no treponémicos (VDRL o RPR) a partir de
los sueros del recién nacido y de la madre para
establecer el diagnóstico, como demuestra un título
mínimo de 4 veces o más en el recién nacido en
comparación con el título materno.
Se recomienda el seguimiento serológico a los 3 y 6
meses para controlar la respuesta tras el tratamiento,
así como en los casos sospechosos con un examen
clínico
y una investigación normales
El diagnóstico puede excluirse a los 6 meses si las
pruebas no treponémicas se vuelven no reactivas en
un niño no tratado. La serología materna transmitida
puede permanecer detectada durante 15 meses en el
niño. La detección después de este período implica una
sífilis congénita

19. neurosifilis
En 2017, la incidencia de la neurosífilis en los Estados Unidos se estimó en 9,5 casos por cada 100.000 personas y, según los
informes,
era dos veces más común en pacientes coinfectados por el VIH que en aquellos con sífilis sola.
El diagnóstico de laboratorio de la neurosífilis requiere un examen de suero y LCR en el contexto de un síndrome clínico consistente.
Se necesitan pruebas serológicas de infección actual o pasada por T. pallidum.
Se espera que las pruebas de anticuerpos treponémicos sigan siendo positivas durante períodos prolongados tras la infección, pero
las pruebas de anticuerpos no treponémicos pueden ser negativas en la neurosífilis tardía.
Los hallazgos en el LCR:
◦ Pleocitosis del LCR > 5 células/mm3 tiene una sensibilidad del 95% pero carece de especificidad, especialmente en el contexto de la
coinfección por el VIH
◦ Proteínas elevadas >45 mg/dl es inespecífico y menos sensible que la pleocitosis (sensibilidad del 90%)
◦ VDRL reactivo en el LCR, es la prueba no treponémica más utilizada para la neurosífilis debido a su especificidad del 100% en ausencia de
contaminación sanguínea .Sin embargo, la sensibilidad es pobre, según se informa entre el 30% y el 70%
◦ La prueba CSF-RPR no se recomienda debido a una sensibilidad aún más baja.
◦ El FTA-ABS también puede realizarse en el LCR, sólo se recomienda cuando el LCR-VDRL no es reactivo . El FTA-ABS en LCR tiene
una alta sensibilidad (; 99%) pero una baja especificidad para la neurosífilis debido a la transferencia pasiva del antitreponemal.

20. conclusiones
1. El diagnóstico de laboratorio de la sífilis sigue siendo predominantemente serológico.
2. Las pruebas serológicas más utilizadas son las treponémicas utilizadas en combinación con
las no treponémicas para determinar la actividad de la enfermedad.
3. Se sugiere que se utilicen inicialmente dos ensayos treponémicos, por ejemplo, EIA/CLIA IgG y
TPPA, para confirmar la presencia de sífilis.
4. La detección molecular tiene un papel importante, especialmente en las pruebas de detección
de sífilis congénita en la placenta. Sin embargo, no sustituye a la serología.
5. El diagnóstico de laboratorio de la sífilis congénita y la neurosífilis se basa en gran medida en
la serología preexistente, las características clínicas y el historial de tratamiento.

21. bibliografía
The Laboratory Diagnosis of Syphilis
Ferris Satyaputra,a,d Stephanie Hendry,a Maxwell Braddick, b Pirathaban Sivabalan,c Robert
Norton. Journal of clinical microbiology