Técnica Histológica y microscopia
Proceso histopatológico.
1º Paso: Obtención un
tejido.
Mediante:
• Biopsia; tejido vivo.
•Autopsia; tejido muerto.
*Tomando en cuenta
factores de pronostico y
riesgo.
2º Paso: Fijación.
• En general obtenida mediante el empleo de sustancias químicas
individuales o mezclas de estas.
• El fijador de uso más común es la formalina (formol/formaldehído). Al
10%, penetra 1 cm cada 24hrs. Este fijador no reacciona con los lípidos,
por lo tanto es un mal fijador de las membranas.
• El líquido de Bouin es una solución alternativa.
Se utiliza para:
• Suspender el metabolismo celular
• Impedir la degradación
• Destruir los microrganismos patógenos como las bacterias, hongos o los
virus.
¿Por qué el formaldehído preserva la estructura general de la célula?
*Lo logra como consecuencia de la formación de enlaces cruzados o la
desnaturalización de los grupos aminos de las proteínas (con frecuencia, de
lisina)
3º Paso: Inclusión. Elección del corte o muestra
adecuada de una biopsia.
4º Paso: Deshidratación. En una serie de
soluciones alcohólicas (alcohol absoluto).
5º Aclarado. Se utilizan solventes orgánicos
(xileno o tolueno).
6º Parafinización.
Histoquinete
• Es un instrumento que
hace más ágil el
proceso de los métodos
histológicos, realiza los
pasos de fijación,
deshidratación,
aceleración e inclusión.
7º Paso: Corte y tinción.
• Una vez para realizada
la parafinización, se
crea un bloque llamado
taco.
• El taco se coloca en el
microtomo, que es una
maquina cortadora
especial. (corte delgado
de 5 a 15 micrómetros)
Bloque
(taco)
celda
• Los cortes se montaran sobre portaobjetos
con albumina (Pegamento).
• De nuevo deben disolverse en xileno y
tolueno.
• Luego se tiñen.
• La hematoxilina y la eosina, se utilizan en histología
principalmente para poner en evidencia las características
principales estructurales. Excepto:
• Elastina.
• Fibras reticulares.
• Membranas basales.
• Lípidos.
Y pueden usarse otros métodos.
8º Paso: Interpretación (resultados).
Histoquimica y citoquimica
• Tienen fundamento en la union especifica de un colorante
fluorescente en la celula.
Composición química de un tejido:
Elementos que perduran luego de la fijación
• Nucleoproteínas
• Proteínas intracelulares del cito esqueleto
• Proteínas extracelulares
• Complejos de fosfolipidos y proteínas(o carbohidratos) en
las membranas.
*Todas ellas macromoleculas.
Que desaparecen luego de la
fijación:
• Glucogeno
• Proteoglucogenos y
glucosaminoglucanos
Colorantes ácidos y básicos.
• La capacidad de reaccionar a un
colorante básico (de carga
negativa) se llama basofilia.
• Y, los que reaccionan con
colorantes ácidos (de carga
positiva) se llaman acidofilia.
• Metacormasia.- Es el fenómeno
por el cual un colorante cambia,
por altas concentraciones de
polianiones. polímero que posee
electrolitos
/no se ve, mejor ve el
libro xD/
• Inmunocitoquímica.- técnicas que permiten
demostrar la reacción entre un antígenos y un
anticuerpo. Se emplea para la diferenciación de
tumores.
• Técnicas de hibridación.- se utiliza para
identificar y localizar secuencias de ADN en una
mezcla compleja y que son complementarias a
otro fragmento de ADN llamado sonda.
• Radioautografía.-Se utiliza para localizar material
radiactivo en los tejidos.
Microscopia Óptica
• Microscopio de campo claro:
es actualmente el microscopio
más utilizado por los
estudiantes, ello es el
microscopio descendente de
los utilizados en el siglo XIX.
Otros microscopios:
• ME
• MET la resolución
. aumenta
• MEB

Técnica histológica y microscopia

  • 1.
  • 2.
    Proceso histopatológico. 1º Paso:Obtención un tejido. Mediante: • Biopsia; tejido vivo. •Autopsia; tejido muerto. *Tomando en cuenta factores de pronostico y riesgo.
  • 3.
    2º Paso: Fijación. •En general obtenida mediante el empleo de sustancias químicas individuales o mezclas de estas. • El fijador de uso más común es la formalina (formol/formaldehído). Al 10%, penetra 1 cm cada 24hrs. Este fijador no reacciona con los lípidos, por lo tanto es un mal fijador de las membranas. • El líquido de Bouin es una solución alternativa. Se utiliza para: • Suspender el metabolismo celular • Impedir la degradación • Destruir los microrganismos patógenos como las bacterias, hongos o los virus. ¿Por qué el formaldehído preserva la estructura general de la célula? *Lo logra como consecuencia de la formación de enlaces cruzados o la desnaturalización de los grupos aminos de las proteínas (con frecuencia, de lisina)
  • 4.
    3º Paso: Inclusión.Elección del corte o muestra adecuada de una biopsia. 4º Paso: Deshidratación. En una serie de soluciones alcohólicas (alcohol absoluto). 5º Aclarado. Se utilizan solventes orgánicos (xileno o tolueno). 6º Parafinización.
  • 5.
    Histoquinete • Es uninstrumento que hace más ágil el proceso de los métodos histológicos, realiza los pasos de fijación, deshidratación, aceleración e inclusión.
  • 6.
    7º Paso: Cortey tinción. • Una vez para realizada la parafinización, se crea un bloque llamado taco. • El taco se coloca en el microtomo, que es una maquina cortadora especial. (corte delgado de 5 a 15 micrómetros) Bloque (taco) celda
  • 7.
    • Los cortesse montaran sobre portaobjetos con albumina (Pegamento). • De nuevo deben disolverse en xileno y tolueno. • Luego se tiñen.
  • 8.
    • La hematoxilinay la eosina, se utilizan en histología principalmente para poner en evidencia las características principales estructurales. Excepto: • Elastina. • Fibras reticulares. • Membranas basales. • Lípidos. Y pueden usarse otros métodos. 8º Paso: Interpretación (resultados).
  • 9.
    Histoquimica y citoquimica •Tienen fundamento en la union especifica de un colorante fluorescente en la celula. Composición química de un tejido: Elementos que perduran luego de la fijación • Nucleoproteínas • Proteínas intracelulares del cito esqueleto • Proteínas extracelulares • Complejos de fosfolipidos y proteínas(o carbohidratos) en las membranas. *Todas ellas macromoleculas.
  • 10.
    Que desaparecen luegode la fijación: • Glucogeno • Proteoglucogenos y glucosaminoglucanos Colorantes ácidos y básicos. • La capacidad de reaccionar a un colorante básico (de carga negativa) se llama basofilia. • Y, los que reaccionan con colorantes ácidos (de carga positiva) se llaman acidofilia. • Metacormasia.- Es el fenómeno por el cual un colorante cambia, por altas concentraciones de polianiones. polímero que posee electrolitos
  • 11.
    /no se ve,mejor ve el libro xD/
  • 12.
    • Inmunocitoquímica.- técnicasque permiten demostrar la reacción entre un antígenos y un anticuerpo. Se emplea para la diferenciación de tumores. • Técnicas de hibridación.- se utiliza para identificar y localizar secuencias de ADN en una mezcla compleja y que son complementarias a otro fragmento de ADN llamado sonda. • Radioautografía.-Se utiliza para localizar material radiactivo en los tejidos.
  • 13.
    Microscopia Óptica • Microscopiode campo claro: es actualmente el microscopio más utilizado por los estudiantes, ello es el microscopio descendente de los utilizados en el siglo XIX. Otros microscopios: • ME • MET la resolución . aumenta • MEB