Este documento describe los métodos de estudio en histología, incluyendo la fijación, deshidratación, aclaramiento, inclusión, corte, coloración y montaje de tejidos para su examen microscópico. Explica los objetivos y procesos de la histotecnología, así como los tipos y mecanismos de acción de fijadores químicos y físicos utilizados para preservar la estructura de los tejidos.

1. MÉTODOS DE ESTUDIO EN
HISTOLOGÍA
Dra. Mireya Camposeco Reyes
Materia : Morfología Y Función
Integrantes: Arlett Liliana Gálvez
Vázquez
Liria Yeslin Verdugo Morales
Ponencia:

2.  HISTOLOGÍA
 Estudia la microanatomía de las células, los tejidos y
los órganos y correlaciona su función.
 HISTOTECNOLOGÍA
 Conjunto de técnicas que se llevan acabo para la
preservación y preparación de los tejidos y células,
para su estudio con microscopio de luz y sus variantes

3. OBJETIVOS DE LA HISTOTECNOLOGÍA
 Preservación optima y funcional de los diferentes
materiales tisulares y celulares que llegan al
laboratorio.
 Conocer los principios de las técnicas rutinarias y
especiales, así como sus indicaciones precisas para el
estudio de los tejidos

4. COMPRENDE LA PREPARACIÓN DE TEJIDOS
PARA SU ESTUDIO MICROSCÓPICO.
Se logra sometiéndolos a una serie de
procesos:
Obtención del tejido a estudiar
Fijación
Deshidratación
Aclaramiento
Inclusión
Corte
Montaje
Observación (Diagnóstico)

5. TÉCNICA HISTOLÓGICA: FIJACIÓN
 Se refiere al tratamiento del tejido con sustancias
químicas que tienen varias finalidades:
 Preservar el tejido de la putrefacción, autolisis, etc.
 Conserva la estructura morfológica y química de las
células y tejidos al estado vivo (citoarquitectura y
ultraestructura)
 Aumenta la dureza del tejido para facilitar la preparación
de finas películas de éste.
 Y permite realizar, posteriormente, los procedimientos de
coloración o de identificación que facilitan el completo
conocimiento de su constitución íntima

6. TÉCNICA HISTOLÓGICA:
CUALIDADES DE UN FIJADOR
 Actuar con rapidez, matando y fijando a las células
antes de que aparezcan autólisis, desintegración,
etc.)
 Poseer alto poder de penetración para asegurar la
fijación correcta hasta en las capas profundas.
 Conservar, en lo posible, los detalles estructurales
que presentaban in vivo

7.  Permitir o favorecer el empleo de los
procedimientos necesarios para su observación
ulterior (ejecución de cortes, coloración, etc.)
 No provocar o impedir la producción de estructuras
artificiales
 No retraer excesivamente los tejidos ni volverlos
friables o quebradizos.

8. ¿CÓMO ACTÚAN LOS FIJADORES?
 Varía con la composición o naturaleza
 Coagulando las proteínas sin combinarse con ellas (alcohol,
ácido pícrico, yodo, calor)
 Formando combinaciones químicas con las sustancias
orgánicas (ácido crómico y sus sales), o reduciéndose en
contacto con las mismas y originando un precipitado
sumamente fino (ácido ósmico, bicloruro de mercurio,
cloruro de oro).
 La mayor parte de los fijadores actúan como oxidantes,
favorece la coloración ulterior de los tejidos.

9. TÉCNICA HISTOLÓGICA: FIJADORES
QUÍMICOS
Son los más utilizados
Pueden ser:
Fijadores simples
constituidos por una sola sustancia química
Fijadores compuestos
cuando varias fijadores simples intervienen en
su constitución
 racionalmente elegidos con el fin de completar la acción
de cada uno de ellos o atenuar sus efectos

10. FIJADORES SIMPLES
Formol al 10%
 es el más usado.
 Reacciona con los grupos aminos de las proteínas,
formando enlaces transversales y conservando las
estructuras de la célula.
 Su empleo es aconsejable en todos los casos en
que no se disponga de un fijador especial,
principalmente cuando se trata de fijar órganos o
tejidos para estudios histológicos topográficos.
 Alcohol etílico absoluto o de 96%
 Se usa generalmente en microquímica.
 Preserva el glucógeno.
 Causa distorsión del detalle nuclear y comprime el
citoplasma.

11.  Alcohol metílico.
 Se emplea con frecuencia para fijar frotis
desecados (sangre, médula ósea, ganglio, bazo,
líquidos de punción, etc.)
 Ácido ósmico al 1 ó 2%
 Es poco penetrante pero enérgico, conserva muy
bien estructuras celulares.

12. TÉCNICA HISTOLÓGICA: FIJADORES FÍSICOS
 Desecación.
 Calor seco.
Coagulación de las proteínas
No es buena ya que las células se destruyen.
 Calor húmedo.
 Frío y Congelación .
Se congela el tejido con dióxido de carbono o N
liquido
Es mejor que el calor pero se pueden formar
cristales.

13. DESHIDRATACIÓN
 Debido a que una gran parte del tejido está
constituida por agua, se aplica una serie gradual de
soluciones acuosas de menor a mayor de agente
deshidratante.
 Se debe deshidratar el tejido, ya que la parafina nos
es hidrosoluble
 NOTA: si se colocara el tejido en una solución al
100% de alcohol inmediatamente, el agua saldría
muy rápido del tejido y se deformaría.

14. ACLARAMIENTO
 Luego de deshidratar el tejido, se pasa a una solución de
una sustancia que es miscible tanto con el alcohol como
con el medio de inclusión (PARAFINA) a utilizar.
 Se sustituye el alcohol por un líquido intermediario
normalmente el hidrocarburo bencénico (xilol, benceno,
toluol).
 Se llama aclaramiento ya que el tejido se torna
transparente o claro en el xileno, esto se debe a que
cambia su índice de refracción.
 Nota: El alcohol y el xileno disuelven los lípidos de la
célula y por lo cual al extraerse también se extraen las
grasas y los lípidos de la célula.

15. INCLUSIÓN
 A fin de que se puedan obtener cortes suficientemente finos para
ser observados al microscopio, los tejidos tienen que ser incluidos
y envueltos por una sustancia de consistencia firme.
 gelatina y parafina.
 El objeto de la inclusión es:
 Distinguir entre sí las células superpuestas en un tejido y la
matriz extracelular.
 Tener un objeto lo suficientemente duro para su manejo y corte.
 La parafina penetra en los vasos, en los espacios intercelulares y
en el interior de las células embebiendo el tejido y haciendo más
fácil la obtención de cortes en el microtomo.

16.  Infiltrar la parafina liquida o cualquier medio de inclusión
en estado líquido al tejido, que disuelve el medio de
aclaramiento y penetra en el tejido.
1.Secado de la muestra con gasa.
2) Parafina 56º (l), 1h30'.
3) Parafina 56º (ll), 1h30'.
4) Formación de la barra.
5) 30' de frezzer.
6) Fractura del taco
NOTA: Debido al calor, el xilol se evapora y los espacios
anteriormente ocupados por el son ahora ocupados por
la parafina

17. CORTE
El taco ahora se puede
cortar en secciones lo
suficientemente
delgadas como para
permitir el paso de la luz.
La mayor parte de los
preparados para
microscopia óptica
tienen un grosor entre 3
a 10 micrómetros (5μ)
MICROTOMO.

18. COLORACIÓN Y MONTAJE
 Los cortes todavía no son aptos para su examen con el
microscopio, puesto que los tejidos se hallan
infiltrados en parafina y carecen de color.
 Los cortes se colocan sobre portaobjetos a los que se
les ha agregado una pequeña cantidad de Albúmina,
la cual actúa como adhesivo.
 La parafina se elimina en un solvente orgánico, de
nuevo se incluyen en Xilol, y la muestra se rehidrata
haciéndola pasar por una serie de graduaciones
decrecientes de alcohol etílico hasta llegar a una
solución 100% y agua.

19. • Ya rehidratado se TIÑE EL TEJIDO.
• Los colorantes más utilizados son la HEMATOXILINA
Y la EOSINA.
• Una vez teñido, se deshidrata de nuevo, de tal manera
que pueda fijarse de modo permanente el
CUBREOBJETOS con un medio adecuado para el
MONTAJE (por ejemplo una gota de Bálsamo de
Canadá o similar).

20. Los colorantes pueden agruparse en 3 clases:
• Colorantes que diferencian los componentes ácidos y
básicos de la célula.
• Colorantes especializados que distinguen los
componentes fibrosos de la matriz extracelular.
• Sales metálicas que se precipitan en los tejidos y
forman depósitos de metales con ellos

22. TINCIÓN PAS
(ÁCIDO PERYÓDICO-REACTIVO DE
SCHIFF)
• Tiñe carbohidratos y macromoléculas ricas en
carbohidratos.
• glucógeno en las células
• Moco en diversos tipos celulares
• Membrana basal subyacente a los epitelios
• Fibras reticulares del tejido conectivo
• El ac, peryódico rompe la unión entre estos átomos de
carbono adyacentes y forma grupos aldehído.
• Estos aldehídos reaccionan con el reactivo de Schiff para dar
un color púrpura intenso (rojo luminoso)

24. TRICROMICO DE MASSON
• Es una técnica para la
coloración de fibras
colágenas y elásticas.
• Se observan tres
colores distintos:
• Núcleos: Negro
• Músculo, citoplasma y
queratina: rojo
• Colágeno: azul o verde

25. NEGRO SUDÁN
Los colorantes Sudán tiñen fuertemente los
TRIGLICÉRIDOS, como por ejemplo:
• Rojo de sudán o sudán III, en la coloración de
células adiposas.
• El negro de sudán o sudán IV, se emplea en la
coloración de las vainas mielínicas de las fibras
nerviosas compuestas por lipoproteínas.