La práctica 3 en la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad Autónoma de Chiapas se centra en la tinción de Feulgen, que permite identificar ácidos nucleicos mediante la detección de grupos aldehídos. La técnica implica hidrólisis ácida y el uso del reactivo de Schiff para teñir ADN, resultando en muestras con ADN teñido de fucsia. Se discuten las ventajas y desventajas de la técnica, además de consideraciones de control de calidad.

1. UNIVERSIDAD AUTONOMA DE CHIAPAS
FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS
CAMPUS IV
GENETICA APLICADA
PRACTICA 3. TINCION DE FEULGEN
PRESENTA:
• JUAN MARCOS BLAS GONZALES
• ITZEL MONTSERRAT COLMENARES OCAÑA
• ISMAEL DE JESUS HERNANDEZ
RODRIGUEZ
• NESTOR ABEL REYES LOPEZ
• SERGIO ULLOA ROBLEDO

2. TINCION
DE
FEULGEN
PRACTICA 3
9th
grade

3. Este método se basa en la identificación altamente
específica de ácidos nucleicos del ADN a partir del
reconocimiento de los grupos aldehídos de la pentosa
(azúcar).

4. Para esto se
realizan 2
pasos
fundamentales:

5. Hidrolisis ácida.
Rompe los puentes de hidrogeno
de la doble hélice, mediante la
desnaturalización de la cadena con
ayuda de HCl.
• ARN se divide en sustancias
solubles
• ADN se hidroliza parcialmente

7. Tinción con Reactivo de Schiff:
El reactivo de Schiff es un reactivo
para la detección de aldehídos.
Es un compuesto preparado a
partir de fucsina básica, HCl y
metabisulfito sódico o potásico.

8. Técnica
de la
tinción
de
Feulgen

9. ● La técnica de Feulgen consta de los
siguientes pasos:
● -Hidrólisis ácida: se introduce
directamente el portaobjetos en una
solución de HCL 6N durante 60
minutos a una temperatura de 25ºC.
● -Lavado de agua corriente durante un
minuto, seguido de otros dos lavados
de un minuto en agua destilada. Se
agitan suavemente los portaobjetos
con el fin de eliminar la mayor cantidad
de impurezas.

10. ● -Tratamiento con el reactivo de Schiff durante una hora a
una temperatura de 25ºC y en la oscuridad. Se procura que
los portaobjetos tengan la menor cantidad de agua posible
al entrar en el reactivo de Schiff, pero evitando que se
sequen. Durante todo el proceso los portaobjetos son
agitados suave y periódicamente.
● -Lavado en baño sulfuroso durante un minuto a temperatura
ambiente tres veces consecutivas para eliminar el exceso de
colorante.
● -Lavado en agua corriente de 10 minutos de duración.
● -Deshidratación y montaje de las muestras para su estudio.

11. Características de
las muestras que
podemos teñir con
esta técnica.

12. ● El método de Feulgen puede considerarse estequiométrico en
donde es posible observar una intensidad de coloración
proporcional a la concentración de DNA.
● Depende del hidrólisis ácida del ADN
● Los grupos aldehídos liberados por la hidrólisis de Feulgen
son teñidos con reactivo de Schiff.
● Opcionalmente, la muestra se puede contrateñir con Light
Green SF amarillento .

13. Los resultados son DNA (cromatina nuclear, cromosomas) teñido
color fucsia y fondo incoloro, en el caso de que de que se utilice una
coloración de contraste como el Fast Green FCF el fondo sería verde.

14. VENTAJAS Y
DESVENTAJAS
DE ESTA TECNICA

15. La reacción de Feulgen es una técnica semicuantitativa. Si los aldehinos sólo permanecen en
la célula son aquellos producidos desde la hidrólisis de ADN, entonces la técnica es
cuantitativa para el ADN. Es posible utilizar un instrumento conocido como
un microdensitometer o microspectrophotometer para realmente medir la intensidad de la
reacción de Feulgen rosa para un determinado orgánulo. Mediante este procedimiento, que
fue pronto determinaron que las células de la interfase fueron compuestas de dos
poblaciones, los diploide ADN y los tetraploide ADN

16. Ventajas
● Las muestras fijadas se mantienen estables
● durante mucho tiempo, el material se endurece, por lo que es
● fácil trabajar con él. Las enzimas tales como fosfatasa alcalina,
● esterasas inespecíficas, esterasa y lipasa específica permanecen
● activas después de la fijación con formalina.

17. Desventajas
● Investigaciones histoquímicas pueden llegar a ser difíciles
cuando las enzimas y epítopes son enmascarados. Sin
embargo el enmascaramiento puede ser parcialmente eliminado
por el lavado. El formaldehído puede causar problemas de
salud, es alergizante y un irritante químico.

18. CONTROL DE CALIDAD
* Limpieza y seguridad.
* Agitación del portaobjetos.
* Procura que los portaobjetos tengan
la menor cantidad de agua posible al
entrar en el reactivo de Schiff.
* Tras teñir 75 preparaciones se cambia
el baño reactivo.

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