Este documento resume varias prácticas de laboratorio para la identificación de azúcares, almidón, digestión enzimática, observación microscópica de células, actividad enzimática, mitosis, cariotipo humano, cultivo de microorganismos y tinción de Gram. Las prácticas incluyen procedimientos detallados y sus fundamentos teóricos.

1. TEMA 14.
Prácticas (resumidas)
Bonifacio San Millán
IES Muriedas 2º Bachillerato - Biología

2. RECONOCIMIENTO DE AZÚCARES REDUCTORES
 FUNDAMENTO
Reacción de Fehling “ojo, simplificada”
 + rojo ladrillo (cambio de color)
 - azul verdoso (no cambio de color)
R-CHO + 2CuO → R-COOH + Cu2O
(Cu 2+) al reducirse pasa a (Cu +)
 PROCEDIMIENTO:
 Añadir a diluciones, reactivos de Fehling A y B
 Calentar baño María

3. IDENTIFICACION DEL ALMIDÓN CON
LUGOL
 FUNDAMENTO: proceso físico:
 Elefecto óptico del yodo cuando se introduce o fija en las
hélices de la amilosa y la amilopectina, proceso que solo
ocurre en frío.
 PROCEDIMIENTO
 Pipeteamos 3ml .
 (+) : Contiene almidón, virará a color violeta o azul oscuro
 ( - ): No contiene almidón no cambiará de color
 IMPORTANTE: COMBINANDO LAS DOS PRÁCTICAS ANTERIORES PODEMOS
IDENTIFICAR DIFERENTES MUESTRAS DE: EJ. GLUCOSA (MONOS. REDUCTOR),
SACAROSA (DISACÁRIDO NO REDUCTOR), ALMIDÓN (TODOS LOS POLISACÁRIDOS
SON NO REDUCTORES).

4. DIGESTION DE ALMIDÓN CON AMILASA
SALIVAL (PTIALINA)
 FUNDAMENTO: Hidrólisis enzimática
 ALMIDÓN --- enzimas desramificadores + amilasa ---->
MAL TOSA ---- maltasa ----> GLUCOSA
 PROCEDIMIENTO:
 Un poco de almidón en un tubo de ensayo.
 Añadimos un poco de saliva (contiene amilasa)
 Para agilizar el proceso, calentamos a menos de37ºC
 Dejamos reposar el tubo, agitándolo de vez en cuando. 5´
 Reacción de Fehling A y 1 ml de Fehling B.
 IMPORTANTE: EL REACTIVO FEHLING NOS PERMITE COMPROBAR QUE SE HA PRODUCIDO LA
HIDRÓLISIS, YA QUE EL ALMIDON NO PRESENTA PODER REDUCTOR, PERO UNA VEZ SE HA
PRODUCIDO LA HIDRÓLISIS, TENDREMOS GLUCOSAS LIBRES QUE, COMO TODOS LOS
MONOSACÁRIDOS, SI PRESENTAN PODER REDUCTOR. EL COLOR SERÁ, EN CONSECUENCIA, ROJO
LADRIOLLO (REACCIÓN POSITIVA).

5. OBSERVACIONES
MICROSCÓPICAS Citoplasma
(Células vegetales) Membrana
Núcleo
 FUNDAMENTO:
 Preparación microscópica con colorante de contraste (azul
de metileno o verde de metilo) que tiñen fuertemente el
núcleo y las paredes celulares.
 PROCEDIMIENTO:
 Membrana de hojas interna de la cebolla+ porta+ agua
 Escurrir el agua + verde de metilo acético o azul de
metilenos, 5´.
 Lavar con el cuentagotas
 Cubreobjetos
 Observación al microscopio (diferentes aumentos)

6. OBSERVACIONES
MICROSCÓPICAS
(Células animales)
 FUNDAMENTO:
 Preparaciónmicroscópica con colorante de contraste (azul de
metileno o verde de metilo) que tiñen fuertemente el núcleo
con menos color el citoplasma (granuloso).
 PROCEDIMIENTO:
 Raspado del interior del carrillo+ porta (extensión)
 Calentar + verde de metilo acético o azul de metilenos, 3´.
 Lavar con el cuentagotas
 Cubreobjetos
 Observación al microscopio (diferentes aumentos)

7. ACTIVIDAD ENZIMÁTICA: la catalasa
 FUNDAMENTO: factores que afectan a la actividad enzimática
burbujas ⇒ reacción +
catalasa
 2 H2O2 2 H2O + O2
 PROCEDIMIENTO:
 6 cubos de patata (contiene catalasa) de 0,5 cm en tubos.
 Añade al tubo 1: 2 ml de agua.
 Someter tubos (2,3,4,5,6) a calor, frio, vinagre, HCl y NaOH
respectivamente. 5´.
 Añade 2 ml de agua oxigenada a los 6 tubos
 Completa tabla: Columnas:
 1ª.Tubo 2ª.Tratamiento 3ª.Resultado 4ª. Explicación (¿desnaturalización?)

8. ESTUDIO DE LA MITOSIS EN
CÉLULAS DE LA RAÍZ DE
CEBOLLA
 FUNDAMENTO:
 Observación de meristemos en mitosis. La orceína A reblandece las
membranas celulares y la B tiñe los cromosomas de morado.
 PROCEDIMIENTO:
 Raicillas de 2-3 mm (sin cofia)
 Colocar en vidrio de reloj +2-3 ml de orceína A.
 Calentar suavemente hasta emisión de vapores tenues.
 Colocarla sobre un portaobjetos + una gota de orceína B, 1´.
 Colocar el cubreobjetos (raíz bien extendida).
 Secar con unas tiras de papel de filtro, 5 o 6. Presionar en vertical.
 Observar al microscopio:
 (Interfase, Profase, Metafase, Anafase, Telofase)

9. EL CARIOTIPO
HUMANO
 FUNDAMENTO:
 Elaboración de cariogramas.
 Cromosomas metafásicos teñidos
 Colchicina :Para detener la mitosis en metafase
 Tripsina: hidroliza algunas proteínas
 Colorante Giemsa: Para teñir los cromosomas.
 Distinguirel cariotipo normal de cariotipos alterados.
 Clasificación: 7 grupos de la A a la G atendiendo a su
longitud relativa y a la posición del centrómero.
 PROCEDIMIENTO:
 Los cromosomas autosómicos se ordenan en orden decreciente de
tamaño, excepto el cromosoma 21 que ahora se sabe que es más pequeño que el 22.

10. EL CARIOTIPO
HUMANO
 PROCEDIMIENTO:
 Elbrazo largo hacia abajo.
 Contar los cromosomas y apuntar el número.
 Autosomas en orden decreciente de tamaños, que los
cromosomas sexuales deber ir por separado.
 Buscar en orden de tamaño y acrocéntricos.
 Buscar metacéntricos, submetacéntricos más grandes.
 Buscar los 14 cromosomas medianos submetacéntricos.
 Buscar alteraciones (más o menos de 46 ).
 Buscar alteraciones en homólogos (delecciones, traslocaciones, ...).

11. EL CARIOTIPO
HUMANO

12. CULTIVO Y AISLAMIENTO DE
MICROORGANISMOS
 FUNDAMENTO Y PROCEDIMIENTOS:
 Esterilización y técnicas asépticas
 2º Medio de cultivo (genérico o específico): líquido o sólido (agar-agar)
 3º Esterilización y conservación del medio: autoclave y nevera 4ºC (sin luz)
 4º Toma de muestras (ej. bastoncillo) y siembra (asa de siembra)
 5º Incubación (estufa), durante periodos de tiempo determinados
 6º Aislamiento (toma de muestra monoclonal, de una colonia únicamente)
 7º Resiembra en medio genérico o selectivo (ej. Lactosa, 45 ºC para E. coli)
 8º Pruebas bioquímicas diferenciales (ej. catalasa, indol, …)
 9º Tinción (ej. tinción de Gram)
 10º. Observación con microscopio (mínimo 1000x)
 11º Estudio de sustancias antibacterianas (Halo de inhibición)

13. CULTIVO Y AISLAMIENTO
DE MICROORGANISMOS
 Autoclave
microscopio óptico
 Medio de cultivo (líquido y sólido)
 siembra (asa de siembra)
 Incubación (estufa)
 Tinción (ej. tinción de Gram) y observación - +
 Halo de inhibición

14. TINCIÓN DE GRAM
_ +
 FUNDAMENTO
 Colorantes cristal violeta y safranina
 las bacterias Gram + se tiñen de morado (fijan el cristal violeta que es
el colorante fundamental)
 las Gram – se tiñen de rosa con safranina, colorante de contraste (no
fijan el cristal violeta).
 PROCEDIMIENTO
 Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor
 Añadir azul violeta (cristal violeta) ,1´
 Todas las células gram + y - se tiñen de color azul-purpura.
 Agregar lugol (intensifica el cristal violeta)
 Lavar con acetona y/o alcohol , elimina el c. violeta de las Gram-
 Tinción de contraste agregando safranina. 1-2´
 Observar al microscopio óptico a 100x con aceite de inmersión