Este experimento tiene como objetivos: 1) Observar el proceso de plasmólisis en células de cebolla al ser colocadas en una solución hipertónica de sacarosa. 2) Demostrar cómo el agua sale de las células hacia la solución exterior hipertónica, haciendo que las células se encojan y se desprendan de la pared celular. 3) Explicar este fenómeno a nivel celular como resultado del paso del agua de un medio menos concentrado (célula) a uno más concentrado (

1. Objetivos:
1. Identificación de glúcidos.
2. Hidrólisis del enlace de un disacárido
Materiales:
• Muestras de glúcidos:
o glucosa
o maltosa
o lactosa
o sacarosa
o almidón.
• Tubos de ensayo, gradilla, vaso para calentar, mechero.
• Reactivo de Fehling A y Fehling B
• Lugol
• HCl diluido y bicarbonato.
Reacciones que van a realizarse:

2. Animaciones en Flash para recordar las reacciones identificativas
Fehling+ Fehling- Lugol+ Lugol-
1. Reacción de Fehling:
o Tomar la muestra que se quiera analizar (normalmente una
cantidad de 3 cc.)
o Añadir 1 cc. de Fehling A y 1 cc. de Fehling B. El líquido del
tubo de ensayo adquirirá un fuerte color azul.
o Calentar el tubo al baño María o directamente en un mechero
de Laboratorio.
o La reacción será positiva si la muestra se vuelve de color rojo-
ladrillo.
o La reacción será negativa si la muestra queda azul, o cambia a
un tono azul-verdoso.
Fundamento: Se basa en el carácter reductor de los monosacáridos y
de la mayoría de los disacáridos (excepto la sacarosa). Si el glúcido
que se investiga es reductor, se oxidará dando lugar a la reducción
del sulfato de cobre (II), de color azul, a óxido de cobre (I), de color
rojo-anaranjado.
2. Reacción del Lugol: Este método se usa para identificar
polisacáridos. El almidón en contacto con unas gotas de Reactivo de
Lugol (disolución de yodo y yoduro potásico) toma un color azul-
violeta característico.
o Poner en un tubo de ensayo unos 3 cc. del glúcido a investigar.
o Añadir unas gotas de lugol.

3. o Si la disolución del tubo de ensayo se torna de color azul-
violeta, la reacción es positiva.
Fundamento: La coloración producida por el Lugol se debe a que
el yodo se introduce entre las espiras de la molécula de
almidón.
No es por tanto, una verdadera reacción química, sino que se
forma un compuesto de inclusión que modifica las propiedades
físicas de esta molécula, apareciendo la coloración azul violeta.
Basándote en esta característica te voy a proponer un pequeño juego de
magia que te va a sorprender:
 Una vez que tengas el tubo de ensayo con el almidón y el lugol, que
te habrá dado una coloración violeta, calienta el tubo a la llama y
déjalo enfriar. !Sorprendido¡.
 Vuelve a calentar y enfriar cuantas veces quieras.... ¿Dónde está el
color?.

4. • Poner las muestras de glúcidos en los tubos de ensayo. Pueden
prepararse soluciones al 1% aproximadamente. Figura 1.
• Realizar la Prueba de Fehling como se indica al principio de página.
Figura 2.
• Después de calentar observar los resultados. Figura 3.
• Estos resultados nos indican que los azúcares: glucosa, maltosa y
lactosa tienen carácter reductor.
Figura 2 Figura 3
Figura 1
Como se veía en la experiencia 1 la sacarosa daba la reacción de Fehling
negativa,(Figura 4)por no presentar grupos hemiacetálicos libres.
Ahora bien, en presencia del ácido clorhídrico (HCl)y en caliente, la
sacarosa se hidroliza descomponiéndose en los dos monosacáridos que la
forman (glucosa y fructosa).
Técnica: Tomar una muestra de sacarosa y añadir unas 10 gotas de ácido
clorhídrico al 10%. Calentar a la llama del mechero durante un par de
minutos. Dejar enfriar y realizar la Prueba de Fehling. Observa el resultado
(Figura 5). La reacción positiva nos dice que hemos conseguido romper el
enlace O-glucosídico de la sacarosa. ( Se recomienda antes de aplicar la reacción de
Fehling, neutralizar con bicarbonato, Fehling sale mejor en un medio que no sea ácido.)

5. Figura 4
Figura 5
El polisacárido almidón se colorea de azul-violeta en presencia de yodo,
debido no a una reacción química, sino a la fijación del yodo en la superficie
de la molécula del almidón, fijación que sólo tiene lugar en frío.
Figura 6
Figura 7
Técnica:
• Colocar en una gradilla muestras de distintos glúcidos. Figura 6
• Añadir 5 gotas de Lugol en cada uno de los tubos de ensayo.
• Observar los resultados. Figura 7.
• Con este método puede identificarse el almidón.

6. 1. El objetivo fundamental de esta práctica es utilizar unas sencillas
técnicas para poder extraer el ADN de un tejido animal y por el
aspecto que presenta, confirmar su esructura fibrilar.
2. A partir de la longitud enorme de las fibras también se confirma que
en el núcleo el ADN se encuentra replegado.
• Hígadito de • Alcohol de
pollo 96º
• Varilla de • Cloruro
vidrio sódico 2M
• Mortero • SDS
• Vasos de • Arena
precipitado
• Pipeta • Trocito de
tela para
• Probeta filtrar

7. 1. Triturar medio higadito de pollo en un mortero. Añadir arena para
que al triturar se puedan romper las membranas de y queden los
núcleos sueltos. FIGURA 1
2. Añadir al triturado, 50 centímetros cúbicos de agua. Remover hasta
hacer una especie de papilla o puré. FIGURA 2
FIGURA 1 FIGURA 2
3. Filtrar varias veces sobre una tela para separar los restos de tejidos
que hayan quedado por romper. FIGURA 3
4. Medir el volumen del filtrado con una probeta. FIGURA 4
FIGURA 3 FIGURA 4
5. Añadir al filtrado un volumen igual de cloruro sódico 2M. Con ésto
conseguimos producir el estallido de los núcleos para que queden
libres las fibras de cromatina. FIGURA 5
6. A continuación se añade 1 centímetro cúbico de SDS. (Nota: Si no se
dispone de este producto puede sustituirse por un detergente de

8. vajillas, tipo Mistol o similar. Yo uso mistol y me va bien). La acción de
este detergente es formar un complejo con las proteinas y separarlas
del ADN. Así nos quedará el ADN libre de las proteinas que tiene
asociadas. FIGURA 6
FIGURA 5 FIGURA 6
7. Añadir mediante una pipeta 50 centrímetros cúbicos de alcohol de
96º. Hay que hacerlo de forma que el alcohol resbale por las paredes
del vaso y se formen dos capas. En la interfase, precipita el ADN.
FIGURA 7
8. Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma dirección.
En la fotografía número 9 se indica con mayor precisión las capas.
Sobre la varilla se van adhiriendo unas fibras blancas, visibles a
simple vista, que son el resultado de la agrupación de muchas fibras
de ADN. FIGURA 8
FIGURA 7 FIGURA 8

9. Esta práctica puede completarse con
una tinción específica de ADN.
Tenemos que tomar una muestra de las
fibras que se van depositando sobre la
varilla de vidrio y depositarlas sobre un
porta.
Teñir durante unos minutos con un
colorante básico.
Observar al microscopio.
FIGURA 9
1. Conocer la biología de las levaduras como responsables de las
fermentación alcohólica.
2. Observar un proceso fermentativo
3. Estudiar las reacciones de la fermentación alcohólica
4. Comprobar la formación de etanol, como producto final de la
fermentación.

10. Levaduras de la
p Bicromato potásico
panificación
p Ácido sulfúrico diluido
p glucosa
Reactivo de Fehling A
p Sacarímetro de Eihörn
Reactivo de Fehling A
p tubos de ensayo
Las levaduras son organismos anaeróbicos facultativos, que significa que
pueden vivir sin oxígeno.
Cuando hay oxígeno lo utilizan para la respiración, es decir para oxidar la
glucosa completamente y así obtener ATP.
En condiciones de anaerobiosis, las cepas de Sacharomyces cerevisae
(levaduras de la panificación) y otras especies de levaduras transforman la
glucosa en ácido pirúvico, siguiendo la secuencia de reacciones de la
glicolisis. Este proceso es común a la mayoría de los seres vivientes; pero
aquí radica lo específico de estas levaduras, son capaces de proseguir la
degradación del pirúvico hasta etanol, mediante el siguiente proceso:
Esto es una ventaja adaptativa para las levaduras, que pueden sobrevivir en anaerobiosis.
Pero solamente lo utilizan cuando no hay oxígeno disponible y ello en relación con el bajo
rendimiento energético de la fermentación alcohólica, en comparación con el de la
degradación oxidativa de la glucosa.
1. Preparar una disolución de glucosa.
2. Separar 3 ml. en un tubo de ensayo. (Esta muestra nos servirá para
realizar la reacción de Fehling y comprobar que es glucosa por su
poder reductor.
3. Disolver una punta de espátula de la cepa de panificación de
Sacharomyces cerevisae en el resto de la glucosa.
4. Llenar el sacarímetro de Eihörn, cuidando que no queden burbujas de
aire para conseguir un ambiente de anaerobiosis. (Figura 1)

11. (Figura 1)
5. A continuación, observar el sacarímetro e ir anotando cada 10
minutos los valores observados para pasarlos a una gráfica.
6. Figura 2
7. La fermentación empezará cuando se observe un burbujeo,
procedente del CO2. El CO2 se irá acumulando en la parte superior del
sacarímetro (secuencia 1, 2 y 3 de la figura 2). Esta cámara irá
aumentando a medida que se va acumulando el CO2.
Mediante este proceso de fermentación hemos transformado glucosa
en etanol. ¿Cómo podemos comprobarlo?.
Vamos a probar que al principio había glucosa y al final del
proceso desaparece la glucosa y tenemos etanol.
1. Tomamos el tubo de ensayo en el que pusimos la muestra de glucosa
antes de echarle la cepa de levaduras.

12. 2. Realizamos la Prueba de Fehling.
3. Esperamos que sea positiva.
4. Ahora tomamos unos 2 ml. de la muestra del sacarímetro.
5. Realizamos la Prueba de Fehling.
6. Esperamos que la reacción sea negativa, ya que la glucosa se ha
consumido por las levaduras y se ha transformado en etanol, como se
ve en la reacción de fermentación.
7. Con esto comprobamos que había glucosa al principio del proceso y al
final ha desaparecido.
8. Ahora vamos a comprobar que se ha producido etanol. (Esta reacción
debe hacerla el profesor/a, porque hay que manipular Ácido
sulfúrico y puede ser peligroso el manejarlo).
9. Tomamos 2 ml. de la solución del sacarímetro y la ponemos en un tubo
de ensayo.
10. Añadimos unos cristalitos de bicromato potásico.
11. A continuación 2 ml. de Ácido sulfúrico diluido.
12. Calentar (mejor al baño María). Debe formarse un compuesto
aromático característico, y se pone de manifiesto porque cambia de
color de amarillento a verdoso. Es una reacción que nos indica que
existe etanol
Gráfica:
Con los datos obtenidos sobre el volumen de CO2 que se ha ido formando,
elabora una gráfica en la que queden reflejados dichos datos. Utiliza papel

13. milimetrado y pon en los ejes los valores de Tiempo (expresado en minutos)
y Volumen de CO2 (expresado en ml.)

14. PLASMÓLISIS CÉLULAS DE CEBOLLA