Este documento proporciona información sobre la técnica de electroforesis. Explica que la electroforesis es una técnica separativa que usa un campo eléctrico para mover partículas cargadas a través de un gel. Luego describe diferentes tipos de electroforesis como la electroforesis de zona, isoelectroenfoque y capilar. También cubre componentes del equipo electroforético, parámetros que afectan la movilidad, tipos de soporte como gel de agarosa, y aplicaciones como el análisis de proteínas, á

1. “UNIVERSIDAD NACIONAL TORIBIO
RODRIGUEZ
DE MENDOZA”
CURSO:
Análisis instrumental.
TEMA:
Electroforesis.
DOCENTE:
Blgo. Santos E. Inoñan Chozo.
ALUMNA:
Merly Alva Benites.
FACULTAD DE INGENIERÍA CIVIL Y AMBIENTAL
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL

2. foresis
Electro
ELECTROFORESIS
Proviene del griego phoros
donde:
Significa electricidad
Significa trasladar

3. INTRODUCCIÓN
La electroforesis es una técnica
separativa que emplea un campo
eléctrico aplicado que actúa sobre
partículas cargadas causando su
movimiento a través de una matriz
gelatinosa.
El primer aparato sofisticado de
electroforesis fue desarrollado por Arne
Tiselius en 1937. Su trabajo le valió el
premio novel en 1948. Fue Tiselius
quién desarrollo el concepto de frente
móvil que se conoció como
electroforesis de zona y se uso para
separar proteínas en solución.

4. ELECTROFORESIS
Los métodos electroforéticos son de alta sensibilidad, eficacia, poder de
resolución y versatilidad.
 Sus métodos nos sirven para la de separación de:
-Proteínas (ejemplo albumina)
-Ácidos nucleicos (ADN y ARN)
-Otras biomoléculas
 Permite determinar:
- La visualizalización de las bandas de ARN o ADN de patógenos.
- Detectar cambios o mutaciones a nivel genético.
- Visualizar una nueva proteína.
- Análisis sofisticado de proteínas(peso molecular)

5. EQUIPO ELECTROFORÉTICO
COMPONENTES:
-Fuentes de alimentación.
-Dos electrodos.
Ánodo
Cátodo
-Cubeta.
-Tampón de electroforesis.
-Soporte electroforético.

6. PRINCIPIOS TEÓRICOS

7. PARÁMETROS QUE INFLUYEN EN LA MOVILIDAD
ELECTROFORÉTICA
Tenemos:
 Parámetros externos:
-Campo eléctrico.
-Temperatura.
 Parámetros relacionados con el solvente y con el sistema electroforético:
-Viscosidad.
-Fuerza iónica.
-La naturaleza de los iones componentes.
-El pH.
 Parámetros relacionados con el soluto:
-La carga.
-La forma y tamaño de los iones.

8. TIPOS DE SOPORTE
a. PAPEL : En desuso
b. ACETATO DE CELULOSA:
Ventajas: presenta poca adsorción, necesita cantidades pequeñas de
muestra, porosidad uniforme, transparente, sin contaminantes y resultados
precisos.
Inconvenientes: débil resolución y electroósmosis. Se ha quedado obsoleta.
c. GEL DE AGAROSA: Es un polisacárido, cuyas disoluciones poseen la
propiedad de permanecer liquidas por encima de 50º C y formar un gel,
semisólido al enfriarse. Este gel está constituido por una matriz o trama
tridimensional de fibras poliméricas embebida en gran cantidad de medio
líquido.
Ventajas: No presenta fenómenos de adsorción, pequeña cantidad de
muestra, mejor visualización y resolución.
Inconvenientes: electroósmosis

9. TIPOS DE ANÁLISIS ELECTROFORÉTICO
Los diferentes tipos de análisis pueden ser distinguidos por las propiedades físicas de la muestra
que se van a emplear para su separación o por el tipo de matriz usada. Existe cuatro tipos básicos
que se fundamentan en diferentes propiedades físicas son: límite móvil, electroforesis de zona,
isoelectroenfoque.
Límite móvil:
 Propuesta por Picton y Linde en 1982 pero desarrollada por
Tiselius en 1930.
 En este método la muestra se coloca en una solución buffer
en un tubo con forma de u.
 Se aplica un campo eléctrico por medio de electrodos
sumergidos en cada extremo del tubo.
 Las partículas de la muestra migran en relación al campo
eléctrico.
 Este método usa solamente la carga de la partícula y el
potencial resultante cuando la muestra se encuentra en
contacto con el buffer.
 Una desventaja de este método es que la mayoría de
componentes no se separan además que los llamados límites
móviles de los componentes de la mezcla no son visibles al
ojo humano y necesita de un buen equipo óptico por lo que
esta técnica a caído en desuso.

10. ELECTROFORESIS DE ZONA:
- Este es uno de los métodos mas usados.
- Parecido al de límite de movilidad pero con la diferencia de
que se realiza sobre un medio soporte(gel) para lograr la
completa separación de cada componente.
- Otra diferencia es que la muestra es aplicada en una banda
angosta o zona.
- Sus tipos de soporte mas comunes son los geles, papel o
capilares, poliacrilamida, agarosa y acetato de celulosa, entre
otros.
- Sus componentes son aplicados en una banda angosta
rodeada por buffer, se aplica un campo eléctrico y cada banda
migra con una velocidad característica determinada por su
movilidad electroforética.
- Es un buen método separativo dado que efectivamente aísla
los componentes de la mezcla.

11. ISOELECTROENFOQUE:
- Separa componentes usando un gradiente de pH.
- El gradiente va desde un pH bajo en el ánodo y un pH alto en el cátodo.
- Cuando se le aplica un campo eléctrico la muestra migra según su carga
hasta que encuentra un pH igual a su punto isoeléctrico, donde la carga
neta es 0 y en consecuencia se detiene.
- Su soporte son los geles y estos minimizan la difusión una vez que
llegan al estado estacionario y el campo eléctrico es eliminado.
- La clave del método es lograr un buen gradiente de pH.
- Acá en este método se utiliza el mismo aparato que se describiera para
electroforesis de zona.
- El poder resolutivo del método es muy elevado.

12. - Este es un método que lleva bastante tiempo, dado que cuanto mas se
acercan los componentes a su pH mas lentamente migran(poseen menos
carga).
- La aplicación de voltajes elevados durante largo tiempo requieren
refrigeración.

13. ELECTROFORESIS CAPIILAR:
- Se emplean tubos capilares
rellenos con buffer o gel
- Es una técnica ampliamente
usada.
- Las separaciones son rápidas,
se realizan a alto voltaje y
requieren una automatización
mínima.
- Su matriz es ventajosa porque
evita los efectos del
calentamiento que pueden
ocurrir en geles.
- Sus datos están en forma de
un registro, un perfil en papel
en vez de un gel teñido.
En la figura adjunta se muestra
esquemáticamente el diseño básico de la
electroforesis capilar. La muestra se aplica en un
extremo del tubo y la aplicación de voltaje causa
la migración de las moléculas, que al ir pasando
por un detector envían señal que se registra en un
trazo luego de ser procesada.

14. ELECTROFORESIS EN ACETATO DE CELULOSA:
- Se usa en análisis de fluidos biológicos.
- Su tiempo de análisis es corto.
- Es una técnica sencilla.
- Su aplicación principal es separar proteínas del suero, lo que se denomina
una proteinograma.
- Gran parte de los grupos de hidroxil de la celulosa se han estratificado por
acetilación debido a que no hay interacción con las proteínas.
- El soporte consiste en tiras delgadas de acetato de celulosa, con
propiedades de adsorción mínimas, por lo que se evita la formación de
colas y los solutos pueden ser separados en bandas bien definidas.
- Una desventaja es su débil resolución.

16. ELECTROFORESIS EN GEL:
- Son polímeros de red tridimensional.
- El uso de geles como medio de soporte en electroforesis
constituye una alternativa para solucionar algunos problemas
asociados con el uso de papel y de acetato de celulosa como
la absorción, la difusión y poca resolución de los compuestos
separados.
- Tipos de electroforesis en gel:

17. APLICACIONES DE LA ELECTROFORESIS EN GEL
La electroforesis en gel de agarosa es principalmente usada en el
análisis o separación de moléculas de ADN y ARN (aunque las
proteínas pueden también ser separadas en geles de agarosa), sin
embargo la separación también permite la purificación de tamaños
específicos de ADNs después de la digestión de la enzima de
restricción. Esta es usualmente usada en clonación para obtener
plásmidos cortado, en los cuales la electroforesis en gel de agarosa
separa los vectores cortados de los no cortados.
Por tanto los geles de agarosa permiten:
 La separación de la enzima de restricción que digiere el ADN
incluyendo la secuencia de ADN.
 Permitir la estimación del tamaño de las moléculas de ADN usando
un marcador de ADN.
 Permite la estimación robusta de la cantidad de ADN y su calidad.

18. ELECTROFORESIS DISCONTÍNUA:
Es técnica que se utiliza para conseguir máximas resoluciones.
Consiste en concentrar una fina capa demuestra. El sistema de
geles se prepara en una columna vertical constituida por 3 regiones:
 Superior o gel muestra.
 Intermedia o gel espaciador( ambos con mayor tamaño de poro y
menos concentrado).
 Inferior o gel separador.
-Se preparan en un tampón y a distintos pHs.
-El mayor tamaño de poro permite una mayor movilidad de
moléculas que en el gel separador.
-La baja fuerza iónica crea una resistencia eléctrica mayor, donde el
campo eléctrico es mayor en regiones superiores con lo que
la movilidad es mayor en regiones muestra y espaciador.

19. ELECTROFORESIS CONTÍNUA:
-Es un método donde el buffer se mueve
perpendicularmente al campo.
-Se usa un solo tipo de gel.
-La muestra se aplica también en una zona pero
se añade continuamente a lo largo del proceso.

20. COLORANTES MAS UTILIZADOS EN LA ELECTROFORESIS
Colorante Especificado Medio de soporte
Ponseau S Proteínas Acetato de celulosa
Negro amido 10 R Proteínas Gel de agarosa
Azul de bromofenol Proteínas Gel de agarosa
Azul de coomassic Proteínas Gel de agarosa o gel de
policramida
Rojo graso 7B Lipoproteínas Acetato de celulosa
Rojo oleoso 0 Lipoproteínas Gel de agarosa
Negro sudán B Lipoproteínas Gel de agarosa
Acido peryódico-reactivo
de Schiff
Glicoproteínas Acetato de celulosa, gel
de policramida
Nitrato de plata Haptoglobinas
proteínas
Acetato de celulosa, gel
de policramida

21. APLICACIONES
La principal aplicación es la caracterización y análisis
cuantitativo de moléculas biológicas, principalmente
proteínas, péptidos y aminoácidos.
También se encuentra aplicación para la separación de
sustancias bioquímicas (insulina, histonas, fibrinógeno,
lipoproteínas, enzimas, etc.)
Las aplicaciones de los geles de policramida en
electroforesis es la separación de moléculas circulares
ADN y lineales como el acetileno.

22. INMUNOELECTROFORESIS
La inmunoelectroforesis es el nombre genérico
que reciben un amplio número de métodos
bioquímicos para la separación y caracterización
de proteínas basadas en la electroforesis y la
reacción con anticuerpos. Todas las variantes de la
inmunoelectroforesis requieren inmunoglobulinas,
anticuerpos que van a reaccionar con las proteínas
que se desea separar o caracterizar. Los métodos
fueron desarrollados y usados ampliamente
durante la segunda mitad del Siglo XX.

23. TIPOS DE INMUNOELECTROFORESIS
Los métodos inmunoelectroforéticos fueron:
 El Análisis inmunoelectroforético.- Es el más clásico de los
ensayos. Se fundamenta en la separación de las proteínas por
electroforesis. Este método permitió caracterizar un gran número de
proteínas en suero y además se pudo establecer la existencia de
distintas clases de inmunoglobulinas y sus diferentes características
electroforéticas.
 La inmunoelectroforesis cruzada.-También llamada
Inmunoelectroforesis cuantitativa de dos dimensiones, difiere del
método anterior en el hecho de que las proteínas, tras su electroforesis
inicial, no se incuba con anticuerpos. Este tipo de inmunoelectroforesis
ha sido especialmente usado en estudios de proteínas serias y
extractos biológicos.

24.  La inmunoelectroforesis en cohete.- Se denomina así por la
forma característica del precipitado que se forma en el gel. Estos
métodos se utilizan para la cuantificación de proteínas serias
antes de que aparecieran los métodos automatizados.
 La contrainmunoelectroforesis.-Consiste en el
aprovechamiento de la distinta movilidad electroforética de los
dos componentes implicados. Dado que las inmunoglobulinas
migran hacia el polo negativo y las proteínas, dada su carga neta
negativa, lo hacen hacia el positivo, se colocan de forma inversa
a su migración, forzando así su encuentro.
 la Inmunoelectroforesis de afinidad.- está basada en los
cambios del patrón electroforético de las proteínas debido a su
interacción específica con sus ligandos. Esta técnica se utiliza
para estimar constantes de unión.

25. VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE INMUNOELECTROFORESIS
VENTAJAS:
 La prueba de inmunoelectroforesis es más específico que la prueba de
electroforesis de proteínas y puede identificar inmunoglobulinas
específicas.
DESVENTAJAS:
 Es que los resultados no pueden identificar el nivel exacto de moléculas
en una muestra, por lo que otro procedimiento, inmunofijación, se puede
utilizar como una alternativa más sensible.

27. BIBLIOGRAFÍA
 http://es.slideshare.net/angelito290184/electroforesis
 http://2008.igem.org/wiki/images/8/84/Protein_Buffers.pdf
 http://agarosabiotecnologia.blogspot.pe/p/electroforesis-origen-uso-y-
aplicacion.html
 http://wikipedia.enciclopedialibre/inmunoelectroforesis
 http://inmunoelectroforesis/historia-tipos.pdf
 www.ins.gob.pe