El documento describe diferentes métodos para observar células bajo el microscopio, incluyendo preparados en fresco y en seco. Explica colorantes comunes como azul de metileno y saframina y técnicas como la tinción Gram, la cual divide bacterias en Gram positivas y negativas. El objetivo es reconocer los métodos de preparación y coloración para estudiar la morfología celular.

1. I. INTRODUCCION
El tamaño y formas de las células es muy variable y por lo cual su observación es un
poco dificultosa y debido a ello se usan los diferentes tipos de colorantes para su mejor
observación. Para su observación microscópica de las células se emplean dos métodos:
Preparado en fresco: este método se usa para observar células vivas y que no necesitan
el uso de colorantes ya que estas células se encuentran en su propio medio.
Preparado en seco: este método se usa para observar células muertas, las cuales son
teñidas con los colorantes para su mejor observación morfológica y este comprende tres
pasos: extensión, fijación y tinción.
Dichos métodos nos proporcionan mejores resultados en el estudio de la morfología de
la célula.
II. OBJETIVOS
- Reconocimiento de preparados en seco y en fresco.
- Conocer los métodos y técnicas de las coloraciones más comunes.

2. III. REVISION DE LITERATURA
3.1 .COLORACIONES
Son compuestos, orgánicos que contienen radicales cromóforos esto es que
producen color y grupo de anxocromos que forman sales los grupos nitrito (-NO2)
y azo (-N = N) son cromóforos. Los radicales hidroxilo (-OH) y amino (-NH2) son
grupos anxocromos. Los cromóforos imparten la propiedad cromógena al
colorante y los anxocromos permiten que el colorante se una con la fibra o tejido.
(Ville, 1988).
3.1.1. Coloración Bacteriana
Entes de la tinción las bacterias suelen encontrarse en agua o en otro
líquido en un porta objeto limpio y son extendido en una película uniforme y
delgada. Se deja que la película seque en el aire y los microorganismos son fijados
por sustancias químicas o por el calor moderado. (Ville, 1988).
Tinciones: Es un método utilizado para estudiar microorganismos. (no vivos); en
estas tinciones se observa morfología, estructura y agrupamientos de
microorganismos. (Ville, 1988).
3.2 .TIPOS DE COLORANTES
3.2.1 Colorantes básicos
Verde de metilo (verde)
Azul de metileno (azul)
Pironina G (rojo)
Azul de toluidina (azul)
- Reaccionan con los grupos de aniónicos de los componentes texturales
que son los grupos fosfato de los ácidos nucleicos (DNA, RNA) los

3. grupos sulfato de los glucosaminoglucanos y los grupos carboxilo de
las proteínas. (Sherman, 1994)
- Los tres grupos se ionizan y quedan disponibles para la reacción con el
colorante básico por medio de uniones electrostáticas; a un pH
ligeramente ácido o neutro. (Sherman, 1994)
- Hematoxilina no es colorante básico en sentido estricto. (Sherman,
1994)
- Hematoxilina se presta para aquellos procedimientos tintoriales no los
que a ella le sigue la eosina u otro colorante ácidos. (Sherman, 1994)
- Los colorantes básicos verdaderos no suelen usarse en secuencias en
donde el colorante básico es seguido por un ácido por que la anilina
básica tiene a disociarse del tejido durante los lavados posteriores en
soluciones acuosas. (Sherman, 1994)
3.2.2 Colorantes Ácidos
Fucsina ácida (rojo)
Azul de anilina (azul)
Eosina (rojo)
Naranja G (naranja)
- Se unen primariamente a los componentes texturales por medio de
enlaces electrostáticos de manera similar pero opuesta a la de los
colorantes básicos. (Otto, 1993).
- Las anilinas ácidas reaccionan con grupos cationicos, como son los
grupos Aminos ionizados de las proteínas. Aunque el enlace
electrostático constituye el principal factor en la unión primaria del
colorante con el tejido. (Otto, 1993).
- En la técnica de MALLORY se usan tres colorantes ácidos, azul de
anilina, fucsina ácida, y naranja G. Estos tiñen con selectividad el
colágeno, el citoplasma en general y los eritrocitos, respectivamente.
(Otto, 1993).
- La fucsina ácida también tiñe los núcleos. (Otto, 1993).

4. - En otras técnicas con anilinas ácidas múltiples se emplea la
hematoxilina para teñir los núcleos primero y luego se aplican los
colorantes ácidos con el fin de teñir selectivamente el citoplasma y las
fibras extracelulares. (Otto, 1993).
- Los colorantes básicos también pueden emplearse combinados, pero
estas combinaciones no son de uso tan extendido como las de los
colorantes ácidos.
3.3. TINCION GRAM
Es un extendido bacteriano fijado al calor sobre un portaobjetos se trata con el
colorante básico, violeta de cristal. Todos los organismos toman este colorante,
luego se cubre el extendido con la solución yodada de gram. Después de un
enjuague con agua y una decoloración con acetona, se lava el preparado
minuciosamente en agua y se contratiñe con un colorante rojo, generalmente
saframina. El el preparado teñido se enjuaga entonces con agua, se seca y se
examina bajo el microscopio .
Las bacterias pueden diferenciarse con esta tinción en dos grupos , según lo
implementara a comienzo del siglo XVIII el bacteriólogo danés Christian Gram.
a). Microorganismos Gram-positivos
Estos microorganismos se tiñen de color azul o violeta intensa
b). Microorganismos Gram-negativos
Estos microorganismos pierden el cristal violeta y se vuelven a teñir con la
saframina, apareciendo el color rojo.
3.4. NUEVO COLORANTE DE CÉLULAS
La técnica de tinción celular o coloración de las células facilita el estudio de la
composición y estructura microscópica de tejidos orgánicos. El proceso consiste
en teñir una muestra del tejido a observar y cuando éste tiene contacto con el
colorante o pigmento, los núcleos y el citoplasma de las células resaltan, con lo
que se simplifica la localización de cualquier tipo de daño. (Sanboh, 1996).

5. En la estructura celular de los seres vivos es posible observar y detectar la
existencia de anomalías o patologías, que generalmente se relacionan con
enfermedades. Este método ha permitido a los científicos localizar padecimientos
múltiples, que van desde procesos degenerativos celulares hasta de tipo maligno
como el cáncer. (Sanboh, 1996).
Las primeras sustancias empleadas por los microscopistas como
colorantes celulares fueron de origen natural, como el carmín (extraído de
la cochinilla), la crocianina (del azafrán) y la hematoxilina (del árbol
haematoxylon campechianum o palo de Campeche). Actualmente, se usa
este último para la coloración de tejidos, pero su producción tiene un costo
elevado. Por tanto, dos investigadores de la Escuela Nacional de Ciencias
Biológicas del Instituto Politécnico Nacional, la maestra María Teresa
Valenzuela Vargas y el doctor Filiberto Vázquez Dávila, probaron la
eficacia de un colorante celular sintético, el cual reúne las características
de pigmentación requeridas, es de bajo costo y el procedimiento para
producirlo es sencillo. (Sanboh, 1996).
IV. MATERIALES Y MÉTODOS
4.1. Materiales
- Mucosa labial
- Laminas de porta y cubre objetos
- Eosina
- Fucsina
- Cristal violeta
- Aceite de cedro
- Asa de kolle

6. - Sarro dental
- Alcohol
- Lugol
- Mechero
- Agua destilada
Azul de metileno
- Microscopio compuesto
4.2. Metod
ología
La práctica fue visual-experimental, se empezó poniendo las muestras en los
portaobjetos, luego se tiñeron dichas muestras para ser observadas en el
microscopio.
I. RESULTADOS
.
5.1. Preparado en fresco
- En este proceso se uso agua estancada o de charco para ello se siguió los
siguientes pasos:
- Se saco con un gotero una gota y se puso la muestra, en una lamina de porta
objeto.
- Luego se cubrió la muestra con una lamina de cubre objeto.
- Luego se llevo al microscopio para observar, de manera directa, se observo a
10X y a 40X,

7. 5.2. Preparado en seco
Aquí se usan colorantes
a). Coloración simple.-
Se usa un solo colorante puede ser acido o base (azul de metileno)
- En este tipo de preparado se uso como muestra la mucosa labial, para observar
en el microscopio su morfología, y para ello se siguió los siguientes pasos.
- Se coloco la mucosa labial en una lámina porta objeto, luego con otra lámina
se hizo un frotis, para extenderla sobre la primera lamina.
- Una vez extendida se hizo una fijación, flameándole sobre el fuego de manera
vaivén, para que la fijación sea uniforme y rápida para matar a las células.
- Después de la fijación pasamos a la coloración de la muestra, en nuestra mesa
usamos el colorante azul de metileno; también se puede usar otros colorantes
como son: Eosina, Fucsina, Cristal violeta, Verde de metileno, etc.
- Después de una pequeña tinción se paso al lavado para quitar el exceso de
colorante y para que se visualice, mejor en el microscopio.
- Luego se observo al microscopio en 10X y 40X, dependiendo de la muestra,
para una mejor visualización de la mucosa labial..

8. b) Coloración Doble
Se usa dos clases de colorantes (Coloración Gram).
- Azul de metileno.
- Saframina (color rojo).
- Se usa la misma muestra y procedimiento que el anterior
c). Observación de bacterias
- Aquí se usa sarro dental (estreptococos)
- Se usa el colorante saframina
- En la muestra llevada al microscopio se observa bacterias pequeñas en forma
de cadenas alargadas con el objetivo de 40x.
- Con el objetivo de 100x usamos aceite de cedro y observamos las bacterias
con mayor claridad y de tamaño claramente.

9. II. DISCUSIÓN
- Según Ville (1988) y Otto (1993), nos mencionan de que para realizar el tipo
de coloración o preparado en fresco cumple con lo que se realizo en la
practica; también menciona que para el preparado en seco, también cumple
con lo realizado a la practica, solo con la inferencia de algunos colorantes.
II. CONCLUSIONES
- Se pudo realizar los preparados en fresco y en seco, conforme a lo establecido
por la práctica.
- Se conoció las técnicas más comunes de coloración que son coloración simple
y compuesto.
III. REFRENCIAS BIBLIOGRAFICAS
- VILLE, C. 1988. Biología. 7ª edic. Edit. Interamericana. S.A. México. 875p.
- OTTO, J.Y.A. TOWLE. 1993. Biología Moderna. 11ª edic. Edit McGraw – Hill,
S.A. México. 621p.
- SANBOH LEE, H-Y Lee, I-F Lee, C-Y. 1996. Teeng. Ink diffusion in water.
Eur. J. Phys. 25. (2004) pp. 331-336.
- SHERMAN, I. Y V. SHERMAN. 1994. Biología. 3ra
edic. Edit. Mc Graw-
Hill, S.A. México. 704p.

10. - Gerard. J. Tortora. Introducción a la Microbiología. Editorial Acribia S.A.
Zaragoza - España. 792p.
IX .CUESTIONARIO
1. Definir una coloración simple, doble y diferencial.
Coloración diferencial:
Cuando la muestra se emplea secuencialmente dos colorantes, que permiten
distinguir tipos de microorganismos.
Coloración Simple:
Cuando la muestra solo se utiliza un colorante que generalmente tiñe a los
microorganismos.
Coloración doble:
Cuando la muestra se agrega varios colorantes
2. Enumerar tres colorantes ácidos y tres colorantes
básicos.
Colorantes básicos
Verde de metilo (verde)
Azul de metileno (azul)
Pironina G (rojo)
Azul de toluidina (azul)
Colorantes Ácidos
Fucsina ácida (rojo)
Azul de anilina (azul)
Eosina (rojo)
Naranja G (naranja)

11. 3. Explique cual es la diferencia entre colorante ácido y
básico.
Colorante básico.- son aquellas que tiene afinidad especial por colorear la
cromatina nuclear, llamadas por esto colorantes nucleares.
Pero según Ross/ Romrell (1992); el colorante básico es una molécula de anilina
que tiene una o más cargas positivas en su porción coloreada y su formula general
es: anilina + Cl-
.
Colorante ácido.- son aquellos con afinidad especial por colorear el citoplasma por
lo que se les llama colorante citoplasmático. Pero según Ross/Romrell (1992); los
colorantes ácidos llevan una carga negativa en la porción coloreada de la molécula
y su fórmula general se representa así: Na + anilina.
El color de la anilina no está relacionado con el hecho de que sea ácido o básica.
Ej.: azul de metileno (azul) y es básico con el azul de anilina (azul) y es ácido.
4. Explicar el fundamento de la coloración gram.
Tinción de Gram:
Utiliza varios colorantes (cristal violeta 1m, Yodo 1m, lavado con alcohol, Safranina
30 seg)
Tinción de Gram:
Dividida en Gram. Positivo y Gram. Negativo, en el caso de los Gram. (+) la
muestra fue sarcina, puesto que una tonalidad violeta fijada en su estructura
determina la presencia de la misma puesto que fijó en su estructura el cristal violeta.
Y en el gran (-) utilizamos salmonella identificada por la presencia de muchas
estructura un poco triangulares de color rojo.
En la muestra de la práctica anterior 3 eran gran positivo por su coloración morada.
5. Que función cumple el lugol en la coloración gram.
L a acción del lugol en esta coloración es conseguir la mayor fijación de la violeta
por los gérmenes. Gram.+ por unión de los colorantes con el yodo del lugar.