• Curso: LABORATORIO DE PARASITOLOGÍAY MICOLOGÍA
• Carrera: Medicina 4º C
Yolanda Romo Lozano
2023
Centro de Ciencias Básicas
Departamento de Microbiología
Este material es empleado con fines didácticos en una materia curricular
Apoyo Unidades III y IV y laboratorio
Métodos de diagnóstico para Helmintos de importancia médica.
DIAGNÓSTICO DE LAS HELMINTIASIS*
MÉTODO INDIRECTOS:
Detectan lesiones o respuesta que induce
el parásito.
• Estudios de gabinete
• Análisis clínicos
• Histopatología
• Detección de moléculas secretadas y,o que se
incrementan en el hospedero en respuesta al
parásito.
MÉTODOS DIRECTOS:
Detectan al parásito
• Detección directa del parásito:
• Exámenes en fresco de muestras
• Estudios coproparasitoscopicos cualitativos
y cuantitativos
• Cultivos
• Detección de antígenos parasitarios.
• Detección genética de parásitos
* Una misma metodología puede, dado algunas situaciones, ser directa o indirecta. Por ejemplo, una prueba
inmunológica como western-blot puede servir para detectar anticuerpos frente al parásito, así como para
detectar antígenos parasitarios.
DIAGNOSTICO DE LAS HELMINTIASIS
• Historia clínica
• Datos epidemiológicos
• Análisis clínicos: Por ej.
Biometría hemática
(eosinofilia superior al 20%)
• Pruebas funcionales (de
órganos)
• Métodos serológicos y,o
inmunológicos
• Estudios de gabinete:
- Radiología (RX)
- Tomografía axial computarizada
(TAC)
- Resonancia magnética (RM)
- Exámenes oftalmológicos
- Endoscopia (diversos tipos)
- entre otros
Gnatostomiosis ocular
http://www.vacunasyviajes.es/vacunasyviajes/Gnathostomiasis_Atlas.html#8
http://emssolutionsint.blogspot.com/2012/12/cisticercosis-triptico.html
Neurocisticercosis (larvas como puntilleo
blanquecino)
RM
https://www.medigraphic.com/pdfs/neumo/nt-2014/nt144d.pdf
RX
TAC
Hidatidosis pulmonar
Colonoscopia
Tricocefalosis (se aprecian abundantes gusanos)
https://www.elsevier.es/es-revista-endoscopia-335-articulo-diagnostico-
incidental-tricocefalosis-mediante-colonoscopia-X0188989313270226
DIAGNÓSTICO DE LAS HELMINTIASIS.
ALGUNAS CONSIDERACIONES
• MUESTRAS donde podemos encontrar helmintos ya sea adultos o estadios inmaduros :
• Materia fecal, biopsias, esputo, suero, lavados bronquiales, sangre, orina, entre otras.
• PROCESO DE MUESTRAS dependiendo de su naturaleza y de lo que se sospecha:
• Por ejemplo, Esputo y lavados bronquiales se deben centrifugar antes de realizar exámenes en fresco:
• Huevos, eritrocitos, cristales de Charcot-Leyden y material necrótico.
• PRUEBAS SEROLÓGICAS para detección de antígenos parasitarios o anticuerpos:
• Pruebas de aglutinación
• Enzimoinmunoensayo (EIA)
• Ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA)
• Fijación de complemento
• Hemaglutinación indirecta,
• Inmunotransferencia porWestern blot,
• Dot-blot
• otras
• OTRAS PRUEBAS INMUNOLÓGICAS
• Intradermorreacciones (IDR). Detección de respuesta celular de memoria.
METODOS COPROPARASITOSCÓPICOS
CUALITATIVOS
Directo Concentración
Macroscópico Microscópico
Directo
húmedo
Directo
seco
Solución
salina
Eosina
Lugol
Flotación
Sedimentación
Willis
Molloy
Faust
Ritchie Teleman
Método de
Lutz (Copa
cónica)
Centrifugación
Espontánea
Carles
Barthélémy
Faust: Sulfato de zinc al 33%
Willis Molloy: Solución saturada de cloruro de sodio
Sheather: Solución saturada de sacarosa
Ritchie: Formol al 10%
Carles Barthélémy: Ácido acético
Teleman: Ácido clorhídrico al 15% o ácido acético
Sheater
METODOS COPROPARASITOSCÓPICOS CUANTITATIVOS
Dilución
Método de Stoll-Hausheer
HUEVOS Y LARVAS
Frotis grueso Método de Kato-katz
Helminto Leve Moderada Severa
Ancylostoma caninum 100-2 000 2 100-5 000 5 100 o más
Toxocara canis 100-20 000 20 100-50 000 50 100 o más
Criterio para determinar el grado de severidad de las geohelmintiasis por el número de
huevos evacuados por mililitro de heces de perro (Método de Stoll) (Martínez-Barbabosa,
et. al. 2011)
Diagrama modificado de http://www.medisur.sld.cu/index.php/medisur/article/view/2019/931
Colocar NAOH 0.1N hasta la marca 5.6 y heces hasta la
marca 6.
•Mezclar con varilla de vidrio
•Introducir 5 perlas de vidrio y agiitar vigorosamente por 1
min.
•Dejar reposar 15 min,
•Tomar hasta la marca 0.075 o 0.15 ml del centro del líquido
(no sedimento).
•Esta cantidad se reparte en dos portaobjetos y luego se
cuentan los huevos en ambos
El número de huevos o larvas contados en toda la preparación se multiplican por
los siguientes valores: considerando volumen tomado y consistencia de la muestra.
Heces Muestra Factor
Duras 0.075 200
Pastosas 0.075 400
Líquidas 0.075 800
Duras 0.15 100
Pastosas 0.15 200
Líquidas 0.15 400
OTROS METODOS COPROPARASITOSCÓPICOS O DE APOYO
AL ESTUDIO COPROPARASITOSCÓPICO
Cultivo
Termotropismo
Método de Harada-Mori
LARVAS
Método de Baerman-Moraes
LARVAS
Raspados Otros
Método de
Graham
HUEVECILLOS
Amiba en fresco
(Cucharilla
rectal)
Sondeo
duodenal
Rectosigmoidoscopía
https://slideplayer.com/slide/13567910/82/images/21/ENTEROTEST.jpg
https://slideplayer.es/slide/15195336/92/images/11/Enterotest.jpg
https://www.cegaspanama.net/images/joomlart/servicio
s_clinicos/servicio_de_rectosigmoidoscopia.png
https://www.infocarne.com/documentos/i
mages/enfermedades_parasitarias2_aparat
o_baermann.jpg
Diagrama modificado de http://www.medisur.sld.cu/index.php/medisur/article/view/2019/931
Agua
Tapón
Capa delgada de
materia fecal
Extremo del papel
filtro sin materia
fecal
https://www.researchgate.net/profile/Suzan_Al-
Azizz/publication/311877602/figure/fig2/AS:616369922007041@1523965449052/Figure-12-Filter-paper-strip-culture-c-
Petri-Dish-Culture-This-method-used-for.png
MÉTODO DE GRAHAM. PARA EL DIAGNÓSTICO DE LA ENTEROBIASIS
Huevos de 45 - 60 μm
Huevo larvado
Huevo inmaduro
Al observar la laminilla en el microscopio
SONDEO DUODENAL
Principalmente para detección de
huevos, larvas o adultos de parásitos
intestinales.
Aunque pueden detectarse parásitos
asociados a enfermedades
hepatobiliares.
Endoscopía del tracto gastrointestinal superior
Ver: Larvas Strongyloides en placas de agar (click en la liga) https://www.youtube.com/watch?v=OcIsOA6D1_w
OTROS MÉTODOS
https://www.archivosdemedicina.com/articles-images/Archivos-de-Medicina-
conteniendo-jugo-2-6-3-g003.png
http://www.faba.org.ar/fabainforma/385/acta-fig2.htm
Técnica de Digestión artificial o enzimática de
tejido para liberar larvas y determinar su número por
gramo de peso.
Triquinoscopía Directa
Detección de larvas en tejido
http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1728-
59172011000400006
https://www.redalyc.org/pdf/3214/321428102005.pdf
https://www.flickr.com/photos/dani01121996/27838080328/in/photostream/
CONCLUSIÓN
• Para el diagnóstico de las helmintiasis, así
como de otras parasitosis, es muy importante
considerar el cuadro clínico y la epidemiología
para seleccionar el método de laboratorio que
conduzca al diagnóstico más certero y junto
con esto tomar en cuenta la biología,
características morfológicas y el ciclo biológico
de los gusanos. Además, considerar que la
detección de varios de estos será utilizando la
detección indirecta de estos con, por ejemplo,
estudios inmunológicos.
http://www.dge.gob.pe/publicaciones/pub_invepi/iepi0.pdf
http://www.facmed.unam.mx/deptos/familiar/atfam81/neurocisticercosis.html
LIGAS RECOMENDADAS
• DPDx - Laboratory Identification of Parasites of Public Health Concern.
https://www.cdc.gov/dpdx/index.html
• Ligas a videos que se ligan durante la presentación:
• Video endoscopía del tracto gastrointestinal superior. https://www.youtube.com/watch?v=DanJzUi47zM
• Video Harada-Mori https://www.youtube.com/watch?v=pqwRe1KnSaU
• Video Baerman-https://www.youtube.com/watch?v=YpcdZDPKK9E
• Video Método de Graham https://www.youtube.com/watch?v=PhOF5az5_AI
• Larvas Strongyloides en placas de agarVer video https://www.youtube.com/watch?v=OcIsOA6D1_w
• Video técnica digestión enzimática de tejido. https://www.youtube.com/watch?v=fm_RE9ZSFa8
• Video Taenia solium: https://www.youtube.com/watch?v=9MxI2bMwFNE
• Video Fasciola https://www.youtube.com/watch?v=jWyVkTs1UFA
• Video Ancylostoma caninum https://www.youtube.com/watch?v=ZWJoQwR4H08
• Video Fasciola hepatica en endoscopia https://www.youtube.com/watch?v=siuqov1BlYc
• Video huevo a larva https://www.youtube.com/watch?v=cW3Nr4sUPz4
• Video de extirpación de quiste hidatidico. https://www.youtube.com/watch?v=yc1UYxpjOz4

UIII-IV_METODOS DIAGNOSTICOS PARA HELMINTOS.pdf

  • 1.
    • Curso: LABORATORIODE PARASITOLOGÍAY MICOLOGÍA • Carrera: Medicina 4º C Yolanda Romo Lozano 2023 Centro de Ciencias Básicas Departamento de Microbiología Este material es empleado con fines didácticos en una materia curricular Apoyo Unidades III y IV y laboratorio Métodos de diagnóstico para Helmintos de importancia médica.
  • 2.
    DIAGNÓSTICO DE LASHELMINTIASIS* MÉTODO INDIRECTOS: Detectan lesiones o respuesta que induce el parásito. • Estudios de gabinete • Análisis clínicos • Histopatología • Detección de moléculas secretadas y,o que se incrementan en el hospedero en respuesta al parásito. MÉTODOS DIRECTOS: Detectan al parásito • Detección directa del parásito: • Exámenes en fresco de muestras • Estudios coproparasitoscopicos cualitativos y cuantitativos • Cultivos • Detección de antígenos parasitarios. • Detección genética de parásitos * Una misma metodología puede, dado algunas situaciones, ser directa o indirecta. Por ejemplo, una prueba inmunológica como western-blot puede servir para detectar anticuerpos frente al parásito, así como para detectar antígenos parasitarios.
  • 3.
    DIAGNOSTICO DE LASHELMINTIASIS • Historia clínica • Datos epidemiológicos • Análisis clínicos: Por ej. Biometría hemática (eosinofilia superior al 20%) • Pruebas funcionales (de órganos) • Métodos serológicos y,o inmunológicos • Estudios de gabinete: - Radiología (RX) - Tomografía axial computarizada (TAC) - Resonancia magnética (RM) - Exámenes oftalmológicos - Endoscopia (diversos tipos) - entre otros Gnatostomiosis ocular http://www.vacunasyviajes.es/vacunasyviajes/Gnathostomiasis_Atlas.html#8 http://emssolutionsint.blogspot.com/2012/12/cisticercosis-triptico.html Neurocisticercosis (larvas como puntilleo blanquecino) RM https://www.medigraphic.com/pdfs/neumo/nt-2014/nt144d.pdf RX TAC Hidatidosis pulmonar Colonoscopia Tricocefalosis (se aprecian abundantes gusanos) https://www.elsevier.es/es-revista-endoscopia-335-articulo-diagnostico- incidental-tricocefalosis-mediante-colonoscopia-X0188989313270226
  • 4.
    DIAGNÓSTICO DE LASHELMINTIASIS. ALGUNAS CONSIDERACIONES • MUESTRAS donde podemos encontrar helmintos ya sea adultos o estadios inmaduros : • Materia fecal, biopsias, esputo, suero, lavados bronquiales, sangre, orina, entre otras. • PROCESO DE MUESTRAS dependiendo de su naturaleza y de lo que se sospecha: • Por ejemplo, Esputo y lavados bronquiales se deben centrifugar antes de realizar exámenes en fresco: • Huevos, eritrocitos, cristales de Charcot-Leyden y material necrótico. • PRUEBAS SEROLÓGICAS para detección de antígenos parasitarios o anticuerpos: • Pruebas de aglutinación • Enzimoinmunoensayo (EIA) • Ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA) • Fijación de complemento • Hemaglutinación indirecta, • Inmunotransferencia porWestern blot, • Dot-blot • otras • OTRAS PRUEBAS INMUNOLÓGICAS • Intradermorreacciones (IDR). Detección de respuesta celular de memoria.
  • 5.
    METODOS COPROPARASITOSCÓPICOS CUALITATIVOS Directo Concentración MacroscópicoMicroscópico Directo húmedo Directo seco Solución salina Eosina Lugol Flotación Sedimentación Willis Molloy Faust Ritchie Teleman Método de Lutz (Copa cónica) Centrifugación Espontánea Carles Barthélémy Faust: Sulfato de zinc al 33% Willis Molloy: Solución saturada de cloruro de sodio Sheather: Solución saturada de sacarosa Ritchie: Formol al 10% Carles Barthélémy: Ácido acético Teleman: Ácido clorhídrico al 15% o ácido acético Sheater
  • 6.
    METODOS COPROPARASITOSCÓPICOS CUANTITATIVOS Dilución Métodode Stoll-Hausheer HUEVOS Y LARVAS Frotis grueso Método de Kato-katz Helminto Leve Moderada Severa Ancylostoma caninum 100-2 000 2 100-5 000 5 100 o más Toxocara canis 100-20 000 20 100-50 000 50 100 o más Criterio para determinar el grado de severidad de las geohelmintiasis por el número de huevos evacuados por mililitro de heces de perro (Método de Stoll) (Martínez-Barbabosa, et. al. 2011) Diagrama modificado de http://www.medisur.sld.cu/index.php/medisur/article/view/2019/931 Colocar NAOH 0.1N hasta la marca 5.6 y heces hasta la marca 6. •Mezclar con varilla de vidrio •Introducir 5 perlas de vidrio y agiitar vigorosamente por 1 min. •Dejar reposar 15 min, •Tomar hasta la marca 0.075 o 0.15 ml del centro del líquido (no sedimento). •Esta cantidad se reparte en dos portaobjetos y luego se cuentan los huevos en ambos El número de huevos o larvas contados en toda la preparación se multiplican por los siguientes valores: considerando volumen tomado y consistencia de la muestra. Heces Muestra Factor Duras 0.075 200 Pastosas 0.075 400 Líquidas 0.075 800 Duras 0.15 100 Pastosas 0.15 200 Líquidas 0.15 400
  • 10.
    OTROS METODOS COPROPARASITOSCÓPICOSO DE APOYO AL ESTUDIO COPROPARASITOSCÓPICO Cultivo Termotropismo Método de Harada-Mori LARVAS Método de Baerman-Moraes LARVAS Raspados Otros Método de Graham HUEVECILLOS Amiba en fresco (Cucharilla rectal) Sondeo duodenal Rectosigmoidoscopía https://slideplayer.com/slide/13567910/82/images/21/ENTEROTEST.jpg https://slideplayer.es/slide/15195336/92/images/11/Enterotest.jpg https://www.cegaspanama.net/images/joomlart/servicio s_clinicos/servicio_de_rectosigmoidoscopia.png https://www.infocarne.com/documentos/i mages/enfermedades_parasitarias2_aparat o_baermann.jpg Diagrama modificado de http://www.medisur.sld.cu/index.php/medisur/article/view/2019/931 Agua Tapón Capa delgada de materia fecal Extremo del papel filtro sin materia fecal https://www.researchgate.net/profile/Suzan_Al- Azizz/publication/311877602/figure/fig2/AS:616369922007041@1523965449052/Figure-12-Filter-paper-strip-culture-c- Petri-Dish-Culture-This-method-used-for.png
  • 11.
    MÉTODO DE GRAHAM.PARA EL DIAGNÓSTICO DE LA ENTEROBIASIS Huevos de 45 - 60 μm Huevo larvado Huevo inmaduro Al observar la laminilla en el microscopio
  • 12.
    SONDEO DUODENAL Principalmente paradetección de huevos, larvas o adultos de parásitos intestinales. Aunque pueden detectarse parásitos asociados a enfermedades hepatobiliares. Endoscopía del tracto gastrointestinal superior
  • 13.
    Ver: Larvas Strongyloidesen placas de agar (click en la liga) https://www.youtube.com/watch?v=OcIsOA6D1_w
  • 14.
    OTROS MÉTODOS https://www.archivosdemedicina.com/articles-images/Archivos-de-Medicina- conteniendo-jugo-2-6-3-g003.png http://www.faba.org.ar/fabainforma/385/acta-fig2.htm Técnica deDigestión artificial o enzimática de tejido para liberar larvas y determinar su número por gramo de peso. Triquinoscopía Directa Detección de larvas en tejido http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1728- 59172011000400006 https://www.redalyc.org/pdf/3214/321428102005.pdf https://www.flickr.com/photos/dani01121996/27838080328/in/photostream/
  • 15.
    CONCLUSIÓN • Para eldiagnóstico de las helmintiasis, así como de otras parasitosis, es muy importante considerar el cuadro clínico y la epidemiología para seleccionar el método de laboratorio que conduzca al diagnóstico más certero y junto con esto tomar en cuenta la biología, características morfológicas y el ciclo biológico de los gusanos. Además, considerar que la detección de varios de estos será utilizando la detección indirecta de estos con, por ejemplo, estudios inmunológicos. http://www.dge.gob.pe/publicaciones/pub_invepi/iepi0.pdf http://www.facmed.unam.mx/deptos/familiar/atfam81/neurocisticercosis.html
  • 16.
    LIGAS RECOMENDADAS • DPDx- Laboratory Identification of Parasites of Public Health Concern. https://www.cdc.gov/dpdx/index.html • Ligas a videos que se ligan durante la presentación: • Video endoscopía del tracto gastrointestinal superior. https://www.youtube.com/watch?v=DanJzUi47zM • Video Harada-Mori https://www.youtube.com/watch?v=pqwRe1KnSaU • Video Baerman-https://www.youtube.com/watch?v=YpcdZDPKK9E • Video Método de Graham https://www.youtube.com/watch?v=PhOF5az5_AI • Larvas Strongyloides en placas de agarVer video https://www.youtube.com/watch?v=OcIsOA6D1_w • Video técnica digestión enzimática de tejido. https://www.youtube.com/watch?v=fm_RE9ZSFa8 • Video Taenia solium: https://www.youtube.com/watch?v=9MxI2bMwFNE • Video Fasciola https://www.youtube.com/watch?v=jWyVkTs1UFA • Video Ancylostoma caninum https://www.youtube.com/watch?v=ZWJoQwR4H08 • Video Fasciola hepatica en endoscopia https://www.youtube.com/watch?v=siuqov1BlYc • Video huevo a larva https://www.youtube.com/watch?v=cW3Nr4sUPz4 • Video de extirpación de quiste hidatidico. https://www.youtube.com/watch?v=yc1UYxpjOz4