1. HIBRIDACIÓN FLUORESCENTE
IN SITU (FISH)
TIANA ALARCON
BRIGITTE CASTRO
MARIA ALEJANDRA CHAPARRO
CAMILO MOLANO
CAROLINA PAEZ

2. DEFINICION
• La técnica consiste en preparar cortas secuencias
de DNA de una sola hebra, llamadas sondas, que
son complementarias de las secuencias de DNA
que se quieren marcar y examinar.
• Es muy utilizada en la detección de anomalías
cromosómicas.
• alta sensibilidad y especificidad

3. SONDAS
• Son secuencias cortas de ADN de una sola
hebra, que son complementarias de las
secuencias de ADN que se quieren marcar y
examinar.

4. Sondas especificas de
un locus
Hibridan a una región particular
de un gen. Esta sonda es útil
cuando se ha aislado una
pequeña parte de un gen y se
quiere averiguar en que
cromosoma se encuentra.
Sondas centroméricas
contienen secuencias
complementarias de las
secuencias repetidas que se
encuentran en los centrómeros
de los cromosomas. Como
pueden utilizarse sondas de
diferentes colores, cada
cromosoma puede ser marcado
de manera distinta, con lo que se
puede averiguar si un individuo
tiene el número correcto
Sondas para
cromosomas
completos
Son colecciones de sondas de un
tamaño reducido, cada una de
las cuales se hibrida a una
secuencia diferente a lo largo de
todo un cromosoma. Utilizando
estas librerias de sondas, se
puede marcar todo un
cromosoma generando un
cariotipo espectral.

5. • SONDAS DE SECUENCIA UNICA:para la deteccion de regiones especificas
Ej: regiones subtelomericas microdelecciones
• SONDAS CENTROMERICAS:son sondas alfa satelite que permiten la deteccion de
secuencias altamente repetitivas de las regiones pericentromericas
• SONDAS PARA REGIONES ESPECIFICAS:detecta
secuencias altamente repetitivas localizadas en determinadas regiones de los
cromosomas
Ej. Yq12
• SONDAS PARA EL PINTADO DE CROMOSOMAS
COMPLETOS (WCP):detectan secuencias de eucromatina en determinados brazos o
cromosomas completos
TIPOS DE SONDAS DE FISH - SECUENCIAS EN
EL GENOMA :

6. PROCEDIMIENTO
A . Moter ,U . B . Gobel,2000

7. FISH (Hibridación in situ con fluorescencia)

10. HISTORIA
• Las primeras técnica de FISH fue desarrollada,
independientemente por Padue, Gall, John y
sus colaboradores en 1969, pero fue
propuesto por Olsen.
• En 1989, DeLong y su equipo de trabajo
emplearon oligonucleótidos marcados con
fluorocromos para detectar células
microbianas crecidas de manera individual.

11. APLICACIONES
• Detecta anomalías: Aneuploidía, la pérdida de
una región cromosómica, un cromosoma entero
o para monitorizar la progresión de una
aberración.
• En el diagnóstico de una enfermedad genética.
• FISH se puede aplicar a la investigación como: el
mapeo de genes, identificación de nuevos
oncogenes que contribuyen a diversos tipos de
cáncer.

12. • Sospecha de sindrome de microdelecion
• Retraso mental
• Parejas con abortos de repeticion
• Cromosomas marcadores
• Caracterizacion de reestructuraciones
Cromosomicas
• Diagnostico prenatal de las aneuploidias
mas frecuentes
• Diagnostico de diferentes aneupolidias en
Abortos espontaneos

14. VENTAJA
• Proporciona una resolución
considerablemente superior a la de las
técnicas de bandas de alta resolución; ya que
puede detectar deleciones de tamaño tan
pequeño como 1 millón de pares de bases.
• Pueden detectar aneuploidias empleando
cromosomas en interfase, no es necesario
estimular a las células para que se dividan con
el fin de obtener cromosomas en metafase.

15. COMPARACION
• Convencional: Técnicas de bandeo de cromosomas
(tinción Giemsa) revolucionó el análisis citogenético y
han sido fundamentales en la comprensión de los
cambios genéticos en ambas enfermedades
constitucionales y adquiridos.
• La resolución del análisis de bandas es de tal manera
que sólo puede detectar reordenamientos que
implican 0,3 Mb de ADN.
• Técnicas de bandas se limitan a células mitóticas
activas.

16. • La tinción de cromosomas con Giemsa permite el
análisis de los diferentes tipos como:
cromosomas policéntricos, cromosomas en
anillo, intercambios de cromátidas y fragmentos.
• Otros tipos de aberraciones cromosómicas tales
como translocaciones e inversiones recíprocas no
son normalmente reconocible con la tinción de
Giemsa, pero pueden ser visualizados por FISH.

18. Nueva: La tecnología de Microarreglos.
• Analizar diferentes tipos de muestras biológicas
(tejidos, proteínas y material genético) y otras
moléculas de manera simultánea por ensayo.
• La versatilidad de esta técnica permite utilizarla
en estudios de dosis-respuesta, para establecer
perfiles de expresión diferencial de genes en
condiciones experimentales distintas
(enfermedades y tratamientos) en el análisis de
polimorfismos, presencia de metilaciones,
mutaciones puntuales e identificación de blancos
terapéuticos.

19. E. Medina, 2009

20. Bishop,2010

21. INTERPRETACION

22. Internacional System for Human Cytogenetics Nomenclature (ISCN), 2009.

23. IATREIA Vol 24(3) septiembre 2011

24. Acta méd. costarric. Vol 53 (1), enero-marzo 2011

25. Acta méd. costarric. Vol 53 (1), enero-marzo 2011

26. Acta méd. costarric. Vol 53 (1), enero-marzo 2011

27. LSI BCR/ABL ES Dual Color
Translocation Probe
hybridized to a nucleus
showing one green (native
BCR), one large orange
(native ABL), one smaller
orange (ES) and one fused
orange/green (20IGIF)
signal pattern.

28. Sondas teloméricas

29. Sondas especificas para los
cromosomas 13,18,21,X

31. SONDA DE PINTADO DE CROMOSOMA 1

32. GRACIAS