Doctoral thesis final exposition.
IIB-INTECH 29/9/2010 10:30-12:30
by Martin Blasco.
Degree: Ph. D. in Molecular Biology and Biotechnology.
Theme, sex differentiation, temperature sex determination, steroidogenesis, androgen biosynthesis. LC-MS.
Tema 19. Inmunología y el sistema inmunitario 2024
Steroidogenesis and differentiation in the pejerrey Odontesthes bonariensis. Ph. D. Thesis Martín. Blasco
1. Esteroidogénesis y diferenciación sexual en el pejerrey Lic. Martín Blasco Director: Dr. Gustavo Somoza1 Co-Directora: Dra. Denise Vizziano2 IIB-INTECH Dpto. Oceanología. UdelaR.URUGUAY 1
2. Composición de la tesis Cuantificación de andrógenos Perfiles de expresión de marcadores Síntesis de andrógenos en órganos del pejerrey 2
16. Desarrollo de la estrategia de estudio La producción de esteroides es muydifícil de estudiar en los estadíostempranos Biología molecular para el estudio de la capacidadandrogénica. ¿Quéandrógenos son importantes? ¿Quéenzimasestáninvolucradas? Elección de genes. 13
17. 14 Capítulo I. Introducción. Estudio de la esteroidogénesis Espermatogénesis Caracteressexualessecundarios
18. Capítulo I. Materiales y métodos. “Bioquímicaclásica” Resolución Extracción Incubación TLC T. indif. Muestras T. juv. Etc. HPLC Fraccionamiento Identificacióndefinitiva DPMs/mg DPMs/pico 15
26. Cap. I. Discusión y conclusiones. 23 Semana 5 TFM 11-KT 11-KT ¿Hígado? Juveniles ¿Sangre? 11-KT 11β-OHA4 Adultos
27. 24 Cap. I. Discusión y conclusiones. A4 11β-OHA4 11-KA4 11-KT
28. Cap. I. Discusión y conclusiones. Androgénesis en otrosórganos Riñón 11β-OHA4 Ovario SNC Hígado 25
29. Potencialandrogénicodurante el desarrollogonadal ¿Andrógenos? Enzimas clave en la síntesis de andrógenos (P450-scc y P450-11b) Estudio de la expresión en tejidos Expresióntempranadurante el TSD y la diferenciación a TFM y TFH 26
30. Capítulo II. Patrones de expresióngénica Caracterización de las secuencias de cyp11a1 y cyp11b1 OligosqPCR Testículos ♀ Tejidos ♂ TFH TFM Sitios de expresión Perfiles de expresión t= 1, 2, ..9 spe 27
32. Cap. II. Resultados. Secuencia y características de la cyp11a1 Región de unión a esteroide (Tsujita et al, 1993). Región de unión a adrenodoxina (Wada et al, 1992). Región de coordinación del grupohemo. 29
33. Cap. II. Resultados. Secuencia y características de la cyp11b1 Sitio de unión a esteroides Unión a oxígeno (C) Región de Ozol (D) Sitioaromático, (E) Sitio de unión al hemo 30
44. 38 Capítulo III. Estrategia HPLC-ESI-MS Esteroides de interésmedidospor RIA en un modeloconocido Carassiusauratus
45. Cap. III. Materialesy métodos. Ionesmoleculares y linealidad Estándares de esteroides 1 ppm SCAN LC-MS ENFOCADO 0,2-50 ppb 39
46. Cap. III. Materiales y métodos. Determinaciones en plasma Evaporación Extracto en fase móvil (CH3CN:H2O) Histología gonadal [HE:E] Extracción orgánica [Partición-Congelación] Centrifugación 30 min x 350 rcf Extracción por punción del pedúnculo caudal LC-MS 40
53. Cap. III. Conclusiones Cuantificaciónsimultánea de T, 11-KT y 11β-OHA4. Los niveles de detección y cuantificaciónpermitenestudiosfisiológicos. Compatible con otrossistemas (porej. MS/MS). Estudio de bioquímica de esteroides (metabolómica). 45
54. 46 Cap. III. Proyecciones Relacióngónada Circulación Estudio de viasmetabólicascompletas Aplicación Análisis de 11-KT/11β-OHA4 en otrosvertebrados
55. 47 Cap. III. Proyecciones. Anticipo. Macho espermiante Suero
56. 48 Conclusionesgenerales Identificación de los principalesandrógenostesticulares. A4 11β-OHA4 11-KA4 11-KT Machos en diferenciación molecular 11-KT Dimorfismo en cyp11a1 y cyp11b1 Desarrollo testicular temprano Herramientasparaestudio de andrógenos (cuali-cuantitativo)