1) El gen seg D del fago T4 codifica una endonucleasa de sitio específico. 2) Se determinó con más precisión la ubicación del sitio de SegD, localizado a 52 pares de bases de la inserción del marco de lectura de SegD en el gen 23. 3) Se concluyó que la secuencia del sitio de SegD en los fagos analizados era idéntica a la del genoma T2L.

1. MARIANA TORO CASTAÑO
TERCER SEMESTRE
MEDICINA

2. INTRODUCTION
Seg D
Located between genes 23 and 24.
It is oriented in opposite direction to these
genes. Encodes a site-specific
endonuclease.
Endonuclease
enzyme that breaks down a
nucleotide chain in two or more
shorter chains.
Phage T4
is a bacteriophage that infects Escherichia coli
bacteria. The T4 phage is a member of the T-
even phage and is capable undergoing only
a lytic lifecycle and not the Lysogenic lifecycle
Intron
nucleotide noncoding sequence
within a gene

3. The preferable cleavage sites of Seg endonucleases have
been found in genomes of T4-related phages that lack
genes of these endonucleases.
.
INTRODUCTION
The bacteriophage T4 genome contains 15 homing
endonuclease ORFs that are localized in introns,
and 12 ORFs, mobA-E and segA-G, that are free-
standing

4. OBJECTIVE
Was showing that gene seg D
encodes a site-specific
endonuclease, which has common
properties with other phage T4 Seg
nucleases and some essential
differences.
The main objective

5. MATERIALES Y
MÉTODOS
cepa E. coli JM109 se
usó como huésped
para la construcción
de plásmidos y para
el cruce entre
plásmidos y fagos.

6. MATERIALES Y MÉTODOS
Se necesita el plásmido como
vector para el transporte de un
gen que se necesita evaluar su
expresión en otro organismo. El
plásmido pSDET-19mod se usó
para la expresión del gen segD en
E Coli.
Fundamento¿Para qué?
CONSTRUCCIÓN DE PLÁSMIDO
El vector de clonación es
cortado en formas separadas
con las mismas
endonucleasas de
restricción. Los fragmentos
que van a ser clonados son
ligados al vector de
clonación. El ADN
recombinante obtenido es

7. MATERIALES Y MÉTODOS
La endonucleasa se aisló de una fracción
soluble de células inducidas. En la
primera etapa, la purificación se llevó a
cabo usando cromatografía de afinidad
en Ni-NTA agarosa de acuerdo con el
protocolo estándar
FundamentoFundamento
CROMATOGRAFÍA
ACTIVIDAD DEL
EXTRACTO
¿Para qué?
Determinación de la actividad de SegD
en extractos de células de E. coli
infectadas con fago T4
.
¿Para qué?
La purificación de los ácidos nucleicos a partir
de los extractos celulares son combinaciones
de métodos. Primero se hace la extracción
con solventes para eliminar contaminantes,
luego precipitación de proteínas y por último
la precipitación de los ácidos nucleicos
La separación de componentes de una
mezcla que se encuentran en un líquido o
gas es el resultado de las diferentes
interacciones de los solutos a medida que se
desplazan alrededor o sobre una sustancia
líquida o sólida

8. MÉTODOS Fundamento: el método se fundamenta en
aumentar un segmento específico de ADN
usando una polimerasa que tiene una
actividad específica de síntesis, reparación
y capacidad para extender o acortar el
ADN, obteniéndose miles de copias.
Para qué:
La PCR es usada para amplificar un
determinado gen que puede introducirse
en un vector y luego en un organismo, que
al duplicarse también duplicará el objeto
de estudio. Así se logra obtener una
cantidad suficiente de un gen o producir a
gran escala la proteína que este gen
codifica
PCR

9. RESULTADOS
Figura 2. Actividad de
endonucleasa de la
proteína SegD

10. Figura 3. Identificación de los
puntos de división y límites
del sitio de reconocimiento
para SegD

11. Figura 4. Efecto de las
modificaciones de la citosina en
el ADN del fago T-even sobre la
actividad de la endonucleasa
SegD.

12. Figura 5. Actividad de
endonucleasa SegD en
extractos de células de
E. coli infectadas por el
fago Т4.

13. DISCUSSION
Author Contribution OR
Belle et al., 2002; Liu
et al., 2003
This phenomenon may be caused by the
absence of SegD-specific breaks in vivo.
To confirm this assumption we used their
approach, which was applied earlier for
SegF and SegG endonucleases.
Miller et al., 2003 In this connection, it was suggested that
gene segD was expressed in the course of
the Т4 infection.
Luke et al., 2002 For control we also analyzed the appearance of
DNA breaks introduced by SegC endonuclease,
which, as SegD, is expressed at the late stage of
infection
YES NOT

14. CONCLUSIONS
SegD is a site-specific endonuclease. In addition, the
location of the SegD site was found more precisely, being
located in gene 23 at a distance of 52 bp from the SegD
ORF insertion site. It was also concluded that the
sequence of the SegD site in the analyzed phages was
identical to that of the T2L genome.
2. DNA modifications in the T-even phages do not protect
it from cleavage generated by the SegD endonuclease
and variants of the phage DNAs were digested by SegD
with close efficiencies. It is also stated that the SegD gene
is expressed in the development cycle of bacteriophage
T4.