1. Accelerated clinical course of prion
disease in mice compromised
in repair of oxidative DNA damage
Clara M.O. Jallanda, Sylvie L. Benestad, Cecilie Ersdal, Katja Scheffler, Rajikala
Suganthand, Yusaku Nakabeppue, Lars Eidec, Magnar Bjørås, Michael A. Tranulis
Vanessa Perez Carrillo y Manuela Munoz Gomez
Estudiantes de Medicina, III Semestre

2. • When purines suffer oxidation of the ring atom, mutagenic 8-oxoG is
formed.
• Mammalian cells express lots of DNA glycosylases that removes 8
oxoG.
• PrP deficient mice also show dramatically increased levels of oxidative
damage.
• Mice that are deficient in repair of oxidative DNA base lesions, prion
disease occurs through an accelerated toxic and clinical phase.

3. Reversión
Reversión
directa del DNA
directa del DNA
dañado
dañado
Dímeros de
Dímeros de
pirimidina
pirimidina
Residuos de
Residuos de
guanina
guanina
alquilada
alquilada
Bloquea
Bloquea
transcripción o
transcripción o
replicación
replicación
Adición de
Adición de
grupos metilo
grupos metilo
yyetilo
etilo
Fotorreactivación
Fotorreactivación

4. -Reparación por escisión: Se elimina el
nucleótido, base nitrogenada o
segmento de DNA defectuoso y se
reemplaza por una secuencia correcta.
NER
NER
BER
BER
Reconocimiento
Reconocimiento
lesión
lesión
Lesiones
Lesiones
sutiles
sutiles
Hidrolisis
Hidrolisis
enlaces
enlaces
DNA
DNA
polimerasa
polimerasa
DNA
DNA
ligasa
ligasa
Causan
Causan
graves daños
graves daños

5. -Reparación de roturas de doble hélice: Repara
errores causados en la replicación o que la
impiden.
Recombinación
Recombinación
Se repara con
Se repara con
una hebra hija
una hebra hija
sana
sana
Apareamiento
Apareamiento
incorrecto
incorrecto
Reconocer bases
Reconocer bases
mal apareadas
mal apareadas
Eliminarlas
Eliminarlas
Reponerlas
Reponerlas
Errores en
Errores en
replicación o
replicación o
recombinación
recombinación

6. Son agentes que no
contienen DNA o RNA,
se
propagan
infectando proteínas
normales.

7. Se presenta en los genes ogg1 que repara bases por escisión,
principalmente el 8oxoG que se forma por la exposición a los ROS y
mutyh que se encarga de reparar el daño oxidativo del DNA, cortando
bases de adenina que están mal apareadas con G, C.
8oxoG formado por oxidación del anillo de las purinas y causa
apareamientos incorrectos.

8. Understand the action of prions in different organs of the
body and the way in which the disease develops.

9. •
•
•
•
Ética
Ratones
Inoculo
Diseño experimental

10. • Inmunohistoquímica
• Western Blot para detectar PrPSc
• Detección de daños en el DNA

11. •
El estudio se llevó a cabo de acuerdo con
el
Reglamento
noruego
sobre
experimentación animal.
•
Fue aprobado por el Comité de Ética de
la experimentación animal y por la
Autoridad de Investigación de Animales
de Noruega.

12. 30 Ratones
30 Ratones
12 C57Bl/6Y (wild12 C57Bl/6Y (wildtype)
type)
18 transgenic ogg1 //
18 transgenic ogg1
mutyh //mice
mutyh mice
Criterios de inclusión: Ratones hembra con peso de
20g en la inoculación.

13. SSBP/1 sacado de
SSBP/1 sacado de
ovejas scrapie
ovejas scrapie
Cabras
Cabras
RML
RML
Ratón C57Bl/6Y
Ratón C57Bl/6Y

14. Ratones --controles
Ratones controles
Anestesiados ee
Anestesiados
inoculados
inoculados
Grabados yy
Grabados
monitoreados en busca
monitoreados en busca
de signos
de signos
Inmunohistoquímica
Inmunohistoquímica
eehistopatología
histopatología
Corte longitudinal del
Corte longitudinal del
cerebro
cerebro
Fueron sacrificados
Fueron sacrificados
yyse extrajeron los
se extrajeron los
órganos
órganos
En busca de PrPSc yy
En busca de PrPSc
GFAP que marca
GFAP que marca
astrocitos
astrocitos
La otra mitad del
La otra mitad del
cerebro se congeló
cerebro se congeló
Western Blot para
Western Blot para
buscar PrPSc
buscar PrPSc

15. Luego de la fijación, se
Luego de la fijación, se
deshidratan tejidos yy
deshidratan tejidos
se meten en parafina
se meten en parafina
Sumergir tejido en acido
Sumergir tejido en acido
fórmico, lavarlo yy
fórmico, lavarlo
esterilizarlo
esterilizarlo
Exponer aa
Exponer
proteinasa K
proteinasa K
Analizar: la corteza del
Analizar: la corteza del
colículo superior,
colículo superior,
hipotálamo, tálamo,
hipotálamo, tálamo,
núcleo septal
núcleo septal
Tinción
Tinción
para GFAP
para GFAP
Aplicar coctel de
Aplicar coctel de
anticuerpos para
anticuerpos para
visualizar PrPSc
visualizar PrPSc
Determinar
Determinar
grado de
grado de
vacuolización 0-5
vacuolización 0-5
Es la identificación de un tejido por medio de una
interacción antígeno-anticuerpo, donde el anticuerpo
esta marcado y se colorea la célula para demostrar la
presencia y localización de una molécula de interés.

16. Se usa para determinar proteínas de una muestra especifica. Las
proteínas son separadas por electroforesis en gel según su tamaño,
por medio de SDS-PAGE, se disuelven con SDS cargado
las proteínas van a un
negativamente,
filtro
que
tiene
anticuerpos
y
reaccionan con la
proteína de interés.

17. Las muestras
Las muestras
del cerebro se
del cerebro se
echaron en
echaron en
buffer
buffer
Se incubaron con anticuerpo yy
Se incubaron con anticuerpo
un segundo anticuerpo se uso
un segundo anticuerpo se uso
para visualizar las bandas con
para visualizar las bandas con
imagen de fluorescencia
imagen de fluorescencia
La actividad peroxidasa se
La actividad peroxidasa se
revelo con un sustrato de
revelo con un sustrato de
quimioluminiscencia.
quimioluminiscencia.
La inmunodeteccion se hizo
usando anticuerpo monoclonal en
el que se reconocia el aminoacido
YEDRYYRE, que corresponde a los
codones 145-152 en PrP humana.

18. •
Determina la expresión de genes
en diversos tejidos. Amplificación
de RNA a través de la síntesis
previa de su cDNA, usando una
transcriptasa inversa, seguido de
varios ciclos de PCR convencional.
•
Se realiza PCRrt para detección de
daño en el DNA nuclear y
mitocondrial.

19. RESULTADOS

23. AUTHOR
WHAT DID HE SAY?
(Wang, X et al., 2010)
“Because neurons in different brain YES
areas differ in their vulnerability to ROSmediated damage, it might be assumed
that the regional distribution of prion
pathologies could be influenced by
reduced BER enzyme activities.”
(B. Dalhus, et al., 2009
M.L. Hegde, et al.; 2008)
“BER is the major pathway for removal YES
of DNA bases damaged by reactive
oxygen species, in both the nucleus and
the mitochondria.”
“It
has
previously
been YES
(J. Tatzelt, et al.; 1995)
ARE THEY AGREE? YES OR NO
documented in cell culture
experiments that prion replication
selectively modifies cellular stress
responses.”
(S. Akhtar, et al
G. Tamguney, et al.; 2008)
“Many previous studies have YES
identified genetic elements that
influence the incubation period of
experimental prion disease”

24. We think that is really important
We think that is really important
and also interesting to know about
and also interesting to know about
how ROS can affect and make aa
how ROS can affect and make
certain damage in our DNA, causing
certain damage in our DNA, causing
lot of deseases and thus try to stop
lot of deseases and thus try to stop
it.
it.

25. We liked understanding our
complex regulation system
based on BER, that is the major
pathway for removal of damage
DNA bases by reactive oxygen
species in the nucleus and in
the mitochondria, and when it is
affect may be because a lost or a
deletion in the enzymes that
leads to the manifestation of
some important illness.

26. It is absolutely engaging to know
It is absolutely engaging to know
the reason of aa lot of
the reason of
lot of
neurodegenerative diseases that
neurodegenerative diseases that
appear in our society like
appear in our society like
Alzheimer disease (AD), Parkinson
Alzheimer disease (AD), Parkinson
disease, Huntington disease, and
disease, Huntington disease, and
the prion diseases, such as
the prion diseases, such as
Creutzfeldt–Jakob disease (CJD)
Creutzfeldt–Jakob disease (CJD)
and the most important thing is
and the most important thing is
that knowing why they occur we
that knowing why they occur we
can treat all of them.
can treat all of them.

27. ••
We also think that is very important to evaluate
We also think that is very important to evaluate
and analyzed the brain areas to generate the
and analyzed the brain areas to generate the
lesion profile caused by the prions: dorsal half
lesion profile caused by the prions: dorsal half
of the medulla oblongata, cerebellar cortex of
of the medulla oblongata, cerebellar cortex of
the folia, cortex of the superior colliculus,
the folia, cortex of the superior colliculus,
hypothalamus, thalamus, hippocampus, septal
hypothalamus, thalamus, hippocampus, septal
nuclei, cerebral cortex dorsal to the corpus
nuclei, cerebral cortex dorsal to the corpus
callosum, and cerebral cortex dorsal to the
callosum, and cerebral cortex dorsal to the
septal nuclei, look for the degree of
septal nuclei, look for the degree of
vacuolization and finally make aaconclusion of
vacuolization and finally make conclusion of
which is the area that prions affect the most
which is the area that prions affect the most
and in which they have more affinity.
and in which they have more affinity.

30. A DREAM IS A WISH YOU COME TRUE