1. Colesterol Total
Perfil lipídico:
Universidad de Talca
Facultad de Ciencias de la Salud
Departamento de Inmunohematología y
Bioquímica Clínica
Nombre: Paula Romero O.
Ramo: Bioquímica Clínica II
Docentes: MgSc. TM Elba Leiva.
MgSc. TM Roxana Orrego
MgSc. TM Luis Guzmán
01-octubre-2013
2. Introducción
Compuesto acíclico de 27 carbonos, todos sus carbonos
provienen del acetato.
Estructura molecular:
Un núcleo ciclopentanoperhidrofenantreno, con sus cuatro
anillos fusionados.
Un grupo hidroxilo en C3.
Un centro insaturado entre C5 y C6.
Una cadena hidrocarbonada ramificada de 8 carbonos unidos al
anillo D en posición 17.
Dos grupos metilos en posición 10 y 13, que corresponden a los
carbonos 18 y 19.
4. Destinos del colesterol:
Incorporación en las membranas del hepatocito.
Exportación: colesterol biliar, ácidos biliares, colesterol
esterificado.
Regulación de la síntesis de
colesterol:
HMG-CoA reductasa.
Efectos hipolipemiantes de las estatinas.
6. Colesterol total
Método CHOD-PAP. Prueba enzimática colorimétrica para colesterol con factor
aclarante de lípidos.
Esteres de colesterol + H2O colesterol + ácidos grasos
Colesterol + O2 colestene-3-ona + H2O2
2H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol quinoneimina + 4 H2O2
Linealidad: hasta 750 mg/dL
Colesterol Liquiform: reacción de punto final
Esteres de colesterol Colesterol + Ácidos grasos
Colesterol + O2 Colest-4-en-ona + H202
2H2O2 + Fenol + 4-Aminoantipirina Antipirilquinonimina + 4H2O
linealidad: hasta 500 mg/dL
Método Liebermann-Burchard Medio fuertemente ácido.
Colesterol ión carbonio 3,5-colestadieno ácido colesta-hexaeno-sulfónico
Método Abell-Levy-Brodie-Kendall
1. Extracción del colesterol con zeolita.
2. Hidrólisis química de los esteres (saponificación)
3. Medición del colesterol total por la reacción L-B.
7. Condición Abell-Levy-Brodie-
Kendall
Liebermann-Burchard
(L-B)
Enzimáticos
Temperatura 50°C, hidrólisis
25°C, reacción
colorimétrica
Ambiente, extracción,
reacción.
37°C
Vol. De muestra 500 µL 500 µL 4 µL
Fracción del vol. De
muestra
0,091 para hidrólisis 0,1 para extracción 0,01
Concentración final de
reactivos
Hidrólisis
KOH: 0,322 mol/L
Etanol: 909 g/L
Extracción
Hexano 50% (v/v)
Reacción colorimétrica
Anhídrido acético: 64,5%
v/v
Ácido sulfúrico : 3,2% v/v
Ácido acético: 32,3% v/v
Mezcla de extracción
insoluble (en
isopropanol 99%)
Isopropanol 99%: 990g/L
Zeolita: 320g/L
CuSO4* H2O: 16 g/L
Caolín: 32 g/L
Ca(OH)2 : 32 g/L
Mezcla de reacción
Anhídrido acético 60% v/v
Ácido sulfúrico: 30% v/v
Ácido acético:10v/v
Colesterol esterasa:
40U/L
Colesterol oxidasa: 56U/L
Peroxidasa: 1U/L
Colato de sodio:
15mmol/L
4-Aminoantipirina: 0,4
mmol/L
Hidroxibenzoato de sodio:
mmol/L
Buffer fosfato: 90 mmol/
L (pH:6,75)
EDTA: 8 mmol/L
Tiempo de reacción Hidrólisis: 60 minutos
Reacción : 30 minutos
extracción: 20 minutos
AutoAnalyzer-II: 8 min
10 minutos
Longitud de onda 620 nm 630 nm 505 nm, 600 nm
secundaria
Linealidad 5 g/L (12,5 mmol/L) 4 g/L 5 g/L
Precisión - 2.879 mg/L, <3% 1.845 mg/L, <3%
8. Referencias Bibliográficas
Lehninger. Fundamentos de Bioquímica, capitulo 21,
biosíntesis de lípidos.
Química clínica Métodos. Pesce/Kaplan. Editorial medica
panamericana.1991, 1° Edición, Cap. 18, pág. 1164-
1186
Revista española de obesidad. Metabolismo del
colesterol: bases actualizadas. Vol. 7, Núm. 6,
Noviembre-diciembre 2009. V. Navarro et al.
Clin Invest Arterioscl. 2012; 24(1): 40-52. Documento
abordaje de la dislipidemia. Sociedad española de
Arteriosclerosis (parte II). J. Millán Núñez-Cortés et al.
9. Serum Cholesterol and
Nigrostriatal R2* Values in
Parkinson’s Disease
Guangwei Du1, Mechelle M. Lewis1,2, Michele L. Shaffer6, Honglei Chen7, Qing X. Yang3,4,
Richard B. Mailman1,2, Xuemei Huang1,2,3,4,5*
Paper:
Universidad de Talca
Facultad de Ciencias de la Salud
Departamento de Inmunohematología y Bioquímica Clínica
Nombre: Paula Romero O.
Ramo: Bioquímica Clínica II
Docentes: MgSc. TM Elba Leiva.
MgSc. TM Roxana Orrego
MgSc. TM Luis Guzmán
01-octubre-2013
Revista Plos One.
Publicado: 17-abril-2012
10. Introducción:
Enfermedad de Parkinson (PD): etiología idiopática multifactorial
Perdida de neuronas dopamenérgicas en SN y de hierro en SN Autopsia en PD.
Hierro unido a Ferritina sérica, tiempo de relajación transversal de protones (T2*).
La velocidad de relajación transversal de los protones (R2 * =1/T2 *) se
correlaciona con la concentración de hierro en el tejido cerebral y se aumenta en la
sustancia gris de pacientes con enfermedad de Parkinson.
Depósitos de hierro en el cerebro patogenia del Parkinson.
Es posible que el aumento de hierro sea un mecanismo compensatorio debido a la
patología primaria. (Fe como cofactor para la síntesis y degradación de
catecolaminas).
Asociación inversa entre el colesterol y la aparición de la enfermedad de Parkinson.
Hipótesis:
El aumento de los niveles de colesterol sérico estaasociado con una menor
acumulación de hierro en la SN y se relaciona con estructuras negroestriadas en PD.
Objetivo:
proporcionar evidencias de que el colesterol alto en suero en pacientes PD puede ser
asociado con contenidos bajos de hierro en la SN y GP.
11. Métodos.
•50 sujetos con PD
•29 controles
• En Unified PD Rating Scale part III (UPDRS-III) se obtuvieron puntuaciones motoras de los
sujetos con PD.
•La dosis equivalente de levodopa (LEDD) fue estimada para sujetos con enfermedad de
Parkinson.
Sujetos
•Muestras de sangre en ayunas (4ml)
•Se dejaron coagular por 30min y se centrifugaron para separar el suero.
•Los lípidos en suero se midieron según el manual Vitros Chemistry product.
Determinación de
niveles de colesterol en
suero total en ayunas y
en LDL
•Todos los sujetos fueron escaneados utilizando un escáner Tesla MR escáner 3.0.
• Se obtuvieron imágenes de alta resolución T1 y T2, solo las imágenes cargadas con T2*
fueron recolectadas.
Obtención de los datos
MRI
•Segmentación de regiones de interés (ROIs).La sustancia negra fue delineada
manualmente. La distribución de neuronas dopaminergicas dentro de la sustancia negra es
heterogénea y posiblemente se extiende a la parte reticulada. El putamen, núcleo caudado, y
globo pálido (GP) fueron segmentados utilizando un atlas probabilístico basado en la
segmentación automática de software AutoSeg.
•Mapas R2 *.
Procesamientos y
análisis de imagenes
•Test T y prueba exacta de Fisher
•Valores R2* regionales y niveles de colesterol sérico se compararon por separado entre la
enfermedad de parkinson y controles por análisis de covarianza con ajustes para la edad, el
género, y el uso de los medicamentos para bajar el colesterol (estatinas).
• Las correlaciones entre los valores R2 * y los niveles de colesterol en suero, en sujetos con
enfermedad de parkinson y control se determinaron utilizando coeficientes de correlación
parcial de Spearman, con ajuste por los efectos de la edad, el género, y el uso de estatinas
tanto en PD y los controles por separado.
Análisis estadísticos
12. Resultados
Existían valores extremos para
cada grupo en cuanto a
colesterol total (290 mg/dL para
PD y 285 mg/dL para control).
Debido a que estos valores
extremos pueden sesgar el
análisis de las correlaciones, los
resultados restantes provienen
de 39 sujetos PD y 28 controles
con los dos valores extremos
excluidos.
o Los valores de R2 * en
el SN se asociaron con
tres mediciones
clínicas
14. Discusión
Gorell JM.
et al. 1995
• Sujetos PD mostraron un aumento significativo en el valor R2* en el SN en
comparación con los controles en el presente estudio. Además, encontramos una
correlación significativa entre el valor R2* de SN y los tres valores clínicos en PD.
Esto es consistente con la idea que R2* en el SN puede tener utilidad como un
marcador de imágenes para la progresión de PD
Martin WR.
et al.2008
• Consecuentemente, una limitación del estudio es que ellos no han podido
explorar la relación entre R2*y las mediciones clínicas en una forma más
detallada como se ha realizado en estudios previos
Huang x. et
al. 2007
• Al igual que el estudio citado, no se encontró una asociación entre los niveles de
colesterol y la duración de la enfermedad
Ikeda k. et
al. 2011
• La información actual sugiere que en el grupo PD, los niveles más altos de
colesterol parecen estar asociadas con mayores puntuaciones motoras de
UPDRS-III, en consonancia con el reciente informe, que se cita.
15. Conclusión
Aunque no hubo una diferencia global en la acumulación de hierro
en el GP entre PD y controles, el colesterol mayor en la PD se asoció
con un menor contenido de hierro en esta estructura. Esta
asociación también es PD-específica y no se observó en los
controles.
El presente estudio tiene varias limitaciones. En primer lugar,
aunque nuestro tamaño de muestra de 40 pacientes y 29 controles
es considerable en comparación a algunos otros estudios de
neuroimageneología de PD, es una muestra relativamente pequeña
para un estudio de corte transversal. En segundo lugar, de los
sujetos que participaron en el estudio, nueve pacientes con PD y
seis controles usan estatinas. El uso de estatinas puede afectar a
estos datos en formas complicadas debido a que estos
medicamentos no sólo modifican los niveles de colesterol, sino que
también se ha planteado la hipótesis de que tienen propiedades
anti-neurodegenerativas. En el presente estudio, los posibles efectos
causados por las estatinas se ajustaron mediante análisis de
correlación parcial con el uso de estatinas como co-variable.
En resumen, este estudio es el primero que relaciona los niveles
de colesterol en suero con el contenido de hierro en las estructuras
nigroestriatales en PD.