1. En la sepsis, los principales sustratos para la formación de triglicéridos hepáticos son los productos de la lipólisis del tejido adiposo (ácidos grasos libres y glicerol), cuyos niveles aumentan, mientras que el aporte de sustratos de la gluconeogénesis (DHAP) disminuye. 2. Esto da lugar a un aumento de la síntesis de triglicéridos hepáticos y la formación de esteatosis hepática en la sepsis. 3. El estudio analiza los sustratos metab
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Lipolisis adiposa y esteatosis hepática en sepsis
1. LIPÓLISIS DEL TEJIDO ADIPOSO Y FORMACIÓN DE
TRIGLICÉRIDOS HEPÁTICOS EN SEPSIS.
Francisco J. Santaolalla-Sánchez, Gorka Pinedo, Alberto Ugedo-Alzaga,
Carlos Uchuari.
Dpto. Fisiología, Facultad de Medicina y Enfermería, Universidad del País Vasco UPV/EHU.
Conclusiones:
1. En la sepsis los sustratos metabólicos principales para la formación de TGs hepá:cos son los productos de la lipolisis del tejido adiposo AGL y glicerol.
2. En la sepsis, el aporte de sustrato por medio de intermediarios de la glicólisis (DHAP) está disminuida.
3. En la sepsis se produce un aumento de la síntesis de TGs hepá:cos dando lugar a una esteatosis hepá:ca.
Bibliografía:
[1]. P. Aspichueta, X. S. Pérez, B. Ochoa, O. Fresnedo. Endotoxin promotes preferential periportal upregulation of VLDL secretion in the rat liver. JLR, February 16, 2005.
[2]. L. Arisqueta, M. Nuñez-Garcia, J. Ogando, I. Garcia-Arcos 1, B. Ochoa, P. Aspichueta, O. Fresnedo, Y. Rueda. Involvement of lipid droplets in hepatic responses to lipopolysaccharide treatment in mice. Biochimica et Biophysica Acta 1831 (2013) 1357–1367.
[3] Ayala Torres A.; Hernández Zarazúa I. L. Implementación de la técnica de folch para la extracción de grasas en frío. Universidad Autónoma de Querétaro.
[4] A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem. 1976 May 7;72:248-54.
Resultados:
Figura 1: El aumento de la entrada en el hígado de los productos de la
lipolisis (AGL y glicerol) favorece la síntesis de TGs y su acumulación
en el hígado de animales sépticos.
-En la sepsis los AGL aumentan un 85% y el Glicerol sérico un 100%.
-En la sepsis, la expresión del transportador CD36 y las enzimas GK y PAPs
también aumentan.
-Esto corrobora el incremento de la lipólisis del tejido adiposo y la utilización de sus
sustratos AGL y glicerol para la síntesis de TGs hepático (Figura 1).
Figura 2: El metabolito intermedio de la gluconeogénesis hepática
(DHAP) no está implicado en la lipogénesis séptica.
-En la sepsis se observa una disminución de la expresión de la G-3P-DH
corroborando la no utilización de la DHAP como sustrato para la síntesis de TGs en
sepsis ya que esta se reserva para la síntesis de glucosa (Figura 2).
-En la sepsis se produce un aumento de TGs hepático corroborando la esteatosis
de sepsis.
Material y Métodos:
Se utilizó como modelo experimental ratas control Fa/? (ayuno 24 horas, n=3) y ratas caso Fa/LPS (sepsis LPS, n=3) de los cuales se analizaron los siguientes parámetros:
• Los AGL y glicerol séricos se cuantificaron por medio de kits comerciales específicos.
• Se homogeneizó el tejido hepático y se determinó la concentración total de proteínas hepáticas mediante el método de Bradford [4].
• Los TGs hepáticos se cuantificaron en primer lugar realizando una extracción de lípidos del homogenado hepático mediante el método de Folch [3] para posteriormente separar
las distintas especies lipídicas por TLC. Por último, la masa de las distintas especies lipídicas se cuantificó usando el software imageJ.
• La expresión génica de las proteínas de interés: CD36, Glicerol-quinasa (GK), PAPs y Glicerol 3-fosfato deshidrogenasa (G-3P-DH) se cuantificaron extrayendo previamente
los RNA mediante el método del TRIzol para posteriormente sintetizar los cDNA correspondientes mediante el kit SuperScript III First-Strand Synthesis System for RT-PCR.
• Finalmente los cDNA se cuantificaron por RT-qPCR. Los resultados se analizaron por medio del análisis estadístico de la t de student de dos colas para datos desapareados.
Los resultados se muestran como la media +/- la desviación estándar y la diferencia estadística significativa al comparar el modelo de sepsis con el control. Se muestran como:
* cuando p < 0,05 y *** cuando p< 0,01.
Objetivos:
El objetivo del estudio es analizar el papel de los intermediarios del metabolismo de lípidos (AGL y Glicerol) y de carbohidratos (DHAP) como aporte de sustratos
para la síntesis de triglicéridos en el hígado.
En ambas rutas observamos la existencia de un metabolito intermedio común, la dihidroxiacetona fosfato (DHAP). En este
contexto, ¿cuáles son los sustratos para la síntesis de TGs hepáticos en la sepsis?
Introducción:
La sepsis es un proceso inflamatorio sistémico en respuesta al lipopolisacárico (LPS) bacteriano que desencadena en el organismo un estado catabólico en respuesta a los
efectos anorexigénicos generados por la infección y a la gran demanda de energía exigida por el sistema inmune [1]. Estos efectos se manifiestan en dos rutas metabólicas:
1. Por un lado, se produce un gran aumento de la lipolisis del tejido adiposo cuyos
productos, ácidos grasos libres (AGL) y glicerol, son vertidos al torrente sanguíneo
para posteriormente acceder al hígado mediante los transportadores CD36 y AQ-7,
respectivamente. A partir de estos precursores se obtendrán triglicéridos (TGs)
hepáticos que saldrán al torrente en forma de VLDL para hacer frente a la gran
demanda energética del sistema inmune (Fig.1) [2].
2. Por otro lado, en la sepsis se produce un aumento de las concentraciones séricas
de alanina y lactato como resultado de la activación de la proteólisis muscular y de
vías catabólicas generadoras de lactato. Estos metabolitos, alanina y lactato, serán
utilizados por el hígado como sustratos de la gluconeogénesis hepática para
sintetizar glucosa y poder hacer frente al estado ayuno similar y a la demanda de
energía requerida por el sistema inmune (Fig. 2).
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
AGL Glicerol
nM
Fa/?
Fa/LPS
***
***
0
50
100
150
200
250
300
350
400
CD36 GK PAPs
uA (unidades Arbitrarias)
Fa/?
Fa/LPS
0
20
40
60
80
100
120
TGs HepáEco
mol TGs hepá:co/mg proteína
Fa/?
Fa/LPS
0
20
40
60
80
100
120
140
160
G-3P-DH
uA (unidades arbitrarias)
Fa/?
Fa/LPS
*
*
*