Guia de trabajo 2

1. Praparacion de Muestras:
Ana Cecilia Hernandez Reyes.
Primer año de Odontologia.
Histologia.
Carnet: 201708431

2. se ocupa de los métodos utilizados para elaborar
preparaciones permanentes de células y de tejidos
con la fi nalidad de analizarlos utilizando diversos
tipos de microscopios.

3. Obtención de la muestra.
• Si proviene de un individuo vivo recibe el nombre de biopsia; la manera de
tomarla puede ser excisional, incisional, por sacabocado, por aspiración,
punción, raspado, etc. Cuando la toma de las muestras es de un cadáver,
entonces se trata de una necropsia.

4. Fijación.
• Puede efectuarse mediante métodos químicos o físicos. Los físicos son
principalmente la criofi jación a –70 ºC; para que sea efi caz debe ser
instantánea a fi n de que evite la formación de cristales de hielo; actualmente
se usa también el calentamiento en horno de microondas entre 45 y 50 ºC,
aunque sólo en biopsias urgentes para un diagnóstico rápido y no defi nitivo.
Sin embargo, aquí se alude solamente a la fi jación química. Esta parte del
proceso evitará las modifi caciones que ocurren después de obtener el tejido
e impedirá lo que se conoce como cambios post mortem.

5. Se hace con el fin de eliminar el exceso de formol.
Deshidratación.
Se realiza por lo general con alcoholes en concentraciones crecientes.
Inclusión en parafina.
Es posible cortar el tejido fi jado, pero dicho corte no es lo delgado que sí se puede hacer una
vez impregnado con un medio. Este medio puede ser la parafi na, que es una mezcla de
hidrocarburos sólidos que proporcionan una consistencia fi rme para hacer cortes sin que se
distorsione la imagen del tejido y, por último, permitir el paso de la luz para ser observado en el
microscopio óptico.
Lavado:

6. Corte.
Por lo general se hacen de 3 a 5 micras, con micrótomos ya sean de rotación o de deslizamiento.
Tinción.
Se utiliza para examinar al microscopio óptico, con detalle, los tejidos.
Montaje.
Se utiliza para conservar las preparaciones de manera permanente, y en esta etapa se cubre el
corte del tejido ya procesado, y adherido a un portaobjetos, con un cubreobjetos.
Etiquetado.
En este paso se realiza la preparación de tal manera que se identifi que con precisión de qué
material se trata.
Cor

7. Hematoxilina y eosina
• La combinación de estos dos colorantes tiñe los núcleos de azul, los
citoplasmas en rosa, el músculo en tonos rojizos a rosados fucsia, los glóbulos
rojos en naranja o rojo y la fi brina en rosa intenso: la hematoxilina tiñe los
núcleos de azul oscuro y es el colorante natural más utilizado, el cual se extrae
del palo de Campeche

8. Métodos tricrómicos
• Se emplean tres colorantes para teñir distintos componentes en diversos colores.
Muchos métodos tricrómicos pueden utilizarse para poner de manifiesto la
arquitectura general, resaltar las fibras de sostén o diferenciar el tejido conjuntivo de
las fibras musculares, el colágeno y las fibras reticulares se tiñen en medios muy
ácidos con colorantes ácidos. Entre ellas, la técnica más común es :
• El tricrómico de Masson que requiere fijación o posfijación en Bouin, y permite ver: a)
Núcleos en negro. b) Músculo, citoplasma y queratina en rojo. c) Colágena en azul o
verde dependiendo del contraste que se use.

9. • . El tricrómico de Gallego le sigue en importancia y permite observar: a)
Núcleos en azul. b) Fibras elásticas en magenta. c) Eritrocitos en verde limón.
d) Otras estructuras en verde. Tricrómico de Gomori se usa tanto para tejidos
como para extendidos celulares y se visualizan: a) Fibras musculares en rojo.
b) Colágeno en verde. c) Núcleos de azul a negro. d) Fibras elásticas, células β
de los islotes pancreáticos y los gránulos de la hipófisis, en tonos que van
desde el violeta hasta el morado.

10. • Para fibras elásticas se utiliza la tinción de Verhoeff que permite ver: a) Fibras
elásticas negras. b) Núcleos en negro. c) Colágeno en rojo. d) Otras
estructuras en amarillo.
• Una modifi cación a la tinción de Mallory permite utilizarla para tejido
nervioso y permite observar: a) Núcleos, mielina y eritrocitos en rojo brillante.
b) Tejido conjuntivo, astrocitos, moco, amiloide, matriz ósea, cartilaginosa y
otras sustancias hialinas en diferentes tonos de azul. c) Fibras elásticas en
rosa.

11. Métodos argénticos
• En condiciones apropiadas, determinados componentes biológicos reducen el nitrato
de plata, que se precipita en forma de depósitos negros de plata metálica en el lugar
donde se produce la reducción química, la cual requiere de la ayuda de agentes
reductores. Si se modifi can las condiciones de la solución de nitrato de plata que se
utilice, es factible emplearla para manifestar una amplia variedad de estructuras
como membranas basales, fi bras reticulares y melanina.
• a) Axones en negro. b) Neurofi brillas en negro.

12. • Otras técnicas para tejido nervioso No requieren el uso de sales de plata y
facilitan la diferenciación de sus estructuras. A continuación se listan algunas.
• El método de Luxol Fast Blue es un colorante soluble en alcohol en el cual la
base de la lipoproteína reemplaza la base del colorante y permite que el tejido
se tiña. Es factible contrastarlo con reactivo de Schiff y es ampliamente
utilizado para tejido nervioso

13. • Métodos para carbohidratos Ácido peryódico de Schiff (PAS) Algunos de los
múltiples usos de la reacción incluyen:
• 1. Demostración de fi bras reticulares y membranas basales. 2. Demostración
de hongos. 3. Demostración de ciertos tipos de mucosustancias secretadas
por el epitelio de varios órganos del tracto digestivo, respiratorio y genital
femenino (cérvix).

14. • Técnicas que utilizan azul alciano
• El azul alciano es un colorante básico polivalente soluble en agua y tiñe en
azul por la presencia de moléculas de cobre. En soluciones acuosas reacciona
con compuestos que contienen grupos aniónicos, tales como mucosustancias
ácidas, mucinas ácidas y ácido desoxirribonucleico (DNA); se utiliza con
diferente pH.

15. • Métodos metacromáticos
• Ciertos colorantes reaccionan con diferentes componentes del tejido,
tiñéndolos en diferente color al del colorante que originalmente había sido
utilizado. Algunos ejemplos de este fenómeno ocurren con: azul de metileno,
azul de toluidina, azure A, B, C, tionina, café de Bismarck, safranina, cristal
violeta y violeta de metilo. En este grupo se encuentran el amiloide, los
glucosaminoglucanos, los gránulos de las células cebadas, los
mucopolisacáridos sulfatados, así como los ácidos nucleicos.

16. • Métodos para demostrar pigmentos
• Los pigmentos son componentes identifi cables en las células normales,
aunque también en condiciones patológicas. Se clasifi can en dos grupos: a)
Como artefactos, al fi jar el tejido; los más comunes son los que ocasionan
precipitados: debido al formaldehído, al mercurio presente en fi jadores como
Zenker y Helly, y depósitos por cromo presente en fi jadores como Orth,
Müller y Kolmer, por mencionar algunos.

17. • b) Los que están presentes dentro de las células llamados pigmentos
endógenos; entre ellos los más comunes son: hemoglobina (que es una
proteína básica ligada al hierro de color rojizo), melanina (la cual consta de
grupos que forman de manera natural polímeros complejos de color café-
negros) y lipofuscina (cuya composición química es variable y compleja de
color amarillo-café resultantes de la oxidación y polimerización de lípidos
insaturados).

18. • Métodos para detectar ácidos nucleicos
• Cuando el tejido se trata con ácido clorhídrico (fi gura 2-22), el ácido
ribonucleico (RNA) se degrada, pero el DNA mantiene mejor su estructura,
por lo que es la técnica de preferencia para identifi car las fases en el ciclo
celular, haciendo evidentes la posición de los cromosomas en el citoplasma
durante la mitosis. Los cromosomas se observan de color magenta.
•

19. • Métodos para demostrar microorganismos
• Los microorganismos de importancia médica son subdivididos en los
siguientes grupos: a) Bacterias; organismos unicelulares cuya talla varía entre
0.2 y 5 micrómetros. b) Hongos; de los cuales existe una gran variedad y se
clasifi can por su forma. c) Virus; organismos diminutos, la mayoría son visibles
sólo mediante el microscopio electrónico. d) Protozoarios, mismos que
parecen poseer estructuras muy simples pero tienen funcionalidad muy
compleja.