M.V. EDUARD MARTINEZ
 TODOS LOS SERES
VIVOS ESTÁN
CONSTITUÍDOS POR
CÉLULAS
Niveles de organización
CÉLULAS
ÓRGANOS
TEJIDOS
Anatomía Macroscópica vs.
Anatomía Microscópica
 Anatomía Macroscópica: Estudio del animal mediante
inspección, palpación y disección
 Anatomía Microscópica (Histología...
TÉCNICAS HISTOLÓGICAS
 Se denominan así al conjunto de procedimientos
aplicados a un tejido (animal o vegetal) con la
fin...
MÉTODOS DE ESTUDIO CELULAR
 Métodos in vivo: se
estudia la célula en su
estado natural
 Métodos in vitro: se
estudia la ...
CULTIVO CELULAR
 CONDICIONES Y
REQUERIMIENTOS
 Asepsia rigurosa
 pH del medio de cultivo
igual al de los líquidos
corpo...
 Métodos para tejidos
muertos:
 Se realizan con la finalidad
de preparar células, tejidos
y órganos procedentes de
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PREPARACIÓN DE TEJIDOS
MUERTOS
 Técnica de la parafina
 Técnica de la celoidina
 Técnica de congelación
TÉCNICA DE LA PARAFINA: PASOS
 Obtención de la muestra
 Fijación
 Deshidratación
 Aclaración
 Inclusión en parafina
...
Técnica de la parafina
 PASO 1: OBTENCIÓN DE LA MUESTRA
BIOPSIA NECROPSIA
 Características que debe tener la muestra:
 1. Debe ser lo suficientemente pequeña
 2. Debe ser representativa del tej...
Técnica de la parafina
 PASO 2: FIJACIÓN
 Se debe matar a las células, evitar
la autólisis postmortem y la
invasión de m...
Clasificación de los fijadores
FÍSICOS
QUÍMICOS
DESECACIÓN
CALOR SECO
CALOR
HÚMEDO
CONGELACIÓN
FIJADORES SIMPLES
FIJADORES...
Ejemplos de fijadores químicos
 Fijadores simples: formol 10%, alcohol etílico absoluto
o al 96%, alcohol metílico, ácido...
 CARACTERÍSTICAS DE UN BUEN AGENTE FIJADOR
 Que actúe con rapidez, matando y fijando a las células
antes de que aparezca...
Técnica de la parafina
 PASO 3: DESHIDRATACIÓN
 Se necesita extraer toda el
agua de los tejidos para dar
paso a la paraf...
Técnica de la parafina
 PASO 4: ACLARACIÓN (o
diafanización)
 Uso de agentes solubles en
alcohol y solventes de
parafina...
Técnica de la parafina
 PASOS 5-6: INCLUSIÓN Y FORMACIÓN DE
LOS BLOQUES DE PARAFINA
Técnica de la parafina
 PASO 7: MICROTOMÍA (obtención de
cortes histológicos)
Técnica de la parafina
 PASO 8: EXTENSIÓN Y ADHESIÓN DE LOS
CORTES HISTOLÓGICOS
Técnica de la parafina
 PASO 9: SECADO Y ELIMINACIÓN DEL EXCESO DE
PARAFINA
COLORACIÓN
 La coloración o tinción es el proceso en el cual se aplica
a las células o tejidos una sustancia colorante
 ...
Bases físicas-químicas de la
coloración
 Teoría física: la coloración ocurre por
fenómenos de absorción.
 Teoría química...
Clasificación de los colorantes
 Por su origen:
 Naturales Animal/Vegetal
 Artificiales: Derivados de la anilina, que a...
 Por el radical con color:
 Colorante básico
 Colorante ácido
 Colorante neutro
 Por los componentes celulares
que co...
TIPOS DE COLORACIONES
 De rutina: Coloración hematoxilina-eosina (H-E)
 Ortocromáticas: los tejidos adquieren el color d...
 Regresivas: los tejidos se sobrecolorean para
someterlos después a la acción de una sustancia
denominada diferenciador, ...
 Coloración vital: se utilizan colorantes inocuos para el
estudio de células y tejidos vivos. Existen 2 tipos de
esta col...
COLORACIÓN CON HEMATOXILINA-
EOSINA
 Es la coloración más utilizada en histología
 Consiste en la aplicación de dos colo...
COLORACIÓN CON HEMATOXILINA-
EOSINA
 PASO 1: HIDRATACIÓN DEL TEJIDO (5 min)
 PASO 2: COLORACIÓN CON HEMATOXILINA (15 ´)
 PASO 3: LAVADO CON AGUA (15´´)
 PASO 4: DIFERENCIAR CON ALCOHOL ÁCIDO
 PASO 5: VIRAR AL COLOR AZUL
 PASO 6: LAVAR CON...
 PASO 9: ACLARACIÓN
(DIAFANIZACIÓN)
 PASO 10: MONTAJE
DEFINITIVO EN LÁMINAS
(permount) PARA
OBSERVACIÓN AL
MICROSCOPIO
F...
IMAGEN NORMAL
ARTEFACTOS
Coloraciones especiales
 Técnica de Van Gieson (Fibras colágenas)
 Impregnación Argéntica (Fibras reticulares)
 Tricróm...
EL MICROSCOPIO COMO
HERRAMIENTA DE ESTUDIO
 El microscopio es un instrumento que permite
observar objetos que son demasia...
 Tipos de microscopios
 Microscopios ópticos
(propios y especiales)
 Microscopios electrónicos
(transmisión- barrido)
Objetivos
Oculares
Condensador
Componentes
Ópticos
Pinza
Carro
Platina
Componentes
Mecánicos
Tornillo
Macrométrico
Tornillo
Micrométrico
Lámpara
Revolver
Componentes
Ópticos
Componentes
Mecánicos
•Condensador
•Objetivos
•Oculares
•Platina
•Pinza
•Tornillo
micrométrico
•Tornil...
 MICROSCOPIO
ELECTRÓNICO DE
TRANSMISIÓN
 MICROSCOPIO
ELECTRÓNICO DE BARRIDO
REFERENCIAS
GENNESER, FINN. HISTOLOGIA.
CAPÍTULO 2.
http://webs.uvigo.es/mmegias/
6-tecnicas/1-introduccion.php
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  1. 1. M.V. EDUARD MARTINEZ
  2. 2.  TODOS LOS SERES VIVOS ESTÁN CONSTITUÍDOS POR CÉLULAS
  3. 3. Niveles de organización CÉLULAS ÓRGANOS TEJIDOS
  4. 4. Anatomía Macroscópica vs. Anatomía Microscópica
  5. 5.  Anatomía Macroscópica: Estudio del animal mediante inspección, palpación y disección  Anatomía Microscópica (Histología): Estudio de células y tejidos del animal mediante el uso del microscopio  Estudio = Preparación de tejidos y células (vivas- muertas)
  6. 6. TÉCNICAS HISTOLÓGICAS  Se denominan así al conjunto de procedimientos aplicados a un tejido (animal o vegetal) con la finalidad de estudiar sus componentes morfológicos a través de los microscopios fotónicos y electrónicos
  7. 7. MÉTODOS DE ESTUDIO CELULAR  Métodos in vivo: se estudia la célula en su estado natural  Métodos in vitro: se estudia la célula viva pero bajo ambiente artificial. El método más utilizado es el cultivo celular
  8. 8. CULTIVO CELULAR  CONDICIONES Y REQUERIMIENTOS  Asepsia rigurosa  pH del medio de cultivo igual al de los líquidos corporales  Temperatura  Control O2- CO2
  9. 9.  Métodos para tejidos muertos:  Se realizan con la finalidad de preparar células, tejidos y órganos procedentes de individuos en los que se han detenido los procesos vitales MÉTODOS DE ESTUDIO CELULAR
  10. 10. PREPARACIÓN DE TEJIDOS MUERTOS  Técnica de la parafina  Técnica de la celoidina  Técnica de congelación
  11. 11. TÉCNICA DE LA PARAFINA: PASOS  Obtención de la muestra  Fijación  Deshidratación  Aclaración  Inclusión en parafina  Formación del bloque de parafina  Microtomía  Extendido  Secado
  12. 12. Técnica de la parafina  PASO 1: OBTENCIÓN DE LA MUESTRA BIOPSIA NECROPSIA
  13. 13.  Características que debe tener la muestra:  1. Debe ser lo suficientemente pequeña  2. Debe ser representativa del tejido u órgano a estudiar
  14. 14. Técnica de la parafina  PASO 2: FIJACIÓN  Se debe matar a las células, evitar la autólisis postmortem y la invasión de microorganismos  Fijador: agente físico o químico utilizado para el proceso de fijación
  15. 15. Clasificación de los fijadores FÍSICOS QUÍMICOS DESECACIÓN CALOR SECO CALOR HÚMEDO CONGELACIÓN FIJADORES SIMPLES FIJADORES COMPUESTOS
  16. 16. Ejemplos de fijadores químicos  Fijadores simples: formol 10%, alcohol etílico absoluto o al 96%, alcohol metílico, ácido ósmico 1-2%, dicromato de potasio 3-5%  Fijadores compuestos:  Solución de Bouin (ácido pícrico, formol, ácido acético)  Solución de Zenker (dicromato de poasio, cloruro de mercurio y acido acético)  Solución de Helly (dicromato de potasio, cloruro de mercurio y formol)
  17. 17.  CARACTERÍSTICAS DE UN BUEN AGENTE FIJADOR  Que actúe con rapidez, matando y fijando a las células antes de que aparezcan los cambios degenerativos  Alto poder de penetración  Conservar, en lo posible, las características del tejido  Que permita manipular los tejidos fijados  Accesible-económico
  18. 18. Técnica de la parafina  PASO 3: DESHIDRATACIÓN  Se necesita extraer toda el agua de los tejidos para dar paso a la parafina  Alcohol etílico-isopropílico en concentraciones crecientes (60%-100%)
  19. 19. Técnica de la parafina  PASO 4: ACLARACIÓN (o diafanización)  Uso de agentes solubles en alcohol y solventes de parafina  Más usados: xileno, tolueno, benceno y cloroformo
  20. 20. Técnica de la parafina  PASOS 5-6: INCLUSIÓN Y FORMACIÓN DE LOS BLOQUES DE PARAFINA
  21. 21. Técnica de la parafina  PASO 7: MICROTOMÍA (obtención de cortes histológicos)
  22. 22. Técnica de la parafina  PASO 8: EXTENSIÓN Y ADHESIÓN DE LOS CORTES HISTOLÓGICOS
  23. 23. Técnica de la parafina  PASO 9: SECADO Y ELIMINACIÓN DEL EXCESO DE PARAFINA
  24. 24. COLORACIÓN  La coloración o tinción es el proceso en el cual se aplica a las células o tejidos una sustancia colorante  Colorante: sustancia con color propio capaz de cederlo a otros cuerpos
  25. 25. Bases físicas-químicas de la coloración  Teoría física: la coloración ocurre por fenómenos de absorción.  Teoría química: la coloración ocurre por la interacción iónica de los cationes y aniones de los colorantes con los aniones y cationes de las proteínas celulares.
  26. 26. Clasificación de los colorantes  Por su origen:  Naturales Animal/Vegetal  Artificiales: Derivados de la anilina, que a su vez es un derivado de la destilación de la hulla. El colorante artificial más usado es la eosina Carmín Hematoxilina Orceína
  27. 27.  Por el radical con color:  Colorante básico  Colorante ácido  Colorante neutro  Por los componentes celulares que colorea  Colorantes nucleares  Colorantes citoplasmáticos
  28. 28. TIPOS DE COLORACIONES  De rutina: Coloración hematoxilina-eosina (H-E)  Ortocromáticas: los tejidos adquieren el color del colorante empleado  Metacromáticas: los tejidos o componentes de los tejidos adquieren un color distinto al del colorante  Progresivas: el colorante es aplicado en concentraciones crecientes
  29. 29.  Regresivas: los tejidos se sobrecolorean para someterlos después a la acción de una sustancia denominada diferenciador, con la finalidad de extraer el exceso de colorante  Impregnación: Involucra la deposición de sustancias metálicas (cobre, plata, oro) en la superficie de las células y tejidos, por lo que no se considera una verdadera coloración.
  30. 30.  Coloración vital: se utilizan colorantes inocuos para el estudio de células y tejidos vivos. Existen 2 tipos de esta coloración: intravital y supravital.  Coloraciones específicas: para los componentes celulares o tisulares.
  31. 31. COLORACIÓN CON HEMATOXILINA- EOSINA  Es la coloración más utilizada en histología  Consiste en la aplicación de dos colorantes, uno que es la hematoxilina, que se encarga de teñir el núcleo celular y la eosina, que tiñe el citoplasma y los componentes citoplasmáticos, según la afinidad de cada componente celular
  32. 32. COLORACIÓN CON HEMATOXILINA- EOSINA  PASO 1: HIDRATACIÓN DEL TEJIDO (5 min)  PASO 2: COLORACIÓN CON HEMATOXILINA (15 ´)
  33. 33.  PASO 3: LAVADO CON AGUA (15´´)  PASO 4: DIFERENCIAR CON ALCOHOL ÁCIDO  PASO 5: VIRAR AL COLOR AZUL  PASO 6: LAVAR CON AGUA  PASO 7: COLOREAR CON EOSINA  PASO 8: DESHIDRATACIÓN
  34. 34.  PASO 9: ACLARACIÓN (DIAFANIZACIÓN)  PASO 10: MONTAJE DEFINITIVO EN LÁMINAS (permount) PARA OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO FIG. N° 7
  35. 35. IMAGEN NORMAL ARTEFACTOS
  36. 36. Coloraciones especiales  Técnica de Van Gieson (Fibras colágenas)  Impregnación Argéntica (Fibras reticulares)  Tricrómica de Masson (Colágeno)  Sudán (Adipocitos)  PAS (Ácido peryódico de Schiff)
  37. 37. EL MICROSCOPIO COMO HERRAMIENTA DE ESTUDIO  El microscopio es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeños para el ojo humano
  38. 38.  Tipos de microscopios  Microscopios ópticos (propios y especiales)  Microscopios electrónicos (transmisión- barrido)
  39. 39. Objetivos Oculares Condensador Componentes Ópticos
  40. 40. Pinza Carro Platina Componentes Mecánicos Tornillo Macrométrico Tornillo Micrométrico Lámpara Revolver
  41. 41. Componentes Ópticos Componentes Mecánicos •Condensador •Objetivos •Oculares •Platina •Pinza •Tornillo micrométrico •Tornillo macrométrico •Carro •Lámpara •Revolver
  42. 42.  MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE TRANSMISIÓN  MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO
  43. 43. REFERENCIAS GENNESER, FINN. HISTOLOGIA. CAPÍTULO 2. http://webs.uvigo.es/mmegias/ 6-tecnicas/1-introduccion.php http://www.anatomohistologia. uns.edu.ar/plantilla.asp?zona= modtecni

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