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COMPARACIÓN DE LA FLORA ORAL EN ESTUDIANTES DE
INGENIERÍA ELECTRÓNICA Y MEDICINA DE VI A X SEMESTRE DE
LA UNIVERSIDAD EL BOSQUE.
*Bahamon, Valeria. *Calderón, Valentina. *Moros, Gabriela. *Onofre, Alejandra. *Pérez, Daniel.
*Pérez, Zairy. *Pineda, Daniela. *Rivero, Andreina. *Roa, Duvan. *Rodríguez, Liseth. *Torres,
Gina. *Torres, Natalia. ♣Castillo, Yormaris.
* Estudiantes tercer semestre Facultad de Odontología de la Universidad el Bosque.
♣Docente de la Universidad el Bosque, facultad de odontología, área de microbiología.
RESUMEN
Introducción: La cavidad oral es un hábitat microbiano muy diverso y alberga todo un ecosistema que tiene importancia
en la homeostasis de los tejidos orales. Tiene características únicas en términos de pH, nutrientes, oxígeno y temperatura,
las cuales favorecen, el establecimiento de una flora comensal simbiótica muy estable entre los individuos.
Objetivo: Comparar la flora oral en estudiantes de ingeniería electrónica y medicina de VI a X semestre de la Universidad
El Bosque.
Métodos y materiales: Se realizaron cultivos de saliva de estudiantes de la facultad de Ingeniería Electrónica, y de la
facultad de Medicina de la Universidad El Bosque en agar Sangre, Wilkins Chalgrens, Saboraud y Mac Conkey. Se
identificaron los microorganismos que crecieron en los medios de cultivo y los resultados fueron expresados en porcentaje
de cada uno de los microorganismos encontrados.
Resultados: Los Streptococcus del grupo viridans son la flora aislada con mayor frecuencia en las dos facultades evaluadas
(100%); seguido por bacterias anaerobias como Actinomyces spp y Capnocytophaga spp (100%), en menor proporción se
aislaron sobreinfectantes como Candida albicans y especies de Enterobacter.
Conclusiones: Los microorganismos encontrados en la flora oral de los estudiantes de evaluados son flora normal y
transeúnte en cavidad oral, y no se observaron diferencias pronunciadas de microorganismos particulares entre las dos
facultades.
PALABRAS CLAVE: Microbioma oral, Saliva, Cavidad oral, Microorganismos.
ABSTRACT
Introduction: The oral cavity is a microbial habitat that favors the accumulation and growth of microorganisms. We
should note that it is not a homogeneous medium due to environmental factors or conditions that are adhesion ligands, pH,
nutrients, oxygen and temperature.
Objective:This research was conducted with the purpose of comparing scientific literature through oral flora students VI
to X semester faculty of electrical engineering and medicine at the Bosque University.
Methods and materials: An evaluation of the oral flora students of the Faculty of Electronic Engineeringwas performed,
and the faculty of medicine at the El Bosque University taking into account several criteria for inclusion and exclusion
were evaluated 5 patients each faculty the which they tooka saliva sample for culture in different agars andcomplementary
tests.
Results: As for Gram-positive cocci, Streptococcus from viridans group with a prevalence of 100% in both faculties,
anaerobic bacteria Actinomyces prevalence and Capnocytophaga, on infectants microorganisms of the genus Candida and
Enterobacter prevalence.
Conclusions: They were able to confirm the microorganisms belonging to the normal oral flora of humans due to the
observation and comparison of such flora, both students of the Faculty of Medicine and the Faculty of Electronic
Engineering.
KEYWORDS: Oral microbiome, Saliva, Oral health, Microorganisms.
Correspondencia:
Daniel Orlando Pérez Rodríguez
doperez@unbosque.edu.co
Teléfono: 3114707729
Yormaris Castillo Romero
castilloyormaris@unbosque.edu.co
tillo
castilloyormaris@unbosque.edu.co
2
INTRODUCCIÓN
La cavidad oral es un tipo de hábitat donde
viven un conjunto de microorganismos
(comunidad microbiana). Está formada por
un ambiente y propiedades que define la
actividad de los microorganismos que se
encuentran en ella (1). Aquí se encuentra
una gran variedad de bacterias, por lo cual
se considera que la cavidad oral del ser
humano es el nicho ecológico con mayor
biodiversidad conocido hasta ahora después
del intestino (2). En esta cohabitan
principalmente microorganismos
comensales, de los cuales se han descrito
más de 700 especies, que colonizan
diferentes sub-hábitats dentro de la cavidad
oral como las superficies mucosas y los
dientes(3); entre los microorganismos
principalmente aislados en cavidad oral se
encuentran: Streptococcus spp., Gemella
spp, Subacterium spp, Selenomonas spp,
Veillonella spp., Actinomyces, Atopobium,
Rothia, Neisseria, Eikenella,
Campylobacter, Porphyromonas,
Prevotella, Capnocytophaga,
Fusobacterium y Leptotrichia (1,5).
La presencia de una microflora residente no
es esencial para la vida, pero es un
componente importante si el huésped desea
llevar a cabo una vida normal ya que
previene la enfermedad mediante la
reducción de la posibilidad de colonización
por especies exógenas (6).También, ayudan
a mantener condiciones de pH apropiadas en
cavidad oral, unas reduciéndolo y otras
incrementándolo para mantener un balance.
De esta forma, el rol de la flora oral normal
es mantener la homeóstasis en la cavidad oral
(4).
Dichas condiciones consideradas como
ecológicas, dentro de la boca se pueden ver
afectadas en algún momento de la vida por
diferentes factores como: erupción y pérdida
de los dientes, inserción de prótesis tales
como dentaduras postizas, y cualquier
tratamiento dental, incluyendo la
ampliación, pulido y restauraciones. Las
fluctuaciones transitorias en la estabilidad
del ecosistema oral pueden ser inducidas por
la frecuencia y el tipo de alimento ingerido,
los períodos de tratamiento con antibióticos,
y las variaciones en la composición y la tasa
de flujo de saliva. Así mismo el ambiente en
donde se desenvuelve el individuo hace que
adquiera un ecosistema oral característico de
su entorno y de la población con la que
interactúa.
Es por ello que el objetivo de este trabajo es
comparar la flora oral en estudiantes de
ingeniería electrónica y medicina de VI a X
semestre de la universidad el bosque.
MATERIALES Y MÉTODOS
Población y muestra
Se evaluó la flora oral en estudiantes de VI a
X semestre de la facultad de Ingeniería
Electrónica, y de la facultad de Medicina de
la Universidad El Bosque. La población fue
seleccionada mediante una encuesta en la
que se evaluó el estado de salud oral y
sistémica en general. Los individuos que
cumplían con los parámetros requeridos por
la encuesta fueron invitados a participar en el
estudio, mediante la firma de un
consentimiento informado.
Se excluyeron del estudio aquellos pacientes
que presentaron cualquier enfermedad oral o
sistémica, que estaban bajo terapia
antimicrobiana en los tres meses anteriores
y/o en tratamientos inmunosupresores,
personas que presentaron implantes
dentales, tratamiento ortodóntico, mujeres
embarazadas, en tratamiento anticonceptivo
o en estado de lactancia, y fumadores.
Para la toma de muestra de saliva se le indicó
al paciente una serie de recomendaciones,
que incluían dos horas previas a la toma de
la muestra, no consumir alimentos, no
realizar cepillado de dientes, ni usar
3
enjuagues bucales, entre otros. A cada
paciente se le solicitó escupir en un tubo
taparrosca estéril, sin pegar los labios a la
boca del tubo, hasta obtener mínimo 1 ml de
saliva.
La muestra se transportó hasta el laboratorio
de microbiología de la Universidad El
Bosque en un término no mayor a dos horas
después de la toma de la misma, para su
posterior procesamiento microbiológico.
Procesamiento microbiológico
Las muestras de saliva fueron sembradas por
agotamiento en diferentes agares y luego
incubadas a 37°c durante 24 a 48 horas para
bacterias aerobias, mientras que para
anaerobias el tiempo fue de 8 días.
Agar sangre.
Es utilizado en este estudio para la
recuperación de cocos Gram positivos de
interés oral. La identificación microbiana
incluyó examinación de las características
morfológicas de las colonias en los cultivos,
en dicho agar, se reconoció el tipo de
hemólisis existente, se realizó tinción de
Gram y posteriormente se realizaron pruebas
bioquímicas que permitieron diferenciar
especies y géneros de microbianos. Primero
se realizó prueba de catalasa para diferenciar
Staphlylococcus spp (catalasa positivos) de
Streptococcus spp (catalasa negativos). A
aquellas bacterias catalasa positiva, se les
realizó la prueba coagulasa, para diferenciar
Staphylococcus aureus del resto de especies
del mismo género. Para los microorganismos
catalasa negativa que tenían hemolisis alfa,
se realizó la prueba taxo P para diferenciar
Streptococcus del grupo viridans de
Streptococcus pneumoniae.
Aquellas colonias catalasa negativa que
presentaron hemolisis gamma se les realizó
resiembra y posteriormente identificación
bioquímica con BBL Crystal GP.
Agar Wilkin Chalgren.
Fue utilizado para el cultivo de
microorganismos anaerobios, para conferir
esta atmosfera anaeróbica, las muestras
fueron incubadas en cajas de anaerobiosis
con sobres generadores de anaerobiosis.
Después del tiempo de incubación, se realizó
evaluación de las características
morfológicas de las colonias al estereoscopio
y verificación de la presencia de bacterias
negro pigmentadas. Las bacterias negro
pigmentadas, fueron expuestas a luz
ultravioleta para diferenciar dos géneros
importantes en cavidad oral que son género
Prevotella spp el cual tiene la capacidad de
autofluorecer de color rojo oscuro en
presencia de luz ultravioleta (luz UV
positiva) del género de Prophyromonas spp
(luz UV negativo).
Aquellas bacterias positivas a la luz
ultravioleta se les realizó prueba de ONPG
con el fin de diferenciar Prevotella
melaninogenica (prueba de ONPG positiva)
de Prevotella intermedia/ nigrescens.
Las otras bacterias anaerobias que crecieron
en el agar Wilkin Chalgrens fueron
identificadas por las características
morfológicas de las colonias y cuando fue
necesario se realizó resiembra y
posteriormente identificación de especie
usando la galería bioquímica de Rapid Ana
II.
Una parte de la muestra de saliva fue
inoculada en caldo Tioglicolato e incubada
en condiciones anaeróbicas. El crecimiento
microbiano se evidenció por turbidez del
caldo después de 8 días de incubación.
Agar Mac Conkey.
Para la identificación de microorganismos
sobreinfectantes, de la familia
Enterobacteriaceae y Pseudomonadaceae se
empleó el Agar MacConkey. Después de 24
horas de incubación en condiciones
4
aeróbicas, el crecimiento bacteriano fue
evidenciado por la presencia de Unidades
Formadoras de Colonias (UFC), además en
los cultivos positivos se revisó la
fermentación o no de la lactosa. Las colonias
que crecieron fueron resembradas y el
género y la especie fueron identificadas
mediante la galería bioquímica BBL Crystal
GN/NF. Como pruebas complementarias a la
galería se realizó la prueba de indol y de
oxidasa.
Agar Saboraud.
Utilizado para la recuperación de hongos
levaduriformes del género Candida. Con las
colonias que crecieron en este agar primero
se realizó tinción de Gram para confirmar
morfología levaduriforme. Una vez
confirmada la morfología, las colonias
fueron resembradas para posteriormente
realizar prueba de prueba de tubo germinal,
con el fin de diferenciar Candida albicans de
otros tipos de Candida spp aislados de
cavidad oral.
La presencia de Candida albicans fue
confirmada por la formación de pseudohifas
en la prueba de tubo germinal.
Análisis de resultados:
Los resultados de cada uno de los cultivos de
los pacientes evaluados fueron tabulados en
una hoja de Microsoft Excel para versión
Windows y se diseñaron graficas de barras
para la descripción de frecuencias de los
microorganismos presentes en los pacientes
de evaluados.
RESULTADOS
En las figuras 1-3 se muestra la frecuencia de
microorganismos presentes en las muestras
de saliva de los pacientes evaluados. La
figura No1, describe los resultados obtenidos
del cultivo en agar sangre (cocos Gram
positivos); Figura No2. Resultados
obtenidos a partir del cultivo en Agar Wilkin
Chalgrens (Bacterias anaerobias); Figura
No3. Resultados obtenidos del cultivo en
agar Mac Conkey y agar Sabouraud.
Figura 1. Cocos Gram positivos
En la figura 1 se muestran los resultados de
Cocos Gram positivos. Se puede observarque los
Streptococcus del grupo viridans (SGV) en
ambas facultades tienen una frecuencia del
100%, esto debido a que SGV son habitantes
normales de la mucosa oral, respiratoria y
gastrointestinal de los mamíferos y del tracto
genital en la mujer, donde juegan un papel
importante en la prevención de la colonización
de patógenos potenciales (3), por lo tanto, no es
anormal ver en esta cantidad el microorganismo.
La frecuencia de Staphylococcus sppfue de 80%
y 60% para la facultad de Ingeniería Electrónica
y Medicina respectivamente. Streptococcus
mutans fue aislado en un 20% en la facultad de
Ingeniería y no se detectó en la facultad de
Medicina, se sugiere que hipotéticamente los
estudiantes de Medicina tienen un alto consumo
de azucaresensu dieta que implicaría el aumento
en la presencia de este microorganismo y por lo
tanto se tendría que profundizar el estudio,
mientras que Streptococcus bovis se encontró en
la misma proporción de un 20% en ambos grupos
estudiados. Streptococcus mucilaginosus y
0%
20%
40%
60%
80%
100%
Porcentaje% Microorganismos
Cocos Gram Positivos
Ingeniería Medicina
5
Streptococcusuberis fueron identificados solo en
la facultad de Ingeniería con presencia del 20%.
Figura 2. Microorganismos anaerobios.
En la figura 2 se muestran los resultados para
microorganismos anaerobios. Se detectó
presencia de ActinomycessppyCapnocytophaga
spp de un 100% en ambas facultades.
Fusobacterium spp fue identificado tanto en
Medicina como en Ingeniería en el 60% en los
dos grupos, Prevotella intermedia/nigrescens se
encontró en el 100% de los pacientes evaluados
en la facultad de medicina y en el 60% de los
estudiantes evaluados de la facultad de
Ingeniería. Prevotella melaninogenica,
Parvimonas micra y Wollinella spp fueron
identificados solamente en los pacientes de la
facultad de Ingeniería electrónica en un 60%,
20% y 20% respectivamente.
Figura 3. Microorganismos sobreinfectantes
En la figura 3 se pueden observar los
microorganismos sobreinfectantes
(enterobacterias y Candida) tanto en los
estudiantes de la facultad de Medicina como en
Ingeniería Electrónica; se identificó Candida
spp,Candida albicansy Enterobactercloacae en
el 20% de los estudiantes de la facultad de
medicina evaluados, mientras que en ingeniería
electrónica el género Candida no está presente y
el único microorganismo sobreinfectante
encontrado en el grupo de la facultad de
Ingeniería electrónica es Enterobacter
enterogenes en un 20%.
DISCUSIÓN
En este trabajo se evaluó la flora oral
presente en estudiantes de VI a X semestre
de dos facultades diferentes de la
Universidad El Bosque, una facultad
relacionada con ciencias de la salud y otra no
relacionada con dicho ámbito para observar
e identificar la relación que puede tener el
entorno en el que se desenvuelve un
individuo y la flora oral que predomina.
0%
20%
40%
60%
80%
100%
Porcentaje%
Microorganismos
Anaerobias
Ingeniería Medicina
0%
20%
40%
60%
80%
100%
Porcentaje%
Microorganismos
Sobreinfectantes
Ingeniería Medicina
6
Los resultados obtenidos en este proyecto
son consistentes con lo reportado por Aas et
al., 2005, en cuanto a que los Streptococcus
spp son el género más abundante y aislado
como flora normal en la cavidad oral; estos
microorganismos son muy importantes ya
que juegan un rol clave en la homeostasis de
la cavidad oral, además son los primeros
colonizadores e impiden por antagonismo
microbiano la llegada de microorganismos
patógenos.(1)
Se ha reportado que las familias microbianas
más abundantes en cavidad oral y que hacen
parte de la flora normal son Firmicutes, (tales
como especies de Streptococcus, Gemella ,
Eubacterium , Selenomonas , Veillonellas , y
los relacionados), Actinobacterias (tales
como especies de Actinomyces , Atopobium ,
Rothia y concordantes), Proteobacterias (por
ejemplo, especies de Neisseria,
Eikenella,Campylobacter, y concordantes),
Bacteroidetes (por ejemplo, especies de
Porphyromonas, Prevotella,
Capnocytophaga y los relacionados),
Fusobacterias (por ejemplo, especies de
Fusobacterium y Leptotrichia.)(1). Estos
datos son consistentes con los
microorganismos identificados en este
estudio, en el cual hubo predominio de
bacterias tales como Actinomyces spp,
Capnocytophaga spp, Prevotella spp y
Fusobacterium spp los cuales fueron
hallados tanto en la facultad de medicina
como en la de ingeniería (1).
De acuerdo a Alcaide et al., 2010 los
Streptococcus del grupo viridans son
habitantes normales de la mucosa oral,
respiratoria y gastrointestinal de los
mamíferos y del tracto genital de la mujer.
Juegan un papel importante en la prevención
de la colonización de patógenos potenciales.
Este grupo lo componen diversos
microorganismos como Streptococcus mitis,
Streptococcus sanguis y Streptococcus
mutans. Los Streptococcus del grupo
viridans fue el género microbiano
principalmente aislado (100%) en ambas
facultades, lo cual indica normalidad en
cuanto a la flora de los individuos
estudiados.
En el caso de este proyecto, Streptococcus
mutansfue hallado únicamente en la facultad
de medicina, con respecto a lo que
encontrado en la literatura, en el estudio
realizado por Linossier et al., 2011 los
resultados obtenidos indican, la dependencia
de la colonización bacteriana con la edad. La
presencia de este microorganismo también se
podría atribuir a un alto consumo de azucares
por parte de este paciente. Sin embargo, esta
variable en este estudio no fue evaluada por
lo cual no se podría afirmar dicha asociación
en este trabajo.
Con respecto a Staphylococcus spp, los
resultados encontrados en la investigación
nos indican que no hay diferencia marcada
para este microorganismo entre ambas
facultades. Pereira et al., año 2005, reporta
que la mayoría de estos microorganismos no
son patogénicos y residen principalmente en
la piel y membranas mucosas de humanos.
Sin embargo, cuando la superficie es
damnificada por alguna razón, esa bacteria
puede invadir los tejidos y causar infección.
En cavidad oral estos se consideran flora
transeúnte, frecuentemente aislada por la
proximidad entre la cavidad oral y/o
comisuras labiales de donde estos
microorganismos son flora normal. Así
mismo por condiciones exógenas como auto-
inoculación por hábitos como chuparse los
dedos, morderse la uñas, etc. Sin embargo su
detección no se asocia frecuentemente con
infección (4).
Con respecto a Actinomyces spp identificada
en el 100% en ambas facultades, se dice que
sigue siendo un microorganismo de flora oral
normal pero cuando hay un estado de
desequilibrio entre la biopelícula y el mineral
7
dental, este se comporta como patógeno
oportunista relacionado con la caries
radicular. En este estudio solo se pude
reportar su presencia pero no se puede
asociar con ninguna condición clínica en el
paciente puesto que dicha variable no se
analizó (15).
El género Enterobacter fue encontrado en
cavidad oral de los estudiantes de la facultad
de Medicina e Ingeniería, estas bacterias que
son transeúntes en boca, puesto a que su
medio natural, es en el tracto intestinal de los
seres humanos (16), según Oliveira et al.,
2015 “la insalubridad, el contacto con
personas enfermas y diversos agentes
biológicos son factores predisponentes
asociados a la colonización por diferentes
microorganismos, incluyendo bacterias
entéricas.
Dentro de los microorganismos
sobreinfectantes de la familia
Enterobacteriaceae, el género Enterobacter,
seguido del género Klebsiella son muy
frecuentemente detectados en la cavidad oral
de individuos sanos, donde se comportan
como flora transeúnte. Sin embargo, su
presencia en boca es indicador de hábitos de
higiene inadecuados y estos
microorganismos tienen gran relevancia
puesto se han reportado por presentar gran
cantidad de genes que confieren resistencia a
los antibióticos, situación que podría
complicar tratamientos a nivel oral.
La presencia de estos microorganismos en
cavidad oral de dichos estudiantes se
atribuye a distintos mecanismos exógenos
tales como la contaminación cruzada (mano-
ano-mano-boca), auto inoculación con
cepillo de dientes contaminados por hábitos
como dejar el cepillo de dientes en el baño,
consumo de alimentos contaminados, etc.
Estos factores propician condiciones
favorables para hallar dicho género y especie
de entero bacteria en cavidad oral.
Así mismo otro microorganismo que hace
parte de la flora normal en cavidad oral pero
que se considera sobreinfectante en la misma
es el género Candida y las especie más
comúnmente detectada es C. albicans.
Salazar et al., 2005, reportan que Candida
spp forma parte de la flora oral normal en el
ser humano sistémicamente sano. Así mismo
Candida albicans a pesar de ser un
microorganismo asociado a patogenicidad
por la presencia de factores de virulencia
como las pseudohifas y su capacidad
invasiva. Este hongo necesita de
características específicas en el hospedador
para generar una infección. Por lo tanto
nuestros resultados muestran que a pesar de
que Candida albicans está presente en 20%
de la población evaluada de la facultad de
medicina, este grupo podría considerarse
como portadores sanos, ya que el
microorganismo en bajas proporciones es
normal detectarlo en cavidad oral.
CONCLUSIONES
Los microorganismos encontrados en la flora
oral de los estudiantes de la facultad de
Ingeniería Electrónica y facultad de
Medicina hacen parte de la flora normal y
transeúnte en cavidad oral.
No se observaron diferencias pronunciadas
de microorganismos particulares
aumentados o disminuidos en una facultad
con respecto a la otra.
Los Streptococcus del grupo viridans, el
género Actinomyces spp y Capnocytophaga
spp podrían ser la flora más estable que se
mantiene en las dos poblaciones evaluadas.
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4 ): 399-405
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oral cavity of workers in a brazilian oncology
hospital. revista do instituto de medicina tropical
de São Paulo, 57(2), 121–127.

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Microbiología Oral.

  • 1. 2 COMPARACIÓN DE LA FLORA ORAL EN ESTUDIANTES DE INGENIERÍA ELECTRÓNICA Y MEDICINA DE VI A X SEMESTRE DE LA UNIVERSIDAD EL BOSQUE. *Bahamon, Valeria. *Calderón, Valentina. *Moros, Gabriela. *Onofre, Alejandra. *Pérez, Daniel. *Pérez, Zairy. *Pineda, Daniela. *Rivero, Andreina. *Roa, Duvan. *Rodríguez, Liseth. *Torres, Gina. *Torres, Natalia. ♣Castillo, Yormaris. * Estudiantes tercer semestre Facultad de Odontología de la Universidad el Bosque. ♣Docente de la Universidad el Bosque, facultad de odontología, área de microbiología. RESUMEN Introducción: La cavidad oral es un hábitat microbiano muy diverso y alberga todo un ecosistema que tiene importancia en la homeostasis de los tejidos orales. Tiene características únicas en términos de pH, nutrientes, oxígeno y temperatura, las cuales favorecen, el establecimiento de una flora comensal simbiótica muy estable entre los individuos. Objetivo: Comparar la flora oral en estudiantes de ingeniería electrónica y medicina de VI a X semestre de la Universidad El Bosque. Métodos y materiales: Se realizaron cultivos de saliva de estudiantes de la facultad de Ingeniería Electrónica, y de la facultad de Medicina de la Universidad El Bosque en agar Sangre, Wilkins Chalgrens, Saboraud y Mac Conkey. Se identificaron los microorganismos que crecieron en los medios de cultivo y los resultados fueron expresados en porcentaje de cada uno de los microorganismos encontrados. Resultados: Los Streptococcus del grupo viridans son la flora aislada con mayor frecuencia en las dos facultades evaluadas (100%); seguido por bacterias anaerobias como Actinomyces spp y Capnocytophaga spp (100%), en menor proporción se aislaron sobreinfectantes como Candida albicans y especies de Enterobacter. Conclusiones: Los microorganismos encontrados en la flora oral de los estudiantes de evaluados son flora normal y transeúnte en cavidad oral, y no se observaron diferencias pronunciadas de microorganismos particulares entre las dos facultades. PALABRAS CLAVE: Microbioma oral, Saliva, Cavidad oral, Microorganismos. ABSTRACT Introduction: The oral cavity is a microbial habitat that favors the accumulation and growth of microorganisms. We should note that it is not a homogeneous medium due to environmental factors or conditions that are adhesion ligands, pH, nutrients, oxygen and temperature. Objective:This research was conducted with the purpose of comparing scientific literature through oral flora students VI to X semester faculty of electrical engineering and medicine at the Bosque University. Methods and materials: An evaluation of the oral flora students of the Faculty of Electronic Engineeringwas performed, and the faculty of medicine at the El Bosque University taking into account several criteria for inclusion and exclusion were evaluated 5 patients each faculty the which they tooka saliva sample for culture in different agars andcomplementary tests. Results: As for Gram-positive cocci, Streptococcus from viridans group with a prevalence of 100% in both faculties, anaerobic bacteria Actinomyces prevalence and Capnocytophaga, on infectants microorganisms of the genus Candida and Enterobacter prevalence. Conclusions: They were able to confirm the microorganisms belonging to the normal oral flora of humans due to the observation and comparison of such flora, both students of the Faculty of Medicine and the Faculty of Electronic Engineering. KEYWORDS: Oral microbiome, Saliva, Oral health, Microorganisms. Correspondencia: Daniel Orlando Pérez Rodríguez doperez@unbosque.edu.co Teléfono: 3114707729 Yormaris Castillo Romero castilloyormaris@unbosque.edu.co tillo castilloyormaris@unbosque.edu.co
  • 2. 2 INTRODUCCIÓN La cavidad oral es un tipo de hábitat donde viven un conjunto de microorganismos (comunidad microbiana). Está formada por un ambiente y propiedades que define la actividad de los microorganismos que se encuentran en ella (1). Aquí se encuentra una gran variedad de bacterias, por lo cual se considera que la cavidad oral del ser humano es el nicho ecológico con mayor biodiversidad conocido hasta ahora después del intestino (2). En esta cohabitan principalmente microorganismos comensales, de los cuales se han descrito más de 700 especies, que colonizan diferentes sub-hábitats dentro de la cavidad oral como las superficies mucosas y los dientes(3); entre los microorganismos principalmente aislados en cavidad oral se encuentran: Streptococcus spp., Gemella spp, Subacterium spp, Selenomonas spp, Veillonella spp., Actinomyces, Atopobium, Rothia, Neisseria, Eikenella, Campylobacter, Porphyromonas, Prevotella, Capnocytophaga, Fusobacterium y Leptotrichia (1,5). La presencia de una microflora residente no es esencial para la vida, pero es un componente importante si el huésped desea llevar a cabo una vida normal ya que previene la enfermedad mediante la reducción de la posibilidad de colonización por especies exógenas (6).También, ayudan a mantener condiciones de pH apropiadas en cavidad oral, unas reduciéndolo y otras incrementándolo para mantener un balance. De esta forma, el rol de la flora oral normal es mantener la homeóstasis en la cavidad oral (4). Dichas condiciones consideradas como ecológicas, dentro de la boca se pueden ver afectadas en algún momento de la vida por diferentes factores como: erupción y pérdida de los dientes, inserción de prótesis tales como dentaduras postizas, y cualquier tratamiento dental, incluyendo la ampliación, pulido y restauraciones. Las fluctuaciones transitorias en la estabilidad del ecosistema oral pueden ser inducidas por la frecuencia y el tipo de alimento ingerido, los períodos de tratamiento con antibióticos, y las variaciones en la composición y la tasa de flujo de saliva. Así mismo el ambiente en donde se desenvuelve el individuo hace que adquiera un ecosistema oral característico de su entorno y de la población con la que interactúa. Es por ello que el objetivo de este trabajo es comparar la flora oral en estudiantes de ingeniería electrónica y medicina de VI a X semestre de la universidad el bosque. MATERIALES Y MÉTODOS Población y muestra Se evaluó la flora oral en estudiantes de VI a X semestre de la facultad de Ingeniería Electrónica, y de la facultad de Medicina de la Universidad El Bosque. La población fue seleccionada mediante una encuesta en la que se evaluó el estado de salud oral y sistémica en general. Los individuos que cumplían con los parámetros requeridos por la encuesta fueron invitados a participar en el estudio, mediante la firma de un consentimiento informado. Se excluyeron del estudio aquellos pacientes que presentaron cualquier enfermedad oral o sistémica, que estaban bajo terapia antimicrobiana en los tres meses anteriores y/o en tratamientos inmunosupresores, personas que presentaron implantes dentales, tratamiento ortodóntico, mujeres embarazadas, en tratamiento anticonceptivo o en estado de lactancia, y fumadores. Para la toma de muestra de saliva se le indicó al paciente una serie de recomendaciones, que incluían dos horas previas a la toma de la muestra, no consumir alimentos, no realizar cepillado de dientes, ni usar
  • 3. 3 enjuagues bucales, entre otros. A cada paciente se le solicitó escupir en un tubo taparrosca estéril, sin pegar los labios a la boca del tubo, hasta obtener mínimo 1 ml de saliva. La muestra se transportó hasta el laboratorio de microbiología de la Universidad El Bosque en un término no mayor a dos horas después de la toma de la misma, para su posterior procesamiento microbiológico. Procesamiento microbiológico Las muestras de saliva fueron sembradas por agotamiento en diferentes agares y luego incubadas a 37°c durante 24 a 48 horas para bacterias aerobias, mientras que para anaerobias el tiempo fue de 8 días. Agar sangre. Es utilizado en este estudio para la recuperación de cocos Gram positivos de interés oral. La identificación microbiana incluyó examinación de las características morfológicas de las colonias en los cultivos, en dicho agar, se reconoció el tipo de hemólisis existente, se realizó tinción de Gram y posteriormente se realizaron pruebas bioquímicas que permitieron diferenciar especies y géneros de microbianos. Primero se realizó prueba de catalasa para diferenciar Staphlylococcus spp (catalasa positivos) de Streptococcus spp (catalasa negativos). A aquellas bacterias catalasa positiva, se les realizó la prueba coagulasa, para diferenciar Staphylococcus aureus del resto de especies del mismo género. Para los microorganismos catalasa negativa que tenían hemolisis alfa, se realizó la prueba taxo P para diferenciar Streptococcus del grupo viridans de Streptococcus pneumoniae. Aquellas colonias catalasa negativa que presentaron hemolisis gamma se les realizó resiembra y posteriormente identificación bioquímica con BBL Crystal GP. Agar Wilkin Chalgren. Fue utilizado para el cultivo de microorganismos anaerobios, para conferir esta atmosfera anaeróbica, las muestras fueron incubadas en cajas de anaerobiosis con sobres generadores de anaerobiosis. Después del tiempo de incubación, se realizó evaluación de las características morfológicas de las colonias al estereoscopio y verificación de la presencia de bacterias negro pigmentadas. Las bacterias negro pigmentadas, fueron expuestas a luz ultravioleta para diferenciar dos géneros importantes en cavidad oral que son género Prevotella spp el cual tiene la capacidad de autofluorecer de color rojo oscuro en presencia de luz ultravioleta (luz UV positiva) del género de Prophyromonas spp (luz UV negativo). Aquellas bacterias positivas a la luz ultravioleta se les realizó prueba de ONPG con el fin de diferenciar Prevotella melaninogenica (prueba de ONPG positiva) de Prevotella intermedia/ nigrescens. Las otras bacterias anaerobias que crecieron en el agar Wilkin Chalgrens fueron identificadas por las características morfológicas de las colonias y cuando fue necesario se realizó resiembra y posteriormente identificación de especie usando la galería bioquímica de Rapid Ana II. Una parte de la muestra de saliva fue inoculada en caldo Tioglicolato e incubada en condiciones anaeróbicas. El crecimiento microbiano se evidenció por turbidez del caldo después de 8 días de incubación. Agar Mac Conkey. Para la identificación de microorganismos sobreinfectantes, de la familia Enterobacteriaceae y Pseudomonadaceae se empleó el Agar MacConkey. Después de 24 horas de incubación en condiciones
  • 4. 4 aeróbicas, el crecimiento bacteriano fue evidenciado por la presencia de Unidades Formadoras de Colonias (UFC), además en los cultivos positivos se revisó la fermentación o no de la lactosa. Las colonias que crecieron fueron resembradas y el género y la especie fueron identificadas mediante la galería bioquímica BBL Crystal GN/NF. Como pruebas complementarias a la galería se realizó la prueba de indol y de oxidasa. Agar Saboraud. Utilizado para la recuperación de hongos levaduriformes del género Candida. Con las colonias que crecieron en este agar primero se realizó tinción de Gram para confirmar morfología levaduriforme. Una vez confirmada la morfología, las colonias fueron resembradas para posteriormente realizar prueba de prueba de tubo germinal, con el fin de diferenciar Candida albicans de otros tipos de Candida spp aislados de cavidad oral. La presencia de Candida albicans fue confirmada por la formación de pseudohifas en la prueba de tubo germinal. Análisis de resultados: Los resultados de cada uno de los cultivos de los pacientes evaluados fueron tabulados en una hoja de Microsoft Excel para versión Windows y se diseñaron graficas de barras para la descripción de frecuencias de los microorganismos presentes en los pacientes de evaluados. RESULTADOS En las figuras 1-3 se muestra la frecuencia de microorganismos presentes en las muestras de saliva de los pacientes evaluados. La figura No1, describe los resultados obtenidos del cultivo en agar sangre (cocos Gram positivos); Figura No2. Resultados obtenidos a partir del cultivo en Agar Wilkin Chalgrens (Bacterias anaerobias); Figura No3. Resultados obtenidos del cultivo en agar Mac Conkey y agar Sabouraud. Figura 1. Cocos Gram positivos En la figura 1 se muestran los resultados de Cocos Gram positivos. Se puede observarque los Streptococcus del grupo viridans (SGV) en ambas facultades tienen una frecuencia del 100%, esto debido a que SGV son habitantes normales de la mucosa oral, respiratoria y gastrointestinal de los mamíferos y del tracto genital en la mujer, donde juegan un papel importante en la prevención de la colonización de patógenos potenciales (3), por lo tanto, no es anormal ver en esta cantidad el microorganismo. La frecuencia de Staphylococcus sppfue de 80% y 60% para la facultad de Ingeniería Electrónica y Medicina respectivamente. Streptococcus mutans fue aislado en un 20% en la facultad de Ingeniería y no se detectó en la facultad de Medicina, se sugiere que hipotéticamente los estudiantes de Medicina tienen un alto consumo de azucaresensu dieta que implicaría el aumento en la presencia de este microorganismo y por lo tanto se tendría que profundizar el estudio, mientras que Streptococcus bovis se encontró en la misma proporción de un 20% en ambos grupos estudiados. Streptococcus mucilaginosus y 0% 20% 40% 60% 80% 100% Porcentaje% Microorganismos Cocos Gram Positivos Ingeniería Medicina
  • 5. 5 Streptococcusuberis fueron identificados solo en la facultad de Ingeniería con presencia del 20%. Figura 2. Microorganismos anaerobios. En la figura 2 se muestran los resultados para microorganismos anaerobios. Se detectó presencia de ActinomycessppyCapnocytophaga spp de un 100% en ambas facultades. Fusobacterium spp fue identificado tanto en Medicina como en Ingeniería en el 60% en los dos grupos, Prevotella intermedia/nigrescens se encontró en el 100% de los pacientes evaluados en la facultad de medicina y en el 60% de los estudiantes evaluados de la facultad de Ingeniería. Prevotella melaninogenica, Parvimonas micra y Wollinella spp fueron identificados solamente en los pacientes de la facultad de Ingeniería electrónica en un 60%, 20% y 20% respectivamente. Figura 3. Microorganismos sobreinfectantes En la figura 3 se pueden observar los microorganismos sobreinfectantes (enterobacterias y Candida) tanto en los estudiantes de la facultad de Medicina como en Ingeniería Electrónica; se identificó Candida spp,Candida albicansy Enterobactercloacae en el 20% de los estudiantes de la facultad de medicina evaluados, mientras que en ingeniería electrónica el género Candida no está presente y el único microorganismo sobreinfectante encontrado en el grupo de la facultad de Ingeniería electrónica es Enterobacter enterogenes en un 20%. DISCUSIÓN En este trabajo se evaluó la flora oral presente en estudiantes de VI a X semestre de dos facultades diferentes de la Universidad El Bosque, una facultad relacionada con ciencias de la salud y otra no relacionada con dicho ámbito para observar e identificar la relación que puede tener el entorno en el que se desenvuelve un individuo y la flora oral que predomina. 0% 20% 40% 60% 80% 100% Porcentaje% Microorganismos Anaerobias Ingeniería Medicina 0% 20% 40% 60% 80% 100% Porcentaje% Microorganismos Sobreinfectantes Ingeniería Medicina
  • 6. 6 Los resultados obtenidos en este proyecto son consistentes con lo reportado por Aas et al., 2005, en cuanto a que los Streptococcus spp son el género más abundante y aislado como flora normal en la cavidad oral; estos microorganismos son muy importantes ya que juegan un rol clave en la homeostasis de la cavidad oral, además son los primeros colonizadores e impiden por antagonismo microbiano la llegada de microorganismos patógenos.(1) Se ha reportado que las familias microbianas más abundantes en cavidad oral y que hacen parte de la flora normal son Firmicutes, (tales como especies de Streptococcus, Gemella , Eubacterium , Selenomonas , Veillonellas , y los relacionados), Actinobacterias (tales como especies de Actinomyces , Atopobium , Rothia y concordantes), Proteobacterias (por ejemplo, especies de Neisseria, Eikenella,Campylobacter, y concordantes), Bacteroidetes (por ejemplo, especies de Porphyromonas, Prevotella, Capnocytophaga y los relacionados), Fusobacterias (por ejemplo, especies de Fusobacterium y Leptotrichia.)(1). Estos datos son consistentes con los microorganismos identificados en este estudio, en el cual hubo predominio de bacterias tales como Actinomyces spp, Capnocytophaga spp, Prevotella spp y Fusobacterium spp los cuales fueron hallados tanto en la facultad de medicina como en la de ingeniería (1). De acuerdo a Alcaide et al., 2010 los Streptococcus del grupo viridans son habitantes normales de la mucosa oral, respiratoria y gastrointestinal de los mamíferos y del tracto genital de la mujer. Juegan un papel importante en la prevención de la colonización de patógenos potenciales. Este grupo lo componen diversos microorganismos como Streptococcus mitis, Streptococcus sanguis y Streptococcus mutans. Los Streptococcus del grupo viridans fue el género microbiano principalmente aislado (100%) en ambas facultades, lo cual indica normalidad en cuanto a la flora de los individuos estudiados. En el caso de este proyecto, Streptococcus mutansfue hallado únicamente en la facultad de medicina, con respecto a lo que encontrado en la literatura, en el estudio realizado por Linossier et al., 2011 los resultados obtenidos indican, la dependencia de la colonización bacteriana con la edad. La presencia de este microorganismo también se podría atribuir a un alto consumo de azucares por parte de este paciente. Sin embargo, esta variable en este estudio no fue evaluada por lo cual no se podría afirmar dicha asociación en este trabajo. Con respecto a Staphylococcus spp, los resultados encontrados en la investigación nos indican que no hay diferencia marcada para este microorganismo entre ambas facultades. Pereira et al., año 2005, reporta que la mayoría de estos microorganismos no son patogénicos y residen principalmente en la piel y membranas mucosas de humanos. Sin embargo, cuando la superficie es damnificada por alguna razón, esa bacteria puede invadir los tejidos y causar infección. En cavidad oral estos se consideran flora transeúnte, frecuentemente aislada por la proximidad entre la cavidad oral y/o comisuras labiales de donde estos microorganismos son flora normal. Así mismo por condiciones exógenas como auto- inoculación por hábitos como chuparse los dedos, morderse la uñas, etc. Sin embargo su detección no se asocia frecuentemente con infección (4). Con respecto a Actinomyces spp identificada en el 100% en ambas facultades, se dice que sigue siendo un microorganismo de flora oral normal pero cuando hay un estado de desequilibrio entre la biopelícula y el mineral
  • 7. 7 dental, este se comporta como patógeno oportunista relacionado con la caries radicular. En este estudio solo se pude reportar su presencia pero no se puede asociar con ninguna condición clínica en el paciente puesto que dicha variable no se analizó (15). El género Enterobacter fue encontrado en cavidad oral de los estudiantes de la facultad de Medicina e Ingeniería, estas bacterias que son transeúntes en boca, puesto a que su medio natural, es en el tracto intestinal de los seres humanos (16), según Oliveira et al., 2015 “la insalubridad, el contacto con personas enfermas y diversos agentes biológicos son factores predisponentes asociados a la colonización por diferentes microorganismos, incluyendo bacterias entéricas. Dentro de los microorganismos sobreinfectantes de la familia Enterobacteriaceae, el género Enterobacter, seguido del género Klebsiella son muy frecuentemente detectados en la cavidad oral de individuos sanos, donde se comportan como flora transeúnte. Sin embargo, su presencia en boca es indicador de hábitos de higiene inadecuados y estos microorganismos tienen gran relevancia puesto se han reportado por presentar gran cantidad de genes que confieren resistencia a los antibióticos, situación que podría complicar tratamientos a nivel oral. La presencia de estos microorganismos en cavidad oral de dichos estudiantes se atribuye a distintos mecanismos exógenos tales como la contaminación cruzada (mano- ano-mano-boca), auto inoculación con cepillo de dientes contaminados por hábitos como dejar el cepillo de dientes en el baño, consumo de alimentos contaminados, etc. Estos factores propician condiciones favorables para hallar dicho género y especie de entero bacteria en cavidad oral. Así mismo otro microorganismo que hace parte de la flora normal en cavidad oral pero que se considera sobreinfectante en la misma es el género Candida y las especie más comúnmente detectada es C. albicans. Salazar et al., 2005, reportan que Candida spp forma parte de la flora oral normal en el ser humano sistémicamente sano. Así mismo Candida albicans a pesar de ser un microorganismo asociado a patogenicidad por la presencia de factores de virulencia como las pseudohifas y su capacidad invasiva. Este hongo necesita de características específicas en el hospedador para generar una infección. Por lo tanto nuestros resultados muestran que a pesar de que Candida albicans está presente en 20% de la población evaluada de la facultad de medicina, este grupo podría considerarse como portadores sanos, ya que el microorganismo en bajas proporciones es normal detectarlo en cavidad oral. CONCLUSIONES Los microorganismos encontrados en la flora oral de los estudiantes de la facultad de Ingeniería Electrónica y facultad de Medicina hacen parte de la flora normal y transeúnte en cavidad oral. No se observaron diferencias pronunciadas de microorganismos particulares aumentados o disminuidos en una facultad con respecto a la otra. Los Streptococcus del grupo viridans, el género Actinomyces spp y Capnocytophaga spp podrían ser la flora más estable que se mantiene en las dos poblaciones evaluadas. REFERENCIAS (1).Jørn A. Aas, Bruce J. Paster, Lauren N. Stokes, Ingar Olsen, and Floyd e. Dewhirst, defining the normal bacterial flora of the oral cavity, journal of clinical microbiology, vol. 43, 2005, pag 1- 12
  • 8. 8 (2).Evelio J. Perea. la flora de la boca en la era de la biología molecular. Infecciones orofaciales. 2004; 9. (3). Alfredo C. Linossier, Carlos y. Valenzuela, Eduardo R. Soler y Estela M. Contreras. Colonización de la cavidad oral por streptococcus grupo mutans, según edad, evaluado en saliva por un método semi- cuantitativo. 31 de enero de 2011. (4). Á. Simón-soro, i. Tomás, R. Cabrera-rubio, m.d. Catalán, B. Nyvad and A. microbial geography of the oral cavity. journal of dental research. 92(7):616-621. 2013 (5). Mahmoud A. Ghannoum, Richard J. Jurevic, Pranab K. Mukherjee , Fan Cui , Masoumeh Sikaroodi, Ammar Naqvi , Patrick M. Gillevet. Characterization of the oral fungal microbiome (Mycobiome) in healthy individuals. pltos pathogens. VOL 6. 2010 (6). BatabyalB, Chakraborty S, BiswasS. role of the oral microflora in human population: a brief review. International journal of pharmacy & life sciences 2012; 3(12). (7). Fernando Alcaide Fernández de Vega. Aspectos microbiológicos de los estreptococos del grupo viridans. SEIMC. (8). Puerto Alonso J, Asencio Méndez C, Gómez Rodríguez F. streptococcus bovis: un patógeno emergente. Medicina clínica. 2007; 129(9):349- 351. (9). Reddy S, Sanjai K, Kumaraswamy J, Papaiah L, Jeevan M. oral carriage of enterobacteriaceae among school children with chronic nail-biting habit. Journal of Oral and maxillofacial pathology: JOMFP 2013 May; 17(2):163-168. (10). Da Silva-Rocha WP, Lemos VLdB, Svidizisnki TIE,Milan EP,Chaves GM. candida species distribution, genotyping and virulence factors of candida albicans isolated from the oral cavity of kidney transplant recipients of two geographic regions of Brazil. bmc oral health 2014;14:20. (11). Pereira de Carvalho C, dos Santos Pereira J, das Neves de Araújo Lima E, Costa Lima K.papel de los staphylococcus spp. En la mucositis oral: revisión de laliteratura [Internet].Acta odontologica venezolana. 20[cited 20 may 2016] (12). Salazar M, Sacsaquispe S. J. Presencia de hifas de candida en adultos con mucosa oral clínicamente saludable. rev estomatol herediana 2005; 15(1): 54 – 59 (13). Guilarte C, Perrone Castro M. Bacterias periodontopatogénicas: bacilos anaerobios gram negativos como agentes etiológicos de la enfermedad periodontal. Acta odontol. venez. 2005 Aug; 43(2). (14). Fernández V Alejandra, Juliet L Chrystal, Valenzuela M M. Eugenia. capnocytophaga sp. rev. chil. infectol. [Internet]. 2007 feb [citado 2016 mayo 19] ; 24( 1 ): 57-58. (15). Lima Gisele Quariguasi Tobias, Oliveira Eurípedes Gomes, Souza João Inácio Lima de, Monteiro Neto Valério. comparsion of the efficacy of chemomechanical and mechanical methods of caries removal in the reduction of streptococcus mutans and lactobacillus spp in carious dentine of primary teeth. J. Appl. oralsci. [Internet]. 2005 dec [cited 2016 may 20] ; 13( 4 ): 399-405 (16). Leão-Vasconcelos,l. s. n. de o., lima, a. b. m., costa, d. de m., rocha-vilefort, l. o., de Oliveira, a. c. a., Gonçalves, n. f., prado-palos, m. a.(2015). enterobacteriaceae isolatesfrom the oral cavity of workers in a brazilian oncology hospital. revista do instituto de medicina tropical de São Paulo, 57(2), 121–127.