El documento describe los principales métodos de muestreo y diagnóstico de agentes patógenos en especies acuícolas cultivables. Explica la importancia de desarrollar programas óptimos de manejo y control de enfermedades mediante la aplicación de técnicas diagnósticas como muestreos dirigidos y aleatorios, vigilancia, monitoreo, y diferentes niveles de diagnóstico en laboratorio incluyendo métodos directos e indirectos. Finalmente, resume los principales análisis de laboratorio utilizados para diagnosticar enfermed

1. Principales Metodologías de Muestreo y
Diagnóstico de Agentes Etiológicos en Especies
Acuáticas Cultivables (Peces, Moluscos y
Crustáceos) Iera Parte
MV.Carmen Medina
Universidad Nacional Experimental
Francisco de Miranda

2. El creciente desarrollo de la acuicultura
Introducción
aparición de una variedad de enfermedades
impacto productivo y económico para la industria.
Necesidad de desarrollar óptimos programas
manejo, control y prevención
aplicación de una variedad de técnicas diagnósticas
Diagnostico y tratamiento certero

3. Sensibilidad y Especificidad de la Prueba
Revisión(screening)
Diagnostico de Enfermedades
Manejo de la salud y control de Enfermedades
Niveles de Diagnostico
Vigilancia
•Prevalencia
•Incidencia
Monitoreo
Diagnostico

4. Vigilancia
Observación sistemática y examen de muestras de una población para detectar la
presencia de agentes infecciosos o enfermedades, con el fin de controlar brotes o
dispersión
Monitoreo
Colecta sistemática y análisis de la información acerca del nivel de la infección o
enfermedad conocida en la población
Es un proceso sistemático, planeado y actual para obtener y organizar datos y producir
resultados agregados

5. No. animales enfermos en un tiempo en proporción al total de población
P = No. Casos t
población t
Prevalencia
Incidencia
No. de nuevos casos en un periodo de tiempo/ Medida de velocidad promedio a la cual dispersa la
enfermedad
I = Tot. nuevos casos t

6. Muestreo
Diagnóstico en situación de enfermedad
Diagnóstico en organismos asintomáticos
• Vigilancia
• Certificación
Muestreo dirigido
” seleccionar organismos representativos
enfermedad”
Prevenir organismos muertos
Asegurar muestras colectadas y preservadas
apropiada para prueba de diagnóstico
Muestreo aleatorio
“cada elemento de población tiene la misma probabilidad
de ser seleccionado en la muestra”
•Estado de salud de población
•Prevalencia/incidencia de un patógeno específico
•Organismos portadores
•Certificación de lotes reproductores o PL´s

7. Nivel I
Obs.animal y
medio/examen de
signos
Conocimientos
estatus normal
de salud
• Observación regular
de org.
• Mantener registros
regulares
incluir información
medio
• Habilidad para
enviar y
preservar
especimenes
representativos
Nivel II
Actividad
Parasitologia.
Bacteriologia.
Micología
Requerimientos
Lab. equipo y personal
entrenado experiencia en
patología de animales
acuáticos
• Mantener registros de
diagnóstico precisos
• Preservar y almacenar
muestras
• Contacto personal del
nivel III y I
Nivel III
Virología
Biología
Molecular
Inmunologia
Microscopía
Electrónica
Histopatologia
Lab. bien equipado personal
especializado y altamente
entrenado
• Mantener registros de
diagnóstico precisos
• Preservar y almacenar
muestras
• Mantener contacto con
responsables del envío de
muestras
Niveles de Diagnostico
CENTRO DE INVESTIGACIÓN EN ALIMENTACIÓN Y DESARROLLO, A.C.2005

8. Envío de ejemplares vivos y
Moribundos
Transportados en recipientes adecuados:
•Oxigenados o aireados
•En bolsas dobleteadas de plástico
•Cajas de anime, agregando hielo triturado; y siempre
que sea posible ser recibido el mismo día del envío.
Envio de Muestras

9. Envío de muestras preservadas
•Estudios Histopatológicos
•Animales moribundos mostrando señales clínicas de la enfermedad o anormalidad con
solución acuosa de formaldehido al 4% tamponada,
•también puede agregarse una pequeña cantidad de carbonato de calcio al líquido preservativo
a los efectos de mantenerlo en un pH cercano al neutro (7,0).
Envío de muestras de productos sexuales y heces
•Fluido ovárico y semen se obtienen durante el período de desove, recolectando en tubos u otros
recipientes adecuados estériles;
•en el caso de heces, 0,5–1,0 ml de heces frescas se recolectan en 5,0 ml de solución isotónica
estéril mantenidos no más de 24 horas en hielo, a una temperatura de los 4°C.

10. Métodos Directos
• Observación del agente etiológico en el tejido
• Cultivo, aislamiento e identificación de bacterias y hongos
• Demostración de agentes (antígenos) utilizando métodos inmunológicos.
• Aglutinación directa, anticuerpos fluorescentes, ELISA
• Demostración de segmentos de ácido nucleico del agente Dot blot y
sondas genéticas in situ.
• Demostración de agentes no-inmunogénicos, o en ciertos casos
sustancias antigénicas (toxinas, nutrientes y agentes fisicoquímicos, etc.).
• Absorción atómica, cromatografía de gases, sondas específicas, métodos
químicos.
Métodos Indirectos
• Respuesta del huésped – patógeno
• Histopatología, histoquímica y estudios de ultraestructura.
• Estudios del animal
• Transmisión de un agente/enfermedad a sistemas experimentales o
reproducción de la enfermedad en grupos experimentales de mediante una
exposición controlada.

11. Principales Análisis de Laboratorio
•Extendidos
• Análisis Bacteriológicos
a partir de cultivos de
Hemolinfa
•Hemogramas
•Determinación de la
Susceptibilidad de Cepas
bacterianas a antibióticos
•Histopatología
•Técnica de RT- PCR
•Análisis Parasitológicos
•Técnica de
Inmunofluorescencia
•Hibridación in situ
Peces Crustáceos Moluscos
• Extendidos
• Análisis Bacteriológicos
• Determinación de la
Susceptibilidad de Cepas
bacterianas a antibióticos
• Histopatología
• Técnica de RT- PCR
• Análisis Parasitológicos
• Técnica de
Inmunofluorescencia
• Cultivos Celulares
• Extendidos
• Análisis Bacteriológicos
• Histopatología
• Análisis Parasitológicos