El estudio estuvo conformado por 105 muestras de hisopado de cérvix uterino de mujeres de 21 a 70 años que acudieron al Laboratorio Llontop Cajamarca del 2021 al 2022. Mediante la técnica de PCR en tiempo real se detectó ADN de Virus del Papiloma Humano de alto riesgo, arrojando 26 muestras positivas (24.76%). El serotipo con mayor frecuencia fue otros tipos de alto riesgo y el rango de edad con mayor positividad fue de 31 a 40 años.
1. FRECUENCIA DE GENOTIPOS DE ALTO RIESGO
DEL VIRUS PAPILOMA HUMANO DETECTADOS
MEDIANTE REACCION DE CADENA
POLIMERASA
EN MUJERES DE 21 A 70 AÑOS, PROCESADAS
EN EL LABORATORIO LLONTOP CAJAMARCA
PERU 2021 AL 2022
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
SEGUNDA ESPECIALIDAD DE BIOLOGIA MOLECULAR Y GENETICA
ALUMNOS:
Lic. Marco Eduardo Bermeo Tesen
Lic. Manuel Eduardo Chepe Pinglo
2. GENERALIDADES DEL VIRUS DEL PAPILOMA HUMANO
• Virus ADN - doble cadena circular - 8000 pares de bases (
8 genes y 1 Región RNC) - Sin envoltura pero con una
cápside proteica icosaédrica con 72 capsómeros
• Familia Papovaviridae que afecta células escamosas del
epitelio del tracto genital bajo, oral y nasal
• 200 genotipos del VPH - 30 :causantes de infecciones anogenitales - Son
clasificados como alto y bajo riesgo
• Carcinogénicos (alto riesgo): 16-18-31-33-35- 39-45-51-52-56-58-59-67-68-
73- 82
• Probablemente carcinogénicos: 26-53 y 66.
• Bajo riesgo: 6- 11- 40-42- 43- 44- 54-55- 57- 61-62-64-69- 70-71- 72- 81-
83-84 y CP6108. (9, 16)
3. DIAGNÓSTICO
• Los miembros de la familia VPH no se pueden cultivar
in vitro; por lo tanto la detección de VPH depende
estrictamente de análisis moleculares de la secuencia
de ADN del virus
• Tres tipos de métodos de hibridación de ácidos
nucleicos usados para detectar el VPH: las
sondas directas de ácidos nucleicos (Southern
Blot), métodos de amplificación de blanco (PCR)
y la amplificación de la señal de hibridación
(Captura de híbridos)
4. • PCR en tiempo real que detecta simultáneamente el
ADN codificante para las oncoproteínas E6/E7 de 13
tipos de VPH de alto riesgo (16, 18, 31, 33, 35, 39,
45, 51, 52, 56, 58, 59, y 68) más el VPH 66
XPERT HPV (CEPHEID)
• GeneXpert de Cepheid (Sunnyvale, California)
• Diseñado para usarse con muestras cervicales
recolectadas en PreservCyt con un dispositivo similar a
una escoba o una combinación de cepillo / espátula
endocervical
5. • PCR Real Time
• La Base
• La Válvula
• El cuerpo
• El tubo de
reacción
• Las perlas de reacción
6. • Ingreso de
muestra
• Embolo baja al tubo central y la válvula
gira a la primera posición
• Embolo aspira muestra y la válvula rota a
una nueva posición
• El Embolo baja empujando la
muestra hacia una área
activa
• A través del filtro se activa una
bocina sónica
7. • La bocina sónica da energía para
romper las células y liberar material
genético
• El material genético liberado se empuja hacia la cámara de perlas
de reacción y son mezclados por el embolo para disolver las
perlas
• La muestra preparada se
introduce en el tubo de reacción,
donde se da la amplificación
• Los LED iluminan la solución con hasta 10 colores
diferentes (Mas brillante mas presencia de ADN
objetivo)
8. • Amplificación del ADN diana por PCR y detección simultánea
• El ADN diana se marca y se amplifica con una sonda que tiene
una etiqueta fluorescente
• Las sondas utilizadas en la tecnología Xpert se llaman
"Molecular Beacons”
• El producto acumulado se controla y mide a través de la
fluorescencia detectada
• Más de una diana puede ser amplificado y detectado (multiplex) y cada diana se
marca con diferentes colores
9. • Unión de sondas con su diana en la prueba Xpert: El fluoróforo reportero se encuentra apagado por
acción del supresor cuando la sonda se encuentra inactiva, solamente al unirse a su diana se genera
el híbrido que libera la molécula fluorescente, lo que resulta en la emisión de fluorescencia
10. Estuvo conformado por 105 muestras de hisopado de cérvix
uterino que se tomaron en el Laboratorio Llontop
Cajamarca del 2021 al 2022.
Estuvo conformado por 105 mujeres que acudieron al
Laboratorio Llontop Cajamarca del 2021 al 2022, a
quienes les tomaron muestras de hisopado de cérvix uterino
en el medio de transporte respectivo para el procesamiento
de la prueba de detección de ADN de Virus del Papiloma
Humano de alto riesgo, mediante la metodología de
reacción en cadena de polimerasa.
11. RECOLECCION DE LA
MUESTRA
Las muestras de cuello
uterino recolectadas
en la solución
PreservCyt se han
validado para su uso
con el Xpert HPV
Assay.
TRANSPORTE DE LA
MUESTRA
Solucion de PreservCyt
se pueden transportar
a 2-30°C.
ALMACENAMIENTO
DE LA MUESTRA
Se pueden almacenar
hasta 6 meses después
de la fecha de
colección.
14. RESULTADOS: PERIODO 2021-2022
TABLA N° 1. Frecuencia de pacientes que se le solicitaron ADN Papiloma Virus Humano de alto
riesgo según resultado en mujeres que acudieron a Laboratorio Llontop-Cajamarca.
Durante los años del 2019 - 2020 se solicitaron 105
solicitudes de ADN Papiloma Virus Humano de alto riesgo
de ellos salieron positivos 26 (24.76%).
15. RESULTADOS: PERIODO 2021-2022
TABLA N° 2. Frecuencia de pacientes que se le solicitaron ADN Papiloma Virus Humano de alto
riesgo según serotipo en mujeres que acudieron al Laboratorio Llontop-Cajamarca.
Durante los años 2019 - 2020, de los 26 (24.76%) pacientes que
salieron ADN Papiloma Virus Humano de alto riesgo positivos, por
serotipo la mayor frecuencia fue de otros tipos de alto Riesgo con 18
(17.14%) y con menor frecuencia HPV 16 con 3 (2.86%), HPV 18-45
con 1 (0.95%). Se tuvo doble reacción HPV 18-45 con otros tipos de
alto Riesgo con 3 (2.86%) y HPV 16 con otros tipos de alto Riesgo con
1 (0.95%).
16. RESULTADOS: PERIODO 2021-2022
TABLA N° 3. Frecuencia de pacientes que se le solicitaron ADN Papiloma Virus
Humano de alto riesgo según serotipo y edad en mujeres que acudieron al
Laboratorio Llontop-Cajamarca.
Durante los años 2019 - 2020, de los 26 (24.76%) pacientes que salieron
ADN Papiloma Virus Humano de alto riesgo positivos, el rango de edad
con mayor frecuencia fue de 31 a 40 años de edad con 11.43%.
