1. Tecnología Hybrid Capture® 2 Digene Lcda. Juliana Acurero Ortega

2. Ciclo de vida del VPH en el cérvix Canal Cervical Las partículas del virus se ensamblan y el virus se libera Capa escamosa madura El virus utiliza células del huésped para replicar el ADN viral y expresar las proteínas codificadas Capa escamosa Células parabasales El VPH infecta la capa basal epitelio cervical. Células basales (madre) Membrana basal Epitelio Normal Epitelio Infectado Adaptado de Frazer IH. Nat Rev Inmunol 2004; 4:46–54.

4. Consume mas del 80% de los recursos financieros de las áreas de salud

5. Basado en la Caracterización /Cuantificación de Parámetros Clínicos indicativos de Patologías establecidas

6. Enfermedades infecciosas, problemas cardiacos, lesiones orgánicas, disfunciones bioquímicas y/o metabólicas, problemas hereditarios

7. Alta Sensibilidad Analítica y reducidos niveles de accesibilidad

8. Requerimientos importantes en infraestructura y preparación profesional del personal

10. Usualmente cuenta con menos del 20% de los recursos de las áreas de salud

11. Basado en la Detección de Parámetros Clínicos asociados a la Propensión/Detección Precoz de patologías.

12. Problemas Cromosómicos a nivel Prenatal, Defectos Metabólicos Innatos, ETS, Artritis, Marcadores Genómicos, etc.

13. Alta Sensibilidad Clínica y Amplia Accesibilidad al público en general.

14. Metodologías adecuadas a programas de tamizaje en salud publica

16. Un Ejemplo de Efectividad Diagnóstica:Virus de Papiloma Humano (VPH) A partir de los años 60, la introducción de la evaluación preventiva mediante citología, logró disminuir en mas de un 30% la incidencia de cáncer cervical

17. Incidencia y Mortalidad. Cancer Cervical. Latino America y el Caribe, 2002 No obstante, cada año se registran mas de 250 Mil muertes por cáncer cervical a nivel mundial Cada 2 minutos muere una mujer en el mundo En Venezuela, las estadísticas indican cerca de 2 Mil muertes anuales por este concepto Cada 6 horas muere una mujer en Venezuela

21. Trazas de sangre.

22. Signos de Inflamación

23. La colección de celulas no es al azar; no es posible evaluar aquello que no ha sido colectado.

25. Errores de muestreo – resultadosfalsamentenegativos o dudosos

26. Intervalo entre citologías – puedendesarrollarsecánceresagresivos entre laspruebas

28. Errores de muestreo – resultadosfalsamentenegativos o dudosos

30. Optimizadoespecíficamenteparalaspruebas de CapturaHíbrida

31. No necesitapreparaciónprevia

32. Puedemantenerse a TemperaturaAmbientepor 15 días, en neverapor 3 meses, posteriormentecongeladas a -20

35. Amplificación de señal de los híbridos formados

36. Detección a través de una reacción enzima-sustrato

38. Microplate Heater

39. Microplate Shaker

40. Luminometer DML 2000

41. Reactivos

42. Sondas para VPH, CT y GC

43. Controles Negativos, Controles Positivos y Controles de Calidad

45. No requiere instalaciones especiales

46. Ambiente climatizado

48. La prueba se realiza en un corto período de tiempo

49. El método de amplificación de la señal de los híbridos formados determina, con precisión, la cantidad real de los patógenos presentes

51. Reproducibilidad: 94-99%

52. Precisión: 90.4%

54. No hay necesidad de laboratorios ni personal, altamente especializados

55. Permite dar resultados consistentes el mismo día

57. hc2: metodología En solo 5 pasos! 4 Detección y generación de la señal 1 Desnaturalización 3 Captura 5 Lectura 2 Hibridización

59. Separa las hebras del ADN viral

61. Metodología: Hibridización •AdiciónControles, Muestras y Sondas •Homogenización • Incubación La sonda de una hebra de ARN Target-específica se une al ADN, creando un híbrido ARN:ADN

62. Metodología: Captura •Transferencia de la solución hibridizada • Incubación El híbridoescapturado en unaplacacubierta con anticuerpos de capturaespecíficospara los híbridos ARN:ADN

63. Metodología: Detección (Fase 1) •Decantarsobrenadante •Adición del Reactivo de Detección 1 • Incubación

64. Metodología: Lavado •Preparación de la solución de lavado •Lavado

65. Metodología: Detección (Fase 2) •Adición del Reactivo de Detección 2 • Incubación Unavezcapturados, los híbridos son detectados con un segundogrupo de anticuerposARN:ADN conjugados con FosfatasaAlcalina

66. Metodología: Generación de la señal Las moléculas de FosfatasaAlcalinareacionan con el sustrato de detección, resultando en unaseñalquimioluminiscenteamplificada.

67. hc2: Kits VPH Alto Riesgo: Incluye sondas para Alto Riesgo (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68) Alto y Bajo Riesgo: Incluye sondas para Bajo Riesgo (6, 11, 42, 43, 44) y para Alto Riesgo (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68) CT y GC CT-ID: para determinación de Chlamydia tracomatis GC-ID: para determinación de Nesseira gonnorrhea CT/GC: para determinación de ambos

68. SensibilidadClínicavsSensibilidadAnalítica El PCR tiene una sensibilidad analítica muy alta para ser usado en una prueba de despistaje ya que causa falsos positivos Las sondas consenso usadas en el PCR son susceptibles a deleciones de la región L1, lo que causa falsos negativos La sensibilidad clínica de la prueba CH2 es mucho mas elevada que la del PCR, por lo que es mas conveniente para su uso en el diagnóstico clínico La prueba de genotipificación utiliza sondas GP5+/6+, las cuales tienen una elevada sensibilidad clínica, respecto a otras de uso común en PCR, lo que la hace muy robusta y una herramienta ideal para genotipificar las mujeres HC2 + Cut off!

70. ACOG (American College of OB-GYNs)

71. ASCCP (American Society for Colposcopy & Cervical Pathology)

72. ACS (American Cancer Society)

73. ARHP (Assoc of Reproductive Health Professionals)

74. NPWH (National Assoc. of Nurse Practitioners in Women’s Health)

75. AMWA (American Medical Women’s Association)

76. ICSI (Institute for Clinical Systems Improvement)

77. CDC (Centers for Disease Control)

79. Conclusiones La prueba de CapturaHíbrida 2 salvamasvidas del padecerCáncer Cervical La prueba de CapturaHíbrida 2 posee el Valor PredictivoNegativomas alto de lastresmodalidadesusadasparaestudio de VPH GRACIAS POR SU ATENCION Juliana Acurero Ortega