Un blot, en biología molecular y genética, es un método para transferir proteínas, ADN o ARN a un transportador (por ejemplo, una membrana de nitrocelulosa, fluoruro de polivinilideno o nailon).

2. Blots
Sebastián Cano
Samuel Villegas
Y Javier ;)

3. Contenido
•¿Qué es un blot?
•Tipos de blot
•Western blot
•Artículo
o Introducción
o Metodología
o Resultados y discusión
o Conclusiones
•Preguntas

4. ¿Qué es un blot?
“Blotting” es un proceso de transferencia de
macromoléculas de un gel hacia una superficie
de una membrana inmovilizada para detectar las
moléculas que han sido transferidas.
(Difference between Northern, Southern and Western Blotting, s/f)

5. Tipos de blots
Su clasificación es dada según la macromolécula que transfieran.
(Tomar,2016)
Southern: análisis de las secuencias de DNA
Western: análisis y detección de proteínas.
Eastern: identificación de epítopos de
carbohidratos, glucoconjugados y lípidos.
Northern: análisis y detección RNA en una
muestra.

6. Pasos:
• Electroforesis en Gel: separación por tamaño y carga en un gel.
• Transferencia a Membrana: traslado de proteínas del gel a una
membrana sólida. (Nitrocelulosa o PVDF
• Bloqueo y Anticuerpos: uso de anticuerpos primarios para unirse
a proteínas específicas.
• Detección con Anticuerpos Secundarios y Revelado: amplificación
de señal para detección precisa. (Fluoróforo o enzima
señalizadora)
Western Blot
Esta herramienta emplea una combinación de técnicas para identificar y
estudiar proteínas en muestras biológica.
(Western Blotting - Concept | Cell Biology | JoVe, s/f)

7. Artículo
Un fragmento de tau patógeno compromete los microtúbulos, altera la
señalización de la insulina e induce la respuesta de la proteína desplegada
Tong Guo , Dina Dakkak , Teresa Rodríguez-Martín , Wendy Noble ,y Diane P. Hanger
Importante
Proteínas tau: Encargadas de la estabilización de microtúbulos, el mantenimiento
axonal y el transporte intracelular. Se expresa principalmente en las neuronas.
Taupatías: Enfermedades neurodegenerativas, las cuales, son dadas por la
aparición anormal de la proteína tau. Ej. El alzhéimer y demencia
frontotemporal.

8. Introducción
Se cree que la fosforilación y la
fragmentación anormal de las
proteínas Tau, son causas
postraduccionales para la aparición
patógena de esta, generando así,
ciertas enfermedades
neurodegenerativas. Por esto, se
quiere analizar los mecanismos de
acción y el funcionamiento celular
desencadenado por Tau-35, la cual
es un Tau que le falta del extremo
N, pero tiene las 4 partes de unión
a los microtúbulos. Esto, además de
identificar posibles terapias futuras
para las enfermedades generadas.

9. 1. Cultivos celulares: Se cultivaron células CHO (ovario de
hámster chino) para estudiar los efectos de Tau35 en la
función celular.
2. Transfección: Se transfirieron los plásmidos que
codifican para la proteína Tau35 y la proteína tau de
longitud completa (FL-tau) en las células CHO.
Metodología
3.Fijación de células: Se fijaron las células con metanol
para eliminar las proteínas citosólicas solubles y
visualizar el citoesqueleto mediante
inmunocitoquímica.
4. Análisis de microscopía: Se utilizó la microscopía
para visualizar la organización de los microtúbulos y la
localización de Tau35 en las células.

10. Metodología
5. Análisis de Western blot: Se utilizó la técnica
de Western blot para analizar los cambios en la
expresión génica y la fosforilación de proteínas.
6. Análisis de PCR en tiempo real: Se utilizó la
técnica de PCR en tiempo real para analizar los
cambios en la expresión génica.
7. Análisis estadístico: Se realizaron análisis
estadísticos para determinar la significancia de
los resultados.

11. Resultados
Fosforilación
anormal de
Tau-35
La fosforilación regula la localización y
función de tau, y la fosforilación
aberrante de tau reduce su capacidad
para unirse a los microtúbulos.

12. Efectos divergentes de FL-tau y
Tau35 sobre la señalización de
insulina a través de Akt / GSK3

13. Ruta de funcionamiento

14. Metanol
22%
6%
Organización de microtúbulos
disruptos en células CHO-Tau35

15. Paraformaldehído

16. La organización de
microtúbulos en las células
CHO-Tau35 luego de
restablecer la acetilación o
la fosforilación
α-tubulina N-acetiltransferasa 1

17. Discusión
Modelo previamente propuesto
La agrupación de microtúbulos se promueve
mediante la dimerización intermolecular
complementaria entre el extremo N y los dominios
ricos en prolina de tau.

18. Conclusión
En conclusión, este estudio proporciona información valiosa sobre los
mecanismos subyacentes a la patología de tau y puede ayudar en el
desarrollo de terapias para tratar las tauopatías. Los hallazgos sugieren
que la conversión de tau fisiológica a tau patológica juega un papel
central en el desarrollo de la tauopatía y que la fosforilación anormal y la
fragmentación de tau son modificaciones post-traduccionales importantes
que conducen a formas patogénicas de tau. Además, el fragmento de tau
C-terminal identificado en este estudio puede ser un objetivo terapéutico
prometedor para el tratamiento de las tauopatías, por el funcionamiento
celular aberrante.

19. Bibliografía
• Difference between Northern, Southern and Western Blotting. (s/f). Recuperado
el 8 de agosto de 2023, de https://byjus.com/neet/difference-between-northern-
southern-and-western-blotting/
• Guo, T., Dakkak, D., Rodriguez-Martin, T., Noble, W., & Hanger, D. P. (2019). A
pathogenic tau fragment compromises microtubules, disrupts insulin signaling
and induces the unfolded protein response. Acta Neuropathologica
Communications, 7(1). https://doi.org/10.1186/S40478-018-0651-9
• Tomar, M. (2016). Types of Blotting. Special Issue: Reviews on Pharmaceutics and
Nanotechnology Research & Reviews: Journal of Pharmaceutics and
Nanotechnology, 4.
• Western Blotting - Concept | Cell Biology | JoVe. (s/f). Recuperado el 26 de agosto
de 2023, de https://app.jove.com/science-education/v/13381/concepts/western-
blotting

20. ¡Gracias!
¿Alguna pregunta?
(para Javier)