Finales

1. Integrantes:
Vanessa Arredondo Montoya
Dayana Coral Hernández
Diana Patricia Londoño Giraldo
Wang Nataly Montoya Arbeláez
Julián Rincón Tabares
Mónica Viviana Tobón
Asesor:
Beatriz Parra
Escuela de Nutrición y Dietética
Bioquímica Nutricional 2
Abril-2015

3. En Colombia 1 de cada 3 hombres mayores de 50 años padece cáncer de
próstata. Se diagnostican más de 6.500 nuevos casos y mueren 2.400
hombres anualmente

4. Objetivo
• Evaluar el efecto de una deficiencia leve
de folato en la inestabilidad genética,
epigenètica y cambios fenotípicos en tres
líneas celulares singénicas del adenoma
transgénico de la próstata de ratón
(TRAMP).

5. Dieta
Folato
THF
dTTP
Síntesis
Timidilato
sintasa
Homocisteina
AdoHcy
Metionina
dcAdoMet dcAdoMet
Espermina PutrescinaEspermidina
MTA MTA
Salvamento
Metionina
PROSTATA
Metabolismo
de un carbono
Donación de un
carbono de (Ser o Gly)
Procesos
de
metilación
Ciclo de la
metionina

6. Dieta
Folato
THF
Folato
Salvamento
Síntesis
Timidilato
sintasa
Homocisteina
AdoHcy
Metil-cpgMetionina
dcAdoMet dcAdoMet
Espermina PutrescinaEspermidina
MTA MTA
Salvamento
Metionina
Crecimiento
celular
Cáncer
fenotipo 1
PROSTATA
Antifolato
daño
Epigenetico
Genético
2
3

7. Aplicación a la nutrición
• El cáncer de próstata esta estrechamente relacionado con la
alimentación, algunos resultados de la investigación son de
gran importancia para la nutrición, ya que de los conocimiento
del profesional en esta área depende en gran medida la salud
del paciente sano y el sostenimiento del paciente con esta
patología. La manipulación dietética de folato ha sido referida
como una "espada de doble filo", porque el agotamiento
farmacológico de folato por los fármacos antifolato previene la
proliferación de células de cáncer, pero puede inducir daño
genético y epigenético y la consiguiente transformación de las
células no cancerosas. Por el contrario, la administración de
suplementos de ácido fólico podría prevenir la transformación,
pero mantener las altas tasas de proliferación características
del tejido canceroso

8. Conclusión
• Este estudio demuestra que las células de la próstata son
altamente susceptibles a cambios genéticos y epigenéticos
consiguientes al agotamiento de folato leve en comparación
con células desarrolladas con cantidades suprafisiológicas de
ácido fólico (2 uM) utilizado de forma rutinaria en cultivo de
tejidos. Además, elucidamos por primera vez la contribución
de estos aspectos a los cambios consiguientes en el fenotipo
en células epiteliales. Estos resultados proporcionan una sólida
justificación para el estudio de los efectos de la manipulación
de ácido fólico en la próstata in vivo, donde las células pueden
ser más sensibles a los cambios en el estado de folato que
resultan de la administración de suplementos de ácido fólico o
enfoques terapéuticos antifolato.

9. RESULT 1 “CHRONIC MILD FOLATE DEPLETION AFFECTS PROSTATE
CELLS’ PHENOTYPE”
Método:
Anclaje celular en agar blando
Objetivo:
Determinar la capacidad de formar
colonias en las tres líneas celulares a
bajas concentraciones de folato.

10. Conclusión
Se evidencio un crecimiento
en las tres líneas celulares
independientes del estadio,
lo que indica que en una
restricción leve de folato
aumentó el numero de
colonias .

11. RESULT 1 “CHRONIC MILD FOLATE DEPLETION AFFECTS
PROSTATE CELLS’PHENOTYPE”
Métodos:
Anclaje celular en agar blando
Objetivo:
Observar las tasas de crecimiento
dependientes de folato a diferentes
concentraciones

12. Conclusiones
Las tres líneas celulares bajas en folato demostraron
crecimiento casi al 100% a 100nM FA, mientras que Dctrl,
Gctrl y Hctrl crecen a 80, 19 y 60% respectivamente.
Se demostró que a 100nM hay cambios fenotípicos.

13. RESULT 1 “CHRONIC MILD FOLATE DEPLETION AFFECTS
PROSTATE CELLS’PHENOTYPE
Métodos:
HPLC: cromatografía liquida de alta
presión.
Objetivo:
Observar el efecto de una depleción
leve de folato en los pools de
poliaminas.

14. Conclusión
Se observo un incremento en el pools de poliaminas,
lo que indica que la síntesis de poliaminas podría ser
una prioridad en las células de la próstata.

15. RESULT 2 “CHRONIC MILD FOLATE DEPLETION INDUCES DNA
DAMAGE IN PROSTATE CELLS IN VITRO”
Métodos:
HPLC. Cromatografía liquida de
alta presión.
Objetivo:
Analizar los pools de
nucleótidos y niveles
intracelulares de dUTP y dTTP
en células con agotamiento de
folato.

16. Se identifico un aumento en los tres niveles
celulares de dUTP y se mantuvo los niveles de
dTTP a pesar de la deficiencia de folato.
Conclusión

17. RESULT 2 “CHRONIC MILD FOLATE DEPLETION INDUCES DNADAMAGE
IN PROSTATE CELLS IN VITRO”
Método: ROPS
Análisis aleatorio de
oligonucleotidos
cebado
Objetivo:
Estimar la relación de
dUTP y dTTP en la
incorporación en el
ADN.

18. Conclusión
Se incorporo de manera errónea uracilo en las tres
líneas celulares y se encontró mayor cantidad de
rupturas en la cadena de ADN en H100.

19. RESULT 2 “CHRONIC MILD FOLATE DEPLETION INDUCES DNADAMAGE IN
PROSTATE CELLS IN VITRO”
Método:
SKY análisis espectral por
cariotipo
Objetivos:
Investigar si el aumento de la
incorporación errónea de
uracilo y rupturas de ADN
esta asociado con la
acumulación de
reordenamiento cromosómico

20. Conclusión
Este análisis revelo que el agotamiento leve de
folato induce aberraciones cromosómicas en
G100

21. Método:
HPLC. Cromatografía liquida
de alta presión
OBJETIVO:
Medir los niveles de AdoMet y
AdoHcy en las tres líneas
células con y sin deficiencia
leve de folato.
.
“RESULT 3 “MILD FOLATE DEPLETION INDUCES EPIGENETIC
DAMAGE IN PROSTATE CELLS.”

22. Conclusión
En las tres líneas celulares aumento la síntesis de AdoHcy
como consecuencia de la depleción de folato y los niveles
generales de AdoMet se conservaron en todas las líneas
celulares.

23. RESULT 3 “RESULT 3 “MILD FOLATE DEPLETION INDUCES
EPIGENETIC DAMAGE IN PROSTATE CELLS.”
Método:
LC_MS cromatografía de
líquidos con espectrómetro
de masas
Objetivo:
Realizar la cuantificación de
5-MetilCitosina para
determinar si la agotamiento
leve de folato induce
cambios en la metilación de
la isla CpG.

24. Conclusión
No se encontraron diferencias significativas en
las tres líneas celulares, lo que indica que las
tres presentan hipermetilación.

25. Método:
RLGS Escaneo de la
restricción genómica
Landmark
Objetivo:
Extraer ADN genómico de las
células para identificar puntos
que representan el numero de
CpG distribuidos en todo el
genoma.
RESULT 3 “RESULT 3 “MILD FOLATE DEPLETION INDUCES
EPIGENETIC DAMAGE IN PROSTATE CELLS

26. RESULT3 “RESULT3 “MILD FOLATE DEPLETION INDUCESEPIGENETIC DAMAGE
IN PROSTATE CELLS.”

27. Conclusión
La disminución en la intensidad del punto
marcado en la gráfica, indica un aumento en la
metilación en las islas CpG

28. RESULT 3“RESULT 3 “MILDFOLATE DEPLETION INDUCES EPIGENETIC DAMAGE IN
PROSTATE CELLS
Método:
MAQMA. Análisis
cuantitativo de la masa
de metilación
Objetivo:
Detectar y analizar la
metilación del ADN

29. Conclusión
El análisis cuantitativo confirmó la metilación de
CpG, demostrado por medio de la
hipermetilación de 4D20 en D100, G100 y H100.

30. RESULT 3 “RESULT 3 “MILD FOLATE DEPLETION INDUCES
EPIGENETIC DAMAGE IN PROSTATE CELLS
Método:
Western Blot - electrotransferencia
Objetivo:
Determinar si la depleción de folato
induce algún cambio en el perfil de
metilación de las histonas en las
células de la próstata.

31. Conclusión
El agotamiento leve de folato induce
una hipermetilación histonal global.

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