Análisis del articulo biología molecular

1. SARA URREGO FANKUGEN

2. introduction
CANCER: Cancer can
start any place in
the body. It starts
when cells grow out
of control and crowd
out normal cells.
This makes it hard
for the body to work
the way it should.
NANOPARTICLES:Is
a microscopic
particle with at
least one dimension
less than 100 nm.
TNFα:Transmembrane
TNFα, a crucial
signaling cytokine,
holds anticell
proliferative
potential.

3. 1. Monocytes were
differentiated into
macrophages.
2. Induction of TNFα on the
macrophage membrane.
3. The LPS-induced
macrophage membranes were
isolated by hypotonic
lysis buffer, and the
homogenized suspension
was centrifuged to remove
cell debris.
4. Synthesis of chitosan
nanoparticles.
5. chitosan nanoparticles +
macrophage membranes with
TNFα = CELL DEATH.

4. OBJECTIVE
Studying the transmembrane TNFα-Expressed Macrophage
Membrane-Coated Chitosan Nanoparticles as Cancer
Therapeutics.

5. MATERIALES Y MÉTODOS
Lorem 3Lorem 1 Lorem 2 ¿PARA QUE?PCR FUNDAMENTO
REACCIÓN EN CADENA
POLIMERASA
Técnica que permite
amplificar
selectivamente un
segmento específico de
DNA, hasta obtener una
cantidad suficiente para
su posterior
manipulación.
Extensión del cebador:
La DNA polimerasa
realiza la extensión del
primer utilizando la
cadena complementaria
como molde.
Utilizando dos cebadores
que son complementarios
a los extremos 3’ del
fragmento de DNA de
doble cadena que se
quiere amplificar.
Para realizar
estudios genéticos
en cualquier campo
de la ciencia

6. SDS
PAGE
FUNDAMENTO
¿PARA
QUE?
Electroforesis de proteínas.
Migración de partículas o solutos
cargados en un medio líquido, bajo la
influencia de un campo eléctrico.
Es el método de electroforesis empleado
con mayor profusión para analizar
proteinas.

7. ¿PARA QUE?
Este método ha
sido muy utilizado
para medir
supervivencia y
proliferación
celular..
MTT CITOTOXICIDAD
se usa para determinar
la viabilidad celular,
dada por el número de
células presentes en el
cultivo.
FUNDAMENTO
El MTT, es captado por
las células y reducido
por la enzima succínico
deshidrogenasa
mitocondrial a su forma
insoluble formazan. El
producto de la reacción,
(formazan) queda
retenido en las células
y puede ser liberado por
solubilización.

8. FUNDAMENTO
El agente reticulante más
usado es tripolifosfato de
sodio (TPP). Cuando el
agente TPP se añade
continuamente a una
solución de quitosano bajo
agitación constante y a una
temperatura moderada, dos
componentes con cargas
opuestas se combinarán para
formar nanopartículas.
SINTESIS DE
NANOPARTICULAS
Las nanopartículas
poliméricas a partir de
polímeros
biodegradables y
biocompatibles son
buenos candidatos como
portadores y
administradores de
fármacos
¿PARA QUE?
Se las utiliza en
medicamentos basados en
compuestos sintéticos
que contienen dichas
nanopartículas y son
dirigidas a curar el
cáncer o enfermedades
genéticas
GELACIÓN IÓNICA PARA FORMAR
QUITOSANO

9. RESULTADOS
En esta evaluación citométrica de
flujo de monocitos que se diferencian
en macrófagos, se puede observar un
aumento en la granularidad de las
células con una mayor concentración
de PMA (se usó para la diferenciacion
de monocitos a macrofagos), lo que
indica esencialmente una conversión
exitosa de monocitos en macrófagos
granulares.

10. En la imagen A podemos observar el
esquema de formación de TNFα
expresado en membrana tras la
adición de LPS (endotoxina que
induce la secreción de TNFα).
En la imagen B se puede observar el
análisis de western blot de membrana
de macrofagos indcida a
concentraciones de LPL usando
anticuerpo anti-TNFα.
La imagen c muestra una prueba de
PCR semicuantitativa utilizando
cebadores específicos de TNFα:
carril 1: sin tratar, carril 2: 100
ng / ml de LPS tratado. Carril 3y 4:
controles de β-actina para las
muestras.

11. En la imagen A podemos
observar el proceso de
extrusión de la membrana que
expresa TNFα , la cual luego
fue añadida a las
nanopartículas de quitosano.
En la imagen C muestra un SDS
PAGE que confirma el
revestimiento exitoso de la
membrana. Carril 1: lisado
celular no inducido, carril 2:
membrana celular inducida por
LPS, carril 3: nanopartículas
recubiertas con membrana de
macrófagos inducidos.

12. Este resultado muestra una
evaluación de la
hemocompatibilidad, la cual
demostró que el nano ensamblaje
diseñado no inducía hemólisis.
La imagen D muestra
transferencia Western de las
nanopartículas de quitosano
recubiertas con membrana.
Carril 1: lisado celular no
inducido, carril 2: membrana
celular inducida por LPS,
carril 3: nanopartículas
recubiertas con membrana de
macrófagos inducidos.

13. discusión
NAME
● The biocompatibility of the THP-1
membrane was examined. For this, the
expression of several interleukins that
play a role in inflammation and in
generation of immunogenic response were
assessed after treatment.
2
Bidkar, A. P
● The natural membrane-coated nanoparticles
could escape body’s defense machinery and
retain prolonged circulation time in the
body
3
Wu, M.
● Synthesis of soluble TNF by the
macrophages is known to be driven by the
interaction of LPS with TLR on the
macrophage surface as early as 4 h post
stimulation.25
1
Tobias, P. S.

14. conclusions
1. The TNFα expressed in the membrane of macrophages induced
with LPL is an excellent inducer of cell death.
2. Nanoparticles wrapped in macrophage membranes can trick
the immune system into not being attacked by it