El documento presenta el informe de laboratorio de una estudiante sobre el uso de medios selectivos y diferenciales para identificar bacterias. La estudiante realizó siembras en agar MacConkey, EMB, XLD, HE, SS, cetridime y BS inoculados con Klebsiella pneumoniae. Analizó el crecimiento bacteriano en cada medio y describió las características de las colonias como color, forma y reacción. El informe resume los objetivos y procedimientos realizados, y presenta consultas sobre el uso de diferentes medios en microbiología.

1. MICRIOBIOLOGIA GENERAL
INFOME DE LABORATORIO DE MEDIOS SELECTIVOS Y
DIFERENCIALES
MARIA ANTONIA CASTAÑO ROMERO
DOCENTE: OLGA LUCIA TOVAR
UNIVERISDAD CATOLICA DE MANIZALES
SEGUNDO SEMESTRES
2021

2. INFORME
 Objetivos generales de la práctica realizada:
- Identificar los componentes de cada uno de los medios de cultivo ensayados los
cuales permiten la selección y diferenciación de microorganismos.
- Interpretar las reacciones bioquímicas asociadas a los componentes de los medios
selectivos y diferenciales durante el crecimiento bacteriano.
- Reconocer las características metabólicas (carácter fenotípico clásico) que permiten
una identificación microbiológica preliminar.
Fecha: lunes De septiembre
 El día lunes 20 de septiembre de 2021, se realizaron 7 siembras por agotamiento,
en el que usaron diferentes tipos de agar, en el que encontrábamos agar
Macconkey, HE, EMB, XLD, SS, cetridime, y BS. Para todos estos medio se
realizó el mismo proceso, con el mechero prendido esterilizamos nuestra asa
bacteriológica en argolla y de nuestra caja de Petri que contenía microorganismo,
hicimos la toma de un poco, en mi caso mi microorganismo era Klebsiella
pneumoniae que dentro de sus característica esta que compuesto por bacterias
Gram negativas de la familia Enterobacteriaceae, por medio de asa tomamos un
poco de esta y procedemos a hacer la siembra por agotamiento en todos los agares.
 Luciendo así las siembras es necesario tener bastante cuidado, pues al realizar esta
siembra por agotamiento el 1 cuadrante no debe de tocar el 4, es importante
recordar que la finalidad de esto es reducir el número de microorganismos de la
suspensión inicial, con el objeto de sembrar después cantidades conocidas de las
diluciones en placas de Petri.

3.  El día lunes 20 de septiembre así lucían nuestros agares previos a la siembra,
como se puede observar están completamente limpios.
 el microorganismo que me correspondió lucia de esta manera…
 luego de realizar todas la siembra en los respectivos agares se debió esperar 24 horas
para ver el resultado y poder observar si tuvo éxito, las cajas de Petri fueron puestas
verticalmente una sobre la otra para ser guardadas.

4.  Martes 21 de septiembre de 2021
El objetivo de este día era analizar cómo había sido el crecimiento en los distintos
medios y si habían tenido éxito, se encontraron algunos errores que afectaron un poco
el resultado, por ejemplo: juntar el primer cuadrante con el cuarto, quizá haber tomado
microorganismo de más, no hacer el primer cuadrante un poco vertical, para así
facilitar y respetar el espacio de cada cuadrante.
A continuación se mostraran los resultados.

5.  Agar Macconkey
Se realizó la siembra en el cultivo, la cual se inicia con la esterilización del asa
bacteriológica en argolla pasándola por el fuego y recogiendo un poco de
microrganismo (Klebsiella pneumoniae) y posteriormente se comienza a realizar la
siembra por agotamiento; después de realizar la siembra lo dejamos 24 horas
esperando al día siguiente un resultado.
Una de las características principales de este agar es que inhibe los microorganismos
Gram positivos.
Crecieron formaciones de colonias color rosa, lo que nos indica que los
microrganismos entéricos fermentadores de lactosa, produjeron acido como producto
final de su metabolismo, la zona rosa precipitada se da por las sales biliares y la
absorción del rojo neutro
Características principales:
 Colonias separadas
 Coloración rosa tirando a purpura
 Colonia mucoide

6.  Agar XLD (Xilosa- lisina – desoxicolato de sodio)
Se realizó la siembra en el cultivo, la cual se inicia con la esterilización del
asa bacteriológica en argolla pasándola por el fuego y recogiendo un poco de
microrganismo (Klebsiella pneumoniae) y posteriormente se comienza a
realizar la siembra por agotamiento; después de realizar la siembra lo dejamos
24 horas esperando al día siguiente un resultado.
Las características principales de este agar es que es un medio selectivo y
diferencial, e inhibe los microorganismos Gram positivos
Este tomo una coloración amarillo (viraje amarillo de indicador de pH) lo que
significa que la degradación de ácido de xilosa, lactosa y sacarosa. Su
fermentación fue rápida y por eso la coloración del medio cambio de ser rojo
a amarillo, se observa un gran crecimiento del microorganismo.
Características principales:
 Coloración amarilla
 Colonias cremosas
 Colonias aisladas.

7.  Agar EMB (agar eosina- azul de metileno).
Se realizó la siembra en el cultivo, la cual se inicia con la esterilización del
asa bacteriológica en argolla pasándola por el fuego y recogiendo un poco de
microrganismo (Klebsiella pneumoniae) y posteriormente se comienza a
realizar la siembra por agotamiento; después de realizar la siembra lo dejamos
24 horas esperando al día siguiente un resultado.
Las características principales de este agar son que gracias a los colorantes
eosina y azul de metileno e permite diferenciar los microorganismos entéricos
fermentadores y microorganismos entéricos no fermentadores.
La coloración de este medio paso a tener el color del medio (vino tino), lo que
significa que no fermento lactosa- sacarosa, esta característica es normalmente
dada por las bacterias entéricas que no fermentan lactosa y por eso crecen con
colonias incoloras y pasan a tomar el color del agar.
Características principales:
 Coloración vino tinto
 Colonias aisladas
 Colonias cremosas

8.  Agar HE ( agar hektoen enteric):
Se realizó la siembra en el cultivo el día 20 de septiembre, la cual se inicia
con la esterilización del asa bacteriológica en argolla pasándola por el
fuego y recogiendo un poco de microrganismo (Klebsiella pneumoniae) y
posteriormente se comienza a realizar la siembra por agotamiento; después
de realizar la siembra lo dejamos 24 horas esperando al día siguiente un
resultado.
Las caractisticas principales de este agar es que es un medio de cultivo
selectivo para la identificación de bacterias intestinales patogénicas.
Medio de cultivo selectivo, su coloración se tornó en una color naranja
brillante, lo que significa que Klepsiella es una bacteria que fermentadora
rápida de lactosa.
Características principales:
 Coloración amarilla
 Colonias aisladas
 Colonias cremosas

9.  Agar S.S ( Agar shigella- salmonella)
Se realizó la siembra en el cultivo el día 20 de septiembre, la cual se inicia
con la esterilización del asa bacteriológica en argolla pasándola por el
fuego y recogiendo un poco de microrganismo (Klebsiella pneumoniae) y
posteriormente se comienza a realizar la siembra por agotamiento; después
de realizar la siembra lo dejamos 24 horas esperando al día siguiente un
resultado.
Las principales características de este agar es que es un medio de cultivo
selectivo y diferencial, esta selectividad inhibe el desarrollo de las
bacterias Gram positivas.
Es positivo para la fermentación de lactosa, los pocos organismos
fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio
haciendo virar rojo el indicador de pH, obteniéndose colonias rosadas
como en este caso, pero no un fondo rojizo como su fundamento lo dice.
Características principales:
 Coloración rosa
 E logro el aislamiento de algunas colonias
 Colonias cremosas

10.  Agar BS (bismuto sulfito):
Se realizó la siembra en el cultivo el día 20 de septiembre, la cual se inicia con
la esterilización del asa bacteriológica en argolla pasándola por el fuego y
recogiendo un poco de microrganismo (Klebsiella pneumoniae) y
posteriormente se comienza a realizar la siembra por agotamiento; después de
realizar la siembra lo dejamos 24 horas esperando al día siguiente un
resultado.
Las características principales de este agar son que es un medio utilizado para
el aislamiento y diferenciación se Shigella.
Una de sus colonias se evidencia convexa y la textura de las colonias es
cremosas, colonias aisladas.
La reacción del sulfato ferroso debió ser un indicador de la producción de
sulfuro de hidrogeno que es causada por las colonias de Salmonella H2S
positivas, las cuales reaccionan a provocar una coloración marrón o negro.
Los resultados de este agar fueron una coloración marrón, donde se logró el
aislamiento de algunas colonias.

11.  Agar cetridime:
Fundamento:
Es un medio de cultivo sólido selectivo, diseñado para el aislamiento
de Pseudomonas aeruginosa. Está basado en poner en evidencia la
producción de pigmentos característicos de esta especie.
El agar cetrimida se fundamenta en la capacidad que tiene el medio para
favorecer el crecimiento de P. aeruginosa, estimular la producción de sus
pigmentos y a su vez inhibir el crecimiento de otros microorganismos.
Estas propiedades se deben a la función que cumplen cada uno de sus
componentes. La peptona de gelatina presente sirve como fuente de nitrógeno,
vitaminas y minerales. El glicerol o glicerina funciona como fuente de
carbono.
Por su parte, la cetrimida (bromuro de cetil trimetil amonio) es la sustancia
que inhibe el crecimiento de otras bacterias diferentes a P. aeruginosa,
incluyendo otras especies pertenecientes al mismo género.
La inhibición se produce porque la cetramida actúa como un detergente
catiónico, logrando desestabilizar la membrana plasmática de la mayoría de
las bacterias, a excepción de P. aeruginosa y algunas otras que logran
sobrevivir.

12. Para el procedimiento de esta siembra se comenzó con la siembra en el
cultivo el día 20 de septiembre, la cual se inicia con la esterilización del
asa bacteriológica en argolla pasándola por el fuego y recogiendo un poco
de microrganismo (Klebsiella pneumoniae) y posteriormente se comienza
a realizar la siembra por agotamiento; después de realizar la siembra lo
dejamos 24 horas esperando al día siguiente un resultado.
Dentro de las características principales encontré que se logró el
aislamiento de colonias, también la contextura fueron colonias cremosas,
Klebsiella puede crecer en el medio de cultivo generando un color
amarillo suave en este, en este caso el color fue blanquecino, el medio de
cultivo se puede exponer a luz ultra violeta y no producir fluorescencia
ya que no corresponde con el pigmento fluorescencia, estudios demuestran
que cuando son sometidas a luz UV pueden perder fluorescencia, esto
puede ser debido a que los cultivos fueron dejados a temperaturas
ambiente en un periodo de corto tiempo y la fluorescencia aparece cuando
los cultivos son incubados.

13.  Consultas:
Qué uso tienen en microbiología los siguientes medios selectivos y/o
diferenciales:
Agar Bilis-Esculina:
La Agar Bilis Esculina se usa preferentemente para diferenciar
entre Enterococcus y Streptococcus. Los miembros del
género Enterococcus son capaces de crecer en presencia de un 40% de bilis
(oxgall) e hidrolizar la esculina para formar glucosa y esculetina. La
esculetina se combina con iones de hierro formando finalmente un complejo
de color negro.
En algunos casos, ciertas bacterias son capaces de hidrolizar la esculina. Una
placa que contenga esculina aparecerá fluorescente bajo luz ultravioleta.
Algunas bacterias pueden hidrolizarlo, produciendo colonias oscuras bajo luz
ultravioleta, al contrario que las claras.
Agar chocolate con Telurito de Potasio
Se utiliza como base nutritiva para la preparación de los medios de cultivo:
Thayer-Martin Medio (original y modificado) y Chocolate Agar, permitiendo
así la recuperación de microorganismos exigentes en sus requerimientos
culturales, como por ejemplo Neisseria gonorrhoeae y Neisseria meningitidis.
Agar Baird Parker
Método microbiológico. Se utilizan diversos medios para el aislamiento de
Staphylococcus aureus, que desempeña un papel muy importante en los casos
de intoxicación por alimentos e infecciones clínicas humanas.

14. MEDIO DE
CULTIVO
CARBOHIDRATOS
AMINOACIDOS
FUENTE DE
AZUFRE
INHIBRIDOR INDICADOR DE
PH
REACCIONES
BIOQUIMICAS
(Fermentación,
desanimación,
descarboxilación, etc.)
USO
MacConkey Carbohidrato (Lactosa)
Aminoácidos (Peptona)
No presente Cristal Violeta y
sales biliares
Rojo neutro
(7.2)
Fermentador Se utiliza para el aislamiento
selectivo y la identificación de
Enterobacteriaceae de las heces,
la orina, aguas residuales y
alimentos. También es medio
selectivo y diferencial para el
aislamiento de bacterias Gram
negativas entéricas.
EMB Carbohidratos (Lactosa-
Sacarosa)
No presente Eosina y azul de
metileno
Rojo neutro
(7.2)
Fermentador Es un medio de cultivo solido
selectivo y diferencial utilizado
para el aislamiento de bacilos
Gram negativos, principalmente
de la familia Enterobacteriaceae,
y otros bacilos Gram negativos
no exigentes.
XLD Carbohidratos (Xilosa-
Lactosa y Sacarosa)
Presente Desoxilicato Rojo fenol Fermentador Es un medio de cultivo selectivo
utilizado en el aislamiento de
especies de Salmonella y
Shigella a partir de muestras
clínicas y de alimentos.
HE Carbohidratos (Salicina-
Lactosa y Sacarosa)
No presenta Sales biliares Azul Fermentador Es un medio de cultivo selectivo
para la identificación de
bacterias intestinales patógenas.
SS Carbohidratos (Lactosa)
Aminoácidos (Proteasa
peptona)
No presenta Sales biliares,
verde brillante y
Citratos
Rojo neutro Fermentador Es un medio selectivo y de
diferenciación para el
aislamiento de bacilos entéricos
patógenos, en especial los
pertenecientes al género
Salmonella, a partir de nuestras
clínicas.
BS Carbohidratos
(Dextrosa)
No presenta Verde brillante y
bismuto sulfito
Verde
(7.5)
Fermentador Es un medio utilizado para el
aislamiento y diferenciación de
Salmonella typhi.
AGAR
MANITOL
SALADO
Carbohidratos (Manitol) No presenta Cloruro de sodio Rojo fenol Fermentador Es un medio selectivo usado
para el aislamiento de
estafilococos patógenos,
especialmente Staphylococcus
aureus, considerado un patógeno
bacteriano serio desde que
desarrolló resistencia a la
penicilina en 1950.

15.  Continuación practica número 5 y 6, observación en el microscopio de las
tinciones realizadas.
ANALISIS DE TINCIONES EN EL MICROSCOPIO
 TINCION-NEELSEN:
Lente 4k:
Para observar la imagen que se proyecta, comencé por organizar y ajustar
el microscopio para conseguir ver los resultados obtenidos por medio de
esta tinción
AGAR
CETRIMIDE
Aminoácidos (Peptona
de gelatina)
No presenta Cetrimide Verde
(7.2)
Fermentador Es un medio selectivo para el
aislamiento y recuento de
Pseudomonas aeruginosa en
productos biológicos,
farmacéuticos y cosméticos.

16. Lente 10k:
Gracias a que en el lente 4 k se logró un enfoque ideal, en este lente se
facilitó mucho más, pues solo era ajustar un poco para lograr ver el
resultado que se pretendía.
Lente 40k:
El objetivo se cambió y ahora la imagen es un poco más específica.

17. Lente 100 k:
Para poder hacer el cambio a este lente como primer paso se posó una gota
de aceite de inmersión sobre nuestra placa, esto es necesario para poder
lograr ver la imagen, o si no, no se lograría el objetivo.
Resultados:
El color azul es producto de los microorganismos que son decolorados por el
ácido y por eso su tonalidad es azul, si este hubiese tomado una tonalidad
rojiza – rosa seria debido a que la tinción es acido resistente ya que conservan
el colorante primario.
TINCION ENDOSPORAS
Lente 4 k:

18. Lente 10 k:
Lente 40 k:
Lente 100 k:

19. Para poder hacer el cambio a este lente como primer paso se posó una gota de
aceite de inmersión sobre nuestra placa, esto es necesario para poder lograr
ver la imagen, o si no, no se lograría el objetivo.
Resultados:
 Podemos hacer un análisis más profundo a medida que los objetivos
cambian.
 No se logró el objetivo de esta tinción endosporas, debido a que en este
tipo de tinción las bacterias tienden a teñir de color verde y las restantes
de color rosado- morado, lo que aquí se observan azules.
Bibliografía.
https://www.britanialab.com/productos/producto/21/20/_/173/712/soluci
_n_de_telurito_de_potasio#:~:text=Se%20utiliza%20como%20base%20
nutritiva,Neisseria%20gonorrhoeae%20y%20Neisseria%20meningitidis.
Baird-Parker, A.C. 1962. An improved diagnostic and selective medium
for isolating coagulase-positive staphylococci... J. Appl. Bacteriol. 25: 12-
19.