Este documento describe diversas técnicas para estudiar material orgánico al microscopio, incluyendo técnicas histológicas, histoquímicas, inmunohistoquímicas, PCR, y técnicas de microscopía electrónica. Explica los pasos para la obtención del material, fijación, inclusión en parafina, obtención de cortes, coloración e inmunomarcación, y el montaje final para mejorar la observación de las muestras.

1. Técnicas
Histológicas
Clase I

2. Existen diversas técnicas para estudiar un material orgánico al microscopio.
Técnica Histólogica para
Microscopía óptica Técnica Histoquímica y
citoquímica
(inmunohistoquímica)
Reacción de cadena de la
polimerasa (PCR)
Técnica de estudio para
microscopia electrónica
- Técnica Histológica Corriente
(Parafina-Hematoxilina-Eosina)
- Coloraciones especiales

3. 2. Fijación:
Interrupcion del desarrollo de
los procesos organiscos.
Fijadores quimicos simples:
• Formol al 10%
• Glutaraldehido
• Tetroxido de Osmio
• Alcohol absoluto 96%,
80% y Metilico
Fijadores quimicos Compuestos:
• Liquido de Flemming
• Liquido de Zenker
• Liquido de Bouin
1. Obtencion del material
Se puede realizar por:
- Biopsia
- Necropsia
- Frotis o extendidos
Fijadores Fisicos:
• Desecación
• Calor seco y húmedo
• Congelación
Reglas para la obtención del material:
- Tomar el tejido del lugar correcto.
- Cortar la pieza en trozo pequeños
- Realizar con rapidez para evitar
destrucción del tejido
Reglas para la Fijación:
- Material debe ser cortado en trozos
pequeños
- Liquido fijador debe ser vertido primero
en el frasco y luego en trozos del tejido.
- La duración del tiempo de fijación varia.

4. 3. Inclusión
Consiste en endurecer las piezas histológicas con PARAFINA para
luego cortarlas.
Pasos para la fijación:
- Deshidratación
- Aclaración
- Impregnación en parafina y confección del taco o bloque
4. Obtención de los cortes
Para los cortes se utilizan los microtomos.
Microtomo de cuchilla fina o tipo Minot Cortes varian de 5 a 8 um.
Los cortes de tiran del microtomo con un fincel de pelo fino y se extiende en agua
en una capsula de Petri.
En el agua se introduce el portaobjeto desgrasados
Con ayuda de una aguja histológica se empuja los cortes hasta colocarlos en el
portaobjeto.

5. 6. Montaje final
Para mejorar la observación, facilitar el manejo y aumentar la duración de los preparados.
Se debe eliminar el agua que queda luego de la coloración.
Pasos del montaje final:
1. Deshidratación: alcoholes en graduación creciente 70°, 80°, 96°, 100°.
2. Homogenización: con benzol o xilol.
3. Colocación del cubreobjeto: lamina de vidrio fina para proteger la muestra. Para adherir se
usa bálsamo de Canadá
5. Coloración
Es el proceso mediante el cual un cuerpo toma color
bajo acción de un colorante.
Se utiliza 2 colorantes: Hematoxilina y Eosina
Procedimiento para colorear una muestra:
1. Desparafinización e hidratación del corte: con
benzol o xilol y alcoholes en orden decreciente
100°,96°,80°,70°.
2. Coloración: primero con hematoxilina y luego
con eosina.
Hematoxilina Eosina
- Colorante violeta
básico nuclear, cargado
positivamente.
- Se deposita en grupos
fosfatos ADN y ARN con
carga negativa.
- Es de origen vegetal.
Es un colorante acido
citoplasmático.
- Soluble en agua.
- Es de origen artificial
(eosinato de potasio).

6. Inmunomarcación
Utilliza anticuerpos, para detectar antigenos.
Se realiza sobre cortes de tejidos fijados y
montados sobre un portaobjeto.
Inmunohistoquímica
Utiliza anticuerpos monoclonales, los
cuales le otorgan precisión y
especificidad.
M.E. Transmisión (MET)
- Utilliza haz de electrones que produce un
muy alto poder de resolución.
- Tambien campo electromagneticos que
producen la amplificacion de la imagen.
M.E. de Barrido
Utiliza haz de electrones que se
desplazan en una trayectoria libre de
colision e interactuan con lla muestra.