Este documento describe los pasos básicos de la técnica histológica, incluyendo la toma de muestras biológicas, la fijación, deshidratación, inclusión en parafina, corte en secciones delgadas, tinción y montaje para su observación microscópica. El objetivo es preservar la morfología celular y tisular para su análisis.

1. Pasos de la Técnica Histológica
Básica

2. Toma de Material
Los métodos más utilizados son:
• Biopsias
• Necropsias
• Improntas
• Frotis de células superficiales
• Frotis de células sanguíneas
• Animales de experimentación
• Aplastados celulares

3. Fijación
• La fijación debe realizarse lo más rápido posible
luego de tomada la muestra, para evitar los
procesos de autolisis. Además se debe escoger el
método más adecuado al objetivo del estudio a
realizar.
• Se pueden clasificar en los siguientes métodos:
 Por inmersión: pequeños trozos del tejido son
sumergidos en el liquido fijador.
 Por perfusión: el líquido fijador se aplica por inyección
vascular.
 Por vapores: consiste en utilizar líquidos fijadores que
emitan vapores, se debe realizar bajo campana
extractora de gases.

4. Deshidratación
 Luego de que la muestra ha sido fijada se debe
eliminar el fijador y deshidratar.
 Para esto se utiliza una serie gradual de soluciones
acuosas con una concentración de menor a mayor
del agente deshidratante, como por ejemplo alcohol
etílico.
 La deshidratación gradual se hace para evitar la
deformación de la morfología del tejido, debido a la
rápida salida del agua.

5. Aclaramiento
 Posterior a la deshidratación el tejido se debe
sumergir en un líquido que sea miscible tanto en el
medio de inclusión como en el medio de
deshidratación.
 El líquido comúnmente utilizado es el xilol.
 Esta etapa se llama aclaramiento debido a que el
tejido se vuelve transparente.

6. Inclusión
 Para poder obtener cortes delgados que puedan ser
observados al microscopio óptico, los tejido deben
ser incluidos en una sustancia de consistencia firme,
la cual puede ser hidrófila o hidrófoba.
 Un medio hidrófobo que se puede utilizar es la
parafina o el paraplast. Este último es una parafina
altamente purificada a la cual se le han agregado
cantidades variables de polímeros especiales, lo
cual le dará distinta dureza y plasticidad al taco de
inclusión.

7. Corte
 El taco obtenido en la inclusión se debe cortar en
secciones lo suficientemente delgadas que permitan
el paso de la luz, para esto se utiliza un aparato
llamado micrótomo.
 Para esto el bloque se debe tallar, para eliminar el
exceso de parafina, formando una pirámide
truncada.

8. Corte
 Los cortes que se van obteniendo se deben ir
estirando, esto se puede realizar en un baño
termoregulado (40-45 ºC). El estiramiento se
basa en la dilatación de la parafina producto del
calor.
 Luego estos cortes se van recogiendo con un
portaobjetos.

9. Tinción
 Primero la parafina debe ser eliminada
sumergiendo los portaobjetos con los cortes en un
solvente orgánico que puede ser xilol.
 Luego los cortes deben ser hidratados pasando por
una serie de graduaciones decreciente de alcohol
etílico, hasta llegar a una solución que sea 100%
agua.
 Una vez rehidratado el tejido puede ser teñido. Los
colorantes más utilizados son hematoxilina y eosina.

10. Montaje
 Luego de teñir el tejido este debe ser deshidratado
nuevamente, para esto hay que pasarlo por una
serie de alcoholes en grado ascendente.
 Posteriormente hay que pasar el tejido por xilol, de
modo de hacerlo miscible con el medio de montaje.
 Finalmente se le agrega el medio de montaje y se le
coloca el cubreobjetos, teniendo cuidado en no dejar
burbujas.

11. Observación al Microscopio

12. Observación al Microscopio