2. Conjunto de procedimientos y reglas a que son
sometidos los tejidos para poder ser estudiados
microscópicamente.
3. Métodos de Examen Histológico
Inmediato (En vivo)
Sin reactivos Modificadores ( al estado fresco).
Coloración Vital (Intravital y Supravital)
Uso:
Animales pequeños transparentes, membranas
transparentes, órganos opacos
4. Mediato (post morten)
Uso de fijadores que detienen los
procesos de putrefacción y conservan la
estructura histológica que presentaban en
vida.
5. Líquidos Indiferentes
Constituyen un medio adecuado para conservar la vida de
ciertos elementos de los tejidos, durante un periodo
determinado de tiempo.
8. Procedimientos para la Obtención
de la Muestra
Cadáveres
Organismos Vivos (Biopsias)
Animales Pequeños:
Sangría en Blanco
Traumatismo Craneal
9. Fijación
Método histológico de preservación destinado a
obtener preparados duraderos que conservan la
estructura morfológica y química que presentan
las células y tejidos al estado vivo y que permite
realizar posteriormente el resto de
procedimientos histológicos.
10. Características de un buen fijado
Actuar con Rapidez
Alto poder de Penetración para evitar la autolisis.
Conservar detalles estructurales que poseía en vivo
Permitir el uso de resto de Técnicas Histológicas
No extraer Sustancia
No crear Artificios
No retraer excesivamente los tejidos
11. Teorías de la Fijación
Coagulando las proteínas sin combinarse con
ellos (Alcohol, Acido Pícrico y Yodo)
Formando combinaciones químicas con las
sustancias orgánicas forma nuevas sustancias
estables
13. Fijadores Químicos
Simples (1 sola sustancia)
Formol al 10% (fijador universal)
Alcohol Etílico Absoluto al 95% (usado
en estudios histoquímicos)
Alcohol Metílico (usados para frotis)
Acido Osmico ( M.E.)
Bicloruro de Mercurio
Bicromato de Potasio al 3 a 5%
14. Fijadores Químicos
Compuestos:
Líquido de Flemming (Cromo-
Osmio.Ac. Acético)
Líquido de Zenker (Bicromato
sublimado- Ac. Acético).
Líquido de Helly( Zenker-
formol).
Líquido de Bouin (Formol-Ac.
Acético).
Líquido de Dubosca- Brasil
15. Fijadores Físicos
Desecación (extendidos o frotis).
Calor seco (Bacteriología en frotis
desecado)
Calor húmedo
Frío
Congelación y Desecación Estudios
histoquímicos).
16. Elección de un Buen Fijador
Estudios Citológicos:
Acido Osmico, Liquido de Flemming (Fijación
Nuclear), Flemming sin Acido Acético, Zenker
-Formol (Para fijar citoplasma)
Estudios Histoquímicos:
Alcohol absoluto a 96º, Agentes Físicos, Calor, Frió y
Desecación, Incineración (Cenizas)
Estudios Generales o Topográficos:
Líquido de Zenker, de Helly , formol al 10%.
17. Relación entre el Tamaño de la Muestra y el
Volumen del Fijador
Tamaño de la Muestra: conviene
fijar piezas pequeñas que no excedan
de 0,5-1 cm de espesor, al fijar con
acido osmico el espesor debe ser de
1-3mm.
18. Relación entre el Tamaño de la
Muestra y el Volumen del Fijador
Tiempo de Fijación: varia en relación al poder de penetración
del fijador, del volumen de la pieza y de la temperatura de
fijación, de 6-24 horas para el Flemming, de 12-24 horas para
el Zenker y el Helly, Duboscq –Brasil y el formol al 10% de 3-4
horas.
19. Relación entre el Tamaño de la
Muestra y el Volumen del Fijador
Volumen de Fijador: la cantidad de fijador a usar debe
ser 40 a 50 veces mayor que el de la pieza o muestra a
fijar. Estas no deben apoyarse sobre el fondo del frasco
que la contiene.
20. Relación entre el Tamaño de la
Muestra y el Volumen del Fijador
Lavado y Conservación de la Muestra: cumplido el tiempo de
fijación se procede al lavado de las mismas para eliminar los
restos del fijador. Las piezas fijadas con líquidos a base de
acido osmico y de bicarbonato(Flemming,Zenker y Helly)
deberán ser avadas con agua corriente, así como también las
fijadas con formol al 10%; en cambio las fijadas con Bouin,
Duboscq-Brasil, no deben ser sometidas a lavado alguno.
23. Proceso:
Alcoholes 30º, 50º, 70º, 80º, 90º y dos baños 100º
Pureza del alcohol (xilol no blanquecino).
Porque se realiza la Deshidratación ( La inclusión se
realiza con sustancias no miscibles con el agua que
traen los tejidos).
24. Aclaración
Proceso mediante el cual se sumerge la muestra
deshidratada en dos baños de xilol, benzol o toluol
(impregnación por un disolvente de parafina)
25. Inclusión: La pieza deshidratada
y aclarada, se sumerge en 2
baños de parafina (1 a 3 horas)
en una estufa a no más de
56°C.
31. Microtomos
Tubo Cilíndrico Hueco, con Pinza en su
Interior
Microtomo de Deslizamiento
Microtomo de Minot
Microtomo de Congelación
Ultramicrotomo
38. Desparafinación antes de la Coloración
Proceso: Pasar el corte por dos baños de xilol.
Porque se realiza
Extensión y Adhesión del corte al Porta Objeto
Hidratación del corte
Alcoholes de 100º, 90º, 80º, 70º
Porque se realiza
Deshidratación del corte durante el proceso de
coloración
Alcoholes, 70º, 80º, 90º, , 100º
Porque se realiza