Introducción a técnicas histológicas, medicina.

1. También llamada anatomía
microscópica
Finn Geneser, 2005
“Los tejidos se
forman por la
agrupación de
células para
desarrollar
colectivamente una
función especial”
Más adelante menciona
la matriz extracelular
como importante para el
tejido conectivo.
Gartner y Hiatt,
1997
“Las células
similares o
relacionadas que
funcionan de una
manera particular
o tienen una
finalidad en
común, se
agrupan para
formar tejidos”
Definición Actual
Por definición un tejido es
una agrupación de células
diferenciadas en forma y
función, que interaccionan
entre sí para cumplir una
función o más. Todas las
células de un tejido en
particular se definen
también por la composición
química de la matriz
extracelular.
Ross, 1994
“Cuando hablamos de un
conjunto organizado de
células que funcionan en
forma colectiva, estamos
aludiendo, por definición a un
tejido”.
Más adelante menciona las uniones
intercelulares especializadas (nexo),
que facilitan la colaboración entre
células.

2. TEJIDOS FUNDAMENTALES
Hablar de tejidos es útil a los
fines descriptivos, facilita el
estudio de la estructura
corporal.
Pero debemos estar atentos a
sus limitaciones
• No todos los tejidos forman
órganos.
• Un tejido no es un simple
conjunto de células.
• La clasificación de tejido es
conflictiva ya que no se
encuentran en forma pura ni
aislada: se yuxtaponen, se
entremezclan y se combinan
para formar órganos. Son
interdependientes.

4. METODOLOGÍA DE ESTUDIO EN LA
HISTOLOGÍA
TECNICAS HISTOLOGICAS:
Es el conjunto de operaciones que se somete un
material organizado para hacer posible su estudio por
medio del microscopio, posibilitando la observación de
las estructuras no visibles al ojo humano.

5. 1-Examen inmediato o in vivo:
a) En fresco: animales unicelulares y células
libres.
b) Coloración vital: usando soluciones de
colorantes no tóxicos (colorantes vitales),
coloración intravital o in vivo, y la coloración
supravital, donde pueden colorearse células
libres o porciones de órganos.
2- Examen mediato o post-mortem:
Requiere de la muerte celular y supone seguir una serie
de pasos, la Técnica histológica
TECNICAS HISTOLOGICAS:

6. 1-Examen inmediato o in vivo:
Estado Fresco:
Estado Fresco:
Plasma Sanguíneo
Plasma Sanguíneo
Albúmina
Albúmina
Humor Acuoso o Líquido Amniótico
Humor Acuoso o Líquido Amniótico
Soluciones Fisiológicos o
Soluciones Fisiológicos o Ringer
Ringer
Coloraciones Vitales:
Colorantes muy diluídos que no dañan el tejido
Carmín, Azul de Metileno o Rojo Neutro
Intravital
Supravital

7. Toma de muestra:
Debe ser rápida.
Hay que tener en cuenta las
características del órgano (muy
hidratado, contráctil, colapsa, etc)
• Biopsia.
• Autopsia.
2- Examen mediato o post-mortem:

8. Obtención del material:
Pueden provenir de:
• biopsias quirúrgicas
• material obtenido de necropsias
• utilizando animales de laboratorio
• estudios experimentales en animales
• material de cultivos de tejidos
• frotis o extendidos
2- Examen mediato o post-mortem:

9. 1 Fijación 2 Lavado y deshidratación
3 Aclarado
4 Inclusión
Impregnación
Orientación
Solidificación
5 Tallado 6 Corte
7 Montaje
8 Desparafinización
10 Coloración
9 Hidratación
11 Deshidratación
12 Montaje final
13 Observación
2- Examen mediato o post-mortem:
8 Desparafinización
9 Hidratación 10 Coloración

10. 1 Fijación:
Es el proceso Físico (Histoquímico) que logra una
situación estable de los constituyentes tisulares,
interrumpiendo las reacciones enzimáticas de
autólisis.
Cualidades de un buen fijador:
1) Actuar con rapidez y detener los procesos autolíticos.
2) Buen poder de penetración.
3) Conservar lo mas fielmente la estructura del tejido.
4) No interferir y facilitar los procesos posteriores.
5) Endurecer el tejido y darle mayor consistencia.
6) Insolubilizar los componentes de los tejidos.
7) No producir estructuras artificiales.

11. Clasificación de los fijadores:
1- Fijadores químicos: Desnaturalizan y estabilizan proteínas Son los
más empleados y pueden ser:
a) Simples: constituido por una sola sustancia:
Formol al 10%: Es muy usado.
Aldehído glutárico o glutaraldehído
Acetona en frío.
b) Compuestos o mezclas fijadoras: constituidas por varias
sustancias.
Liquido de Flemming: (mezcla ácido pícrico-osmo-ácido acético
cromo-osmio-acética) para estudios citológicos.
Liquido de Bouin: (mezcla ácido pícrico-formol-ácido acético). El
mejor fijador para los trabajos corrientes. Muy penetrante.
2- Fijadores físicos:
Desecación (microorganismos)
Calor (Coagulan proteínas)
Frío
Congelación y desecación

12. 2 Lavado y deshidratación
3 Aclaramiento Es el paso donde se pasa el tejido a
una solución miscible (se la llama líquido intermediario) :
:
xilol
xilol,
, toluol
toluol, alcohol butílico o benceno).
, alcohol butílico o benceno).

13. 4 Inclusión
• Es impregnar la pieza con una sustancia que le confiere dureza y
permite obtener cortes uniformes y delgados.
• En la técnica corriente, se utiliza la parafina; que es insoluble en agua
(deshidratación previa, paso 2).
• Puede ser un medio acuoso (gelatina o agar-agar) o anhidro (parafina,
celoidina, paraplast o resinas sintéticas). Este medio disuelve el líquido
intermediario y penetra en el tejido (por ejemplo la parafina a 60°C). El objetivo de
esto es brindar posteriormente un soporte sólido que permita el corte del tejido
en delgadas capas.

14. 5 Tallado
En forma de pirámide truncada, con el objeto de que no ofrezca resistencia al ser
cortado en el micrótomo.
6 Corte
Para obtener cortes finos se utilizan aparatos denominados micrótomos, hay
varios tipos.

15. 7 Montaje
• Se coloca sobre una platina de agua caliente
• Se levantan los cortes con un portaobjetos
• Se extienden sobre una película de albúmina o gelatina
• Los porta-objetos se llevan a la estufa
c: Secado
c: Secado

16. 8, 9 Desparafinización e hidratación
• Dado que la parafina ha cumplido ya su función de soporte
en el corte, es necesario sacarla. Dada su naturaleza
anhidra, no permitiría la acción de los colorantes
(generalmente acuosos o polares) en los tejidos.
• Para ello debe desparafinarse previamente por medio de un
tratamiento con xilol.
 Luego rehidratación mediante pasaje por concentraciones
decrecientes de alcohol.

17. Los colorantes se pueden clasificar como:
a) Ácidos: Tienen cargas negativas. Se unen a grupos catiónicos como los
grupos aminos de las protínas. Actúan a pH bajo. Eosina, azul de anilina,
fucsina ácida orange G. Son colorantes citoplasmáticos.
b) Básicos: Con muchas cargas positivas. Se unen a los grupos fosfato de los
ácidos nucleicos , grupos sulfato de los glucosaminoglicanos (Gags) y grupos
carboxilo de proteínas. Actúa a pH alto ya que los grupos se ionizan y se unen
al colorante. Hematoxilina, azul de metileno, azul de toluidina. Son colorantes
nucleares.
c) Neutros: Tiñen citoplasma y núcleo de diferente color.
10 COLORACION
Sustancias basófilas se tiñen con los colorantes básicos
Sustancias acidófilas se tiñen con los colorantes ácidos
Sustancias neutrófilas se tiñen con los colorantes neutros
Metacromacia: polimerización del colorante por cargas aniónicas cercanas y se ve
de otro color. Ejemplo: matriz cartilaginosa (grupos sulfatos), al ser coloreada con
con azul de toluidina se ve roja.
Ortocromacia: si la estructura se tiñe del mismo color del colorante

18. Hematoxilina-Eosina: Fundamento de la coloración
La Eosina es un colorante ácido (predomina densidad de carga negativa),
por lo cual se asocia y colorea a estructuras catiónicas del citoplasma y
matriz extracelular, tales como: filamentos citoplasmáticos; membranas
intracelulares; y fibras extracelulares (por sus aminoácidos básicos
ionizados).
La Hematoxilina se asocia y
colorea estructuras aniónicas
(que posean fosfatos,
sulfatos y/o carboxilos
ionizados):
•Heterocromatina y nucléolos
•RNA ribosomal
•Matriz extracelular (por los
sulfato de los GAG)
hematoxilina eosina
Hematoxilina
+
eosina

19. Las fases del montaje final son:
11-
Deshidratación: mediante la acción de alcoholes de gradación
creciente: 70°, 80°, 90° y 100°, sucesivamente.
Homogenización o aclaración: se emplea el benzol o xilol a los que se
le puede agregar ácido carbónico o fénico para aumentar su
eficacia, estos son muy ávidos de agua.
12
Colocación del cubreobjeto: con el objeto de proteger el preparado, se
la recubre con un cubreobjeto. Para adherir el cubreobjeto al
portaobjeto, se emplea una resina, el Bálsamo de Canadá.
11 Deshidratación
12 Montaje final

20. Coloración

21. PROBLEMAS DE INTERPRETACION
PROBLEMAS DE INTERPRETACION
al visualizar los cortes con el Microscopio
al visualizar los cortes con el Microscopio
A.- ARTEFACTOS de técnica
Cambios estructurales inducidos por las técnicas histológicas.
Algunos de los más comunes son:
Melladuras: defectos en la cuchilla de corte del tejido al
tomar la muestra o al cortar en el Micrótomo.
Encogimientos, Retracción.
Pliegues
Precipitados
Manejo poco cuidadoso
Degeneración post mortem
B.- CONCEPTUALES
Debidos a una interpretación inadecuada, a que las células pueden
presentar tamaños diferentes, a que se ven imágenes en 2D, etc