Analisis quimico, tecnica de cromatografía. cromatografia de: gases, líquidos, de absorción,partición, ionica,por afinidad y exclusión.

1. CROMATOGRAFÍA
CONTENIDO
❶Introducción
❷Cromatografía de gases
❸Cromatografía de líquidos
-HPLC
❹Cromatografía de absorción
Cromatografía de Partición
Cromatografía Iónica
Cromatografía por exclusión
Cromatografía por afinidad
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2. INTRODUCCIÓN
• La cromatografía es un método de análisis químico basado en la
separación por métodos de absorción de los componentes de
una mezcla .
• Fue descubierto en 1909, por el botánico M. Tswestt, que utilizo
los principios de la absorción selectiva para separar los
pigmentos fuertemente coloreados de las hojas de las plantas.
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3. INTRODUCCIÓN: Generalidades de la técnica
Consiste en poner en contacto dos fases mutuamente inmiscibles, que no reaccionen
químicamente, una de las cuales es móvil y la otra estacionaria. La fase estacionaria, esta
contenida en una probeta (colector), formando una columna. La fase móvil es la
disolución del material que se desea analizar.
A medida que la fase móvil pasa a través de la fase estacionaria, se va produciendo una
absorción selectiva:

5. CROMATOGRAFÍA DE GASES
• Se inyecta una pequeña cantidad de la muestra a separar en
una corriente de un gas inerte a alta temperatura; esta
corriente de gas, atraviesa una columna cromatografía ,
que separa los componentes de la mezcla. Los
componentes separados, emergerán de la columna a
intervalos discretos y pasarán a través de algún sistema de
detección adecuado.

6. CROMATOGRAFÍA LIQUIDA
• permite separar físicamente los componentes de una
solución por la adsorción selectiva de los constituyentes de
una mezcla.
• Los intercambiadores iónicos son matrices sólidas que
contienen sitios activos, con carga electrostática.
• la muestra queda retenida sobre el soporte sólido por
afinidad electrostática.
• Dependiendo de la relación carga/tamaño unos serán
retenidos con mayor fuerza sobre el soporte sólido que otros

7. La fase
estacionaria
puede ser
alúmina, sílice o
resinas de
intercambio
iónico

8. • el compuesto pasa por la columna cromatográfica a través de la
fase estacionaria, mediante el bombeo de líquido (fase móvil) a
alta presión a través de la columna.
• La muestra a analizar es introducida en pequeñas cantidades y
sus componentes se retrasan diferencialmente (depende de las
interacciones químicas o físicas con la fase estacionaria)
• El grado de retención de los componentes de la muestra
depende de la composición de la fase estacionaria y de la fase
móvil (mayoría de las casos es disolvente no polar)
• La utilización de presión, incrementa la velocidad lineal de los
compuestos dentro de la columna y reduce así su difusión,
mejorando la resolución de la cromatografía.
CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS A ALTA
RESOLUCIÓN [HPLC]

10. • Los detectores de uso mas
extendido:
• De Refracción
• De Ultravioleta y/o
sensible
• De conductividad Eléctrica
• Electroquímico

11. SE DIVIDEN EN:
• puede clasificarse de acuerdo al tipo de equilibrio
involucrado, mismo que es gobernado por el tipo de
fase estacionaria utilizada.
• (1) adsorción
• (2) partición
• (3) intercambio iónico
• (4) exclusión
• (5) afinidad

12. 1. CROMATOGRAFÍA DE
ADSORCIÓN
• La fase estacionaria es un sólido en el que los componentes
de la muestra son adsorbidos.
La fase móvil puede ser:
• un líquido (cromatografía líquido-sólido)
• un gas (cromatografía gas-sólido)

13. 2. CROMATOGRAFÍA DE
PARTICIÓN
• La fase estacionaria de la cromatografía de partición es un
líquido soportado en un sólido inerte.
la fase móvil puede ser:
• un líquido (cromatografía de partición líquido-líquido)
• un gas (cromatografía de partición gas-líquido, GLC).

14. 3. CROMATOGRAFÍA
IÓNICA
• Los proceso de intercambio iónico se basa en los equilibrios
entre los iones de la disolución y los iones del mismo signo
en la superficie de elevada masa molecular y esencialmente
insoluble
• Durante varias décadas se ha utilizado arcilla y zeolitas
• 30´s se fabrican las primeras resina sintéticas
• Los puntos activos mas comunes de intercambio cationico
son el grupo de acido sulfonico(HSO3), ácidos fuertes y
débiles
• Los intercambiadores anionicos contienen grupos amina
cuaternaria o aminas ternarias por ser bases fuertes y base
débil

15. • Estos equilibrios se pueden ser modelizados usando la
constante de equilibrio Kex(afinidad de la resina por los iones
en disolución)
• Kex tiene valor alto, la fase solida tiene una gran tendencia a
retener los iones M+
• Kex tiene valor bajo, la fase solida tiene poca tendencia a
retener los iones

16. • Sin embargo, dentro de un grupo con la misma carga, se dan
diferencias relacionadas con el tamaño del ion hidratado y con
otras propiedades.
• De este modo, para una resina típica de intercambio catiónico con
grupos sulfónicos, los valores de Kex, disminuyen según el orden
Tl+ > Ag+ > Cs+ > Rb+ > K+ > NH4 + > Na+ > H+ > Li + .
• Para los cationes divalentes, el orden es Ba2+ > Pb2+ > Sr 2+ > Ca
2+ > Ni2+ > Cd 2+ > Cu2+ > Co2+ > Zn 2+ >Mg2+>U02 2+.
• Para los aniones, Kex, en las resinas de base fuerte disminuye en el
orden SO4 2- > C2O4 2- > I- > NO3 - > Br- > Cl- > HCO2 - >
CH3CO2 - > OH- > F- . Esta secuencia debería considerarse sólo
como una aproximación, pues depende en parte de la resina y de
las

17. 4. CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN
POR TAMAÑO
se lleva a cabo por diferencias en
tamaño molecular y la habilidad de
diferentes moléculas para penetrar los
poros de la fase estacionaria a
diferentes tamaños o magnitudes.
se usa extensivamente para las
separaciones preparativas de
macromoléculas de origen biológico,
así como para la purificación de
polímeros orgánicos sintéticos

18. 5. CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD
• requiere un ligando
bioespecífico que
puede ser unido
covalentemente a
una matriz
cromatográfica.
• El ligando debe
retener su afinidad
específica de enlace
hacia las moléculas
blanco, y después
de lavar el material
no unido, la unión
debe ser reversible y
removible