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METODOS CROMATOGRÁFICOS
• Son métodos para la
separación de
sustancias en mezclas
y para la
identificación o la
cuantificación de los
diferentes
componentes.
• La separación se da a
base de procesos de
distribución y
absorción.
• En los métodos
cromatográficos se
utilizan dos fases no
miscibles una con
otra.
• Una de las fases es
estacionaria
(absorbente) y la otra
móvil.
• Por medio de la fase
móvil se transporta la
mezcla de sustancias
a separar.
CROMATOGRAFÍA
 De capa fina.
 Estas se comparan
con los estándares que
se encuentran en las
farmacopeas
CROMATOGRAFIA
• La fase estacionaria
puede ser sólida o
líquida
• La fase móvil puede
ser líquida (eluente) o
gaseosa (gas portador)
• LAS
POSIBILIDADES
• Gas-líquido
• Gas-sólido
• Líquido-líquido
• Líquido-sólido
METODOS DE CROMATOGRAFÍA
•CROMATOGRAFÍA DE PAPEL
•CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA
• CROMATOGRAFÍA DE GAS
•CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS (EN COLUMNA; HPLC)
PRINCIPIOS FÍSICO-QUÍMICOS
 DISTRIBUCIÓN
ENTRE DOS FASES
 Se basa en el hecho
que cada sustancia
muestra una
distribución
característica entre
dos fases por su
afinidad (polaridad),
lo que se expresa en el
coeficiente de
distribución C
 COEFICIENTE DE
DISTRIBUCIÓN
 C = concentración de
sustancia fase 1 entre
 Concentración de
sustancia fase 2
 C, depende de la
temperatura.
EJEMPLOS
• CROMATOGRAFÍA
DE PAPEL
• Fase estacionaria:
capa de agua que se
forma por la humedad
ambiental en la
superficie de la
celulosa de papel
• Fase móvil: mezcla de
solventes
• CROMATOGRAFÍA
DE GAS
• Fase estacionaria:
líquido
• Fase móvil: gas
TLC, revelada con la irradiación de luz UV 254 nm
TLC, revelada con la irradiación de luz UV 365 nm
Reunión de la columna cromatográfica de las raíces de Ambrosia cumanensis
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(EtOH, macerado de 20 días)
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(Revelador de vainilla en ácido sulfúrico)
Cámara reveladora Esprayador
Reunión de la columna cromatográfica de las raíces de Ambrosia cumanensis
SOLVENTES FRECUENTEMENTE UTILIZADOS EN CCF
SOLVENTES NO POLARES:
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La fase móvil puede estar formada por
un único solvente, por mezcla de dos
(binaria) o tres (terciaria).
FASE MÓVIL DE “BATALLA”
n-hex:AcOEt (1:1)
no polar:polar
Cromatografía en capa fina (CCF)Cromatografía en capa fina (CCF)
- Fase estacionaria: celulosa, alumina, celita, poliamida, gel de sílice, etc.
- Fase móvil: depende de las características de la muestra, disolventes de distintas
polaridades.
- Detección con luz UV o rociando con un reactivo.
Cromatografía de Adsorción
- Se suele usar para el seguimiento de reacciones, para determinar
número de componentes de una mezcla, pureza de un producto y
seguimiento de columnas cromatográficas.
La mezcla a separar se deposita sobre la
fase estacionario y la móvil atraviesa el
sistema desplazando a los componentes
de la mezcla a distinta velocidad,
dependiendo de la magnitud de sus
interacciones relativas con ambas fases.
La repetición sucesiva de las operaciones
elementales de retención y
desplazamiento a lo largo del sistema
cromatográfico da lugar a la separación
de la mezcla original.
(Figura 10.2).
El fenómeno de migración de los componentes de una mezcla
a lo largo de la fase estacionaria, impulsados por la móvil,
recibe el nombre de elución (Figura 10.2).
Método de Separación: Técnicas cromatográficas
La cromatrografía es una técnica que permite la separación de los
componentes de una mezcla debido a la influencia de dos efectos
contrapuestos:
a) Retención: efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por
una fase estacionaria, que puede ser un sólido o un líquido ancla-
do a un soporte solidó.
b) Desplazamiento: efecto ejercido sobre los componentes de la
mezcla por una fase móvil, que puede ser un líquido o un gas.
PASOS PARA UNA CROMATOGRAFÍA DE
CAPA FINA
PASOS PARA UNA CROMATOGRAFÍA
DE CAPA FINA
CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA
ABSORCIÓN
• CONCEPTO
• Acumulación de una
sustancia en la superficie
de otra a base de
interacciones específicas
entre la superficie polar
del absorbente y grupos
polares de la sustancia
absorbida.
• En menor concentración la
sustancia puede correr
más tiempo con la fase
móvil, para comparar
diferentes muestras hay
que usar concentraciones
parecidas.
• LA CAPACIDAD DE
ABSORCIÓN DEPENDE
DE:
• Temperatura (Tº mayor-
menor absorción)
• Superficie del absorbente
(superficie más grande-
más absorción), se
prefieren polvos finos como
absorbentes.
• La cantidad de sustancia
en la fase móvil.
FACTOR DE RETENCIÓN RF
 Rf = distancia entre la
línea de partida y la
posición de la
sustancia entre,
distancia entre la
línea de partida y el
frente del solvente
 Es un valor relativo
que proporciona
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la posición de las
diferentes sustancias,
lo que ayuda a
identificarlas.
FACTOR DE RETENCIÓN RF
REVELACIÓN
• CONCEPTO
• Se refiere al proceso de
separación de las
sustancias o a la
visualización de las
sustancias después de la
separación
• Algunas sustancias
emiten fluorescencia en
luz UV de 256 o 366 nm,
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fluorescencia de placas
de silicagel que
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Clase 4 metodos cromatográficos

  • 1. METODOS CROMATOGRÁFICOS • Son métodos para la separación de sustancias en mezclas y para la identificación o la cuantificación de los diferentes componentes. • La separación se da a base de procesos de distribución y absorción. • En los métodos cromatográficos se utilizan dos fases no miscibles una con otra. • Una de las fases es estacionaria (absorbente) y la otra móvil. • Por medio de la fase móvil se transporta la mezcla de sustancias a separar.
  • 2. CROMATOGRAFÍA  De capa fina.  Estas se comparan con los estándares que se encuentran en las farmacopeas
  • 3. CROMATOGRAFIA • La fase estacionaria puede ser sólida o líquida • La fase móvil puede ser líquida (eluente) o gaseosa (gas portador) • LAS POSIBILIDADES • Gas-líquido • Gas-sólido • Líquido-líquido • Líquido-sólido
  • 4. METODOS DE CROMATOGRAFÍA •CROMATOGRAFÍA DE PAPEL •CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA • CROMATOGRAFÍA DE GAS •CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS (EN COLUMNA; HPLC)
  • 5. PRINCIPIOS FÍSICO-QUÍMICOS  DISTRIBUCIÓN ENTRE DOS FASES  Se basa en el hecho que cada sustancia muestra una distribución característica entre dos fases por su afinidad (polaridad), lo que se expresa en el coeficiente de distribución C  COEFICIENTE DE DISTRIBUCIÓN  C = concentración de sustancia fase 1 entre  Concentración de sustancia fase 2  C, depende de la temperatura.
  • 6. EJEMPLOS • CROMATOGRAFÍA DE PAPEL • Fase estacionaria: capa de agua que se forma por la humedad ambiental en la superficie de la celulosa de papel • Fase móvil: mezcla de solventes • CROMATOGRAFÍA DE GAS • Fase estacionaria: líquido • Fase móvil: gas
  • 7.
  • 8.
  • 9. TLC, revelada con la irradiación de luz UV 254 nm TLC, revelada con la irradiación de luz UV 365 nm Reunión de la columna cromatográfica de las raíces de Ambrosia cumanensis
  • 10. Macerado de las raíces de Ambosia cumanensis (EtOH, macerado de 20 días) TLC, raíces de Ambrosia cumanensis (Revelador de vainilla en ácido sulfúrico) Cámara reveladora Esprayador Reunión de la columna cromatográfica de las raíces de Ambrosia cumanensis
  • 11. SOLVENTES FRECUENTEMENTE UTILIZADOS EN CCF SOLVENTES NO POLARES: - n-hexano - CCl4 - Tolueno - Éter de petróleo - n-heptano - Benceno (extremadamente tóxico) SOLVENTES DE MEDIANA POLARIDAD: - CH2Cl2 - CHCl3 - Éter etílico SOLVENTES POLARES: - Acetato de etilo - Acetona - Dioxano - Isopropanol - EtOH - MeOH - H2O La fase móvil puede estar formada por un único solvente, por mezcla de dos (binaria) o tres (terciaria). FASE MÓVIL DE “BATALLA” n-hex:AcOEt (1:1) no polar:polar
  • 12. Cromatografía en capa fina (CCF)Cromatografía en capa fina (CCF) - Fase estacionaria: celulosa, alumina, celita, poliamida, gel de sílice, etc. - Fase móvil: depende de las características de la muestra, disolventes de distintas polaridades. - Detección con luz UV o rociando con un reactivo. Cromatografía de Adsorción - Se suele usar para el seguimiento de reacciones, para determinar número de componentes de una mezcla, pureza de un producto y seguimiento de columnas cromatográficas.
  • 13. La mezcla a separar se deposita sobre la fase estacionario y la móvil atraviesa el sistema desplazando a los componentes de la mezcla a distinta velocidad, dependiendo de la magnitud de sus interacciones relativas con ambas fases. La repetición sucesiva de las operaciones elementales de retención y desplazamiento a lo largo del sistema cromatográfico da lugar a la separación de la mezcla original. (Figura 10.2). El fenómeno de migración de los componentes de una mezcla a lo largo de la fase estacionaria, impulsados por la móvil, recibe el nombre de elución (Figura 10.2).
  • 14. Método de Separación: Técnicas cromatográficas La cromatrografía es una técnica que permite la separación de los componentes de una mezcla debido a la influencia de dos efectos contrapuestos: a) Retención: efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por una fase estacionaria, que puede ser un sólido o un líquido ancla- do a un soporte solidó. b) Desplazamiento: efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por una fase móvil, que puede ser un líquido o un gas.
  • 15. PASOS PARA UNA CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA
  • 16. PASOS PARA UNA CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA
  • 18. ABSORCIÓN • CONCEPTO • Acumulación de una sustancia en la superficie de otra a base de interacciones específicas entre la superficie polar del absorbente y grupos polares de la sustancia absorbida. • En menor concentración la sustancia puede correr más tiempo con la fase móvil, para comparar diferentes muestras hay que usar concentraciones parecidas. • LA CAPACIDAD DE ABSORCIÓN DEPENDE DE: • Temperatura (Tº mayor- menor absorción) • Superficie del absorbente (superficie más grande- más absorción), se prefieren polvos finos como absorbentes. • La cantidad de sustancia en la fase móvil.
  • 19. FACTOR DE RETENCIÓN RF  Rf = distancia entre la línea de partida y la posición de la sustancia entre, distancia entre la línea de partida y el frente del solvente  Es un valor relativo que proporciona información acerca de la posición de las diferentes sustancias, lo que ayuda a identificarlas.
  • 21. REVELACIÓN • CONCEPTO • Se refiere al proceso de separación de las sustancias o a la visualización de las sustancias después de la separación • Algunas sustancias emiten fluorescencia en luz UV de 256 o 366 nm, otras desactivan la fluorescencia de placas de silicagel que contienen sustancias fluorescentes. • Otras sustancias se visualizan por medio de calor o de reacciones químicas, se disperga un reactivo en la placa que forma un compuesto de color con la sustancia.