By: Clara Pilar Vélez Gómez Medicine Student U.P.B

1. Polymerase chain reaction of peripheral blood as a tool for the diagnosis of visceral leishmaniasis in children Por: Clara PilarVélezGómez Estudiante 3er semestre

2. INTRODUCTION Proper use of PCR for diagnosis of leishmaniasis has proven to be a great help in allowing the doctor a clearer focus and direct to the patients. The PCR can establish from small samples of DNA a clear and precise diagnosis of the disease, and this is much more reliable than electron microscopy and cultivation by the small amount of sample needed to perform it.

3. This technique decreases the risk of complications caused by invasive sampling, in children is particularly useful due to the being a less aggressive method reduces pain and discomfort for them represents the taking of other samples. INTRODUCTION

4. Visceral leishmaniasis Family Trypanosomatidae.

6. The PCR objective is the direct amplification to a gene or DNA fragment or indirect amplification from an RNA present in mixtures of various sources.

9. PACIENTES Estudio de análisis prospectivo En niños con diagnóstico de la LV Hospital Universitario de la Universidad Federal de Mato Grosso do Sul (NHU-UFMS) Marzo 2008 a marzo 2009.

10. PACIENTES Se estudiaron 45 pacientes que presentaban: características clínicas serología positiva (≥ 1 / 80) dieron negativo en los resultados del examen parasitológico o serológicas, pero que presentan una respuesta favorable al tratamiento especializado

11. Microscopia directa

12. Cultivo

13. Extracción PCR-DNA Aislar el ADN de 300 L de aspirado de médula ósea o sangre periférica GenomicPrepTM

14. Reacción La secuencia de ADN amplificado por PCR fue la región conservada de la molécula de minicírculos Un control negativo sin ADN en la mezcla y un control positivo que contiene 20 fg de ADN de Leishmania fueron incluidos en cada experimento.

15. PCR se realizó en un volumen total de reacción de 25 μL bajo las siguientes condiciones: Reacción

16. Marcador: escalera de ADN de 100 pb (Promega). Las muestras se considera positiva para Leishmania cuando un fragmento de ADN por PCR de 120 pb se detectó. Reacción

17. PCR-RFLP Longitud de los fragmentos de restricción polimorfismo: se analizaron por RFLP de acuerdo con el protocolo.

18. Resultados PCR en sangre periférica vs microscopia directa de médula ósea por aspiración: 35 niños (77,8%) presentaron resultados positivos con ambos métodos. De los 9niños con resultados negativos de PCR de sangre periférica, 8 tuvieron resultados positivos de la microscopía directa.

19. PCR de sangre periférica vs PCR de médula ósea por aspiración: 39 de cada 45 pacientes (86,7%) fueron un resultado positivo con ambos métodos. Los 4 niños con resultados negativos de PCR de aspirado de médula ósea mostró resultados positivos de PCR de sangre periférica. Resultados

20. PCR de sangre periférica vs cultivo de la médula ósea por aspiración: 11 pacientes (24,4%) presentaron resultados positivos con ambos métodos De los 33 niños con los resultados del cultivo negativo, 32 tuvieron resultados positivos de PCR de sangre periférica. Resultados

21. DISCUSSION

22. Personal conclusion The PCR taken from a peripheral blood sample was shown to be highly specific in diagnosing VL I can see that in patients who the microscopy and culture were not specific to confirm the diagnosis, the PCR could confirm the presence or absence of the infectious agent The PCR taken from a peripheral blood sample showed to be very useful in diagnosing VL The PCR is the less invasive method that allows rapid confirmation of the diagnosis of VL increasing the likelihood of patient survival

23. GRACIAS