Este documento describe los procedimientos para cultivar y realizar un antibiograma de la flora microbiana normal de las fosas nasales. Incluye instrucciones para la toma de muestras, siembra en medios de cultivo, identificación de colonias mediante tinción de Gram y pruebas bioquímicas, y la realización del antibiograma mediante el método de difusión en disco para determinar la sensibilidad a diferentes antibióticos. El objetivo es detectar portadores de Staphylococcus aureus y evaluar su perfil de sensibilidad

1. UNIVERSIDAD FRANZ TAMAYO
CARRERA DE MEDICINA Y ODONTOLOGÍA
LABORATORIO AGENTES BIOLÓGICOS I, PRÁCTICA 5
CULTIVO Y ANTIBIOGRAMA DE FLORA MICROBIANA NORMAL
CULTIVO FOSAS NASALES (DETECCIÓN DE PORTADORES DE Staphylococcus
aureus.
PROCEDIMIENTO
1. Insertar una torunda flexible, humedecida con solución salina estéril
dentro de la fosa nasal, en dirección paralela al piso de la fosa nasal.
2. Rotar la tórula en la zona interna del vestíbulo de la fosa nasal (tabique
y cara interna de las aletas nasales).
3. Sembrar con una asa de platino sobre el medio de cultivo Agar Sangre
y Saboureaud .
4. Incubar a 37° C por 24 horas.
5. Observar crecimiento de las colonias.
6. Realizar tinción de Gram para identificación de Cocos Gram positivos.
7. Realizar prueba de la catalasa para diferenciación de Staphylococcus
de Streptococcus.
8. Realizar la prueba de la coagulasa para confirmación de S. aureus
9. Proceder a realizar el antibiograma según el test de sensibilidad por
difusión de disco.
TEST DE SENSIBILIDAD POR DIFUCIÓN DE DISCO.
-Etapa 1: Preparación del inóculo: Escala de McFarland. Turbidez padrón.
• Cuando la turbidez del inóculo del test esté similar a la turbidez padrón
de la escala #0,5, significa que contiene aproximadamente 1,5 x10 8
UFC/mL.

2. • Use el método de crecimiento o método de suspensión directa de la
colonia en el caso de suspensión directa, las colonias no deben tener
más de 18 a 24 horas de repique.
-Etapa 2: Padronización del inóculo:
• Homogeneizar el tubo de la Escala =0,5 McFarland y el tubo test
(inóculo) y mantenga los tubos lado a lado sobre un cartón blanco con
líneas negras horizontales. (Las líneas tienen que poder visualizarse
con la misma definición en los tubos, el inóculo está satisfactorio.)
-Etapa 3: Inoculación en la placa del medio de cultivo.
• Para este test de organismos no fastidiosos(E. Coli, Staphylococcus)
usar medio de cultivo no suplementado.
• Sumerja el coto hisopo en el tubo del inóculo, levante el hisopo encima
del líquido y gire en las paredes del tubo para la remoción del líquido
excedente.
• Aplique el inóculo en la placa, cubriendo toda la superficie, gire 60° y
aplique nuevamente en la superficie completa, gire 60° y aplique
nuevamente.
Etapa 4 Aplicación de los discos de sensibilidad
• Placa de 150mm: colocar máximo 12 discos
• Placa de 100mm: colocar máximo 5 discos
Penicilina S= o mayor a 29 I= -- R= o menor a 28
Ampicilina S= o mayor a 29 I= -- R= o menor a 28
Amoxicilina + Ac. Clav. S= o mayor a 20 I= -- R= o menor a 19
Cephalotin S= o mayor a 18 I= 15-17 R= o menor a 14
Cefotaxime S= o mayor a 23 I= 15-22 R= o menor a 14
Oxacilina S= o mayor a 13 I= 11-12 R= o menor a 10

3. Azitromicina o Eritrom. S= o mayor a 18 I= 14-17 R= o menor a 13
Gentamicina S= o mayor a 15 I= 13-14 R= o menor a 12
Sulfatrimetroprim S= o mayor a 16 I= 11-15 R= o menor a 10
Chloranfenicol S= o mayor a 18 I= 13-17 R= o menor a 12
Ciprofloxacin S= o mayor a 21 I= 16-20 R= o menor a 15
Vancomicina S= o mayor a 15 I= -- R= --
Linesolid S= o mayor a 22 I= -- R= --
Etapa 5: Incubación del test
• Invertir la placa (lado del agar para arriba) e incubar a 35°c
• Para la mayoría de los tests, incubar de 16 a 18 horas.
Etapa 6: Lectura de Zona de inhibición
• Después de 16,18,24 horas incubación, verifique si el crecimiento
sobreel Agar está uniforme.
• Asegure la placa (lado del agar para arriba) sobre una superficie
negra, usando una luz directa por encima.
• Medir el diámetro de zona de inhibición en milímetros.
Etapa 7: Interpretación de resultados:
• Usar las zonas de diámetros de la tabla, (verifique que las tablas son
actuales)
• Categorías para interpretación:
-Sensible: la infección puede ser tratada con el agente antimicrobiano en la
dosis recomendada.
-Resistente: el organismo probablemente no será inhibido por el agente
antimicrobiano en dosis usuales.

4. -Intermedio: tratamiento evaluado en diferentes posibilidades y puede
reflejar problemas técnicos.
PILARES DIAGNÓSTICOS.
La flora comensal de las fosas nasales consiste principalmente en corinebacterias,
estafilococos (S. aureus y S. epidermidis en portadores sanos). En el cultivo es
recomendado realizar una estría profunda en la zona de inoculación de la muestra
en agar sangre, esto para favorecer la observación de la hemólisis de posibles
patógenos como S. aureus. En la interpretación del cultivo debe considerarse la
importancia del desarrollo de una especie pura o el predominio notorio de una sobre
las demás, también es de importancia en informe de la presencia de S. aureus, con
fines epidemiológicos y así tratar de evitar la diseminación de la infección por el
contacto con portadores.