Esta presentación trata sobre una secuencia de ADN que es amplificada o clonada

1. BIOLOGÍA
MOLECULAR

2. Biología Molecular
 Estudia el ADN y los genes que contiene
 El ADN muestra algunas similitudes entre
organismos debido a que han partido de un
ancestro común
 La Biología Molecular permite estudiar las
relaciones evolutivas entre los organismos

3. Tecnología del ADN
recombinante
 Permite obtener copias de un segmento específico
del ADN
 Se introduce ADN foráneo en las células de un
microorganismo
 Una secuencia de ADN es amplificada o clonada
 El ADN es cortado mediante enzimas de restricción

4. Enzimas de Restricción
 También llamadas endonucleasas
 Enzimas bacterianas empleadas para
cortar el ADN en sitios específicos
 En las bacterias actúan como mecanismo
de defensa para degradar el material
genético extraño que entra a la célula

5.  Secuencias Palindrómicas
Son secuencias reconocidas por las enzimas de
restricción que se leen igual en ambas hebras del
ADN en la dirección 5'→3‘
 El nombre de las endonucleasas proviene de la
bacteria de la cual fue aislada:
EcoRI→E= género Escherichia
co= especie coli
R= cepa RV 13
I= primera endonucleasa aislada
de esta cepa

6.  HindIII: es derivada de Hemophilus
influenzae
Tipos de Corte:
 Cohesivos (pegajosos): cortan la doble
hebra del ADN de manera escalonada
5‘-GAATTC-3‘ 5‘-GGATC-3‘
3‘-CTTAAG-5‘ 3‘-CCTAGG-5‘
 EcoRI BamHI

8.  Abruptos: cortan las dos hebras del ADN en
la misma posición
5‘-AAT AAT-3‘ 5‘-CCC GGG-3‘
3‘-TTA TAA-5‘ 3‘-GGG CCC-5‘
SspI SmaI

9. Factores que afectan a las
enzimas de restricción
 Pureza del ADN: proteínas y altas
concentraciones de sal
 Temperatura y pH
 Amortiguador (buffer) adecuado: provee el
ambiente necesario para que la enzima trabaje
adecuadamente

10. Electroforesis
 Esta técnica permite
separar macromoléculas,
fragmentos de ADN o ARN)
a través de un flujo de
corriente eléctrico
 Permite determinar el
tamaño de los fragmentos
de ADN
 El ADN y el ARN migran
hacia el polo positivo del
campo eléctrico debido a
que están negativamente
cargado, debido sus
grupos fosfato

11. Los fragmentos del ADN se separan de acuerdo con:
 El tamaño de la molécula o masa
 Forma o conformación del ADN
 Tamaño o poro del gel
 Magnitud de la carga neta de la molécula
Los fragmentos del ADN migran inversamente
proporcional al logaritmo de su tamaño o peso
molecular

12.  El movimiento de los fragmentos del ADN
genera un patrón de bandas
 Cada banda corresponde a un fragmento de
ADN de un tamaño particular
 El tamaño de cada fragmento se determina
por un marcador cuyos fragmentos tienen
pesos moleculares conocidos

13. Los fragmentos separados por electroforesis
pueden:
 Analizarse empleando otras técnicas
 Ser comparados con diferentes organismos
Insertarse en genomas de otros organismos
para crear un ADN Recombinante