UPCH

1. Bases Biológicas y Ambientales de la Salud
Práctica de Laboratorio
Reproducción: Fecundación in vitro
OBJETIVOS:
 Reconocerlascaracterística morfológicasdel erizode marTetrapygusniger
 el procesode reproducción
 Identificarlasdiferenciasentre gametosmasculinosygametosfemeninos
 Describirel procesode fecundaciónutilizandocomomodelode estudioal erizode mar.
MATERIALES:
1. Por grupo de práctica
- 6 erizosde mar Tetrapygusniger
- 2 ltde agua de mar
- Microscopiocon ocularmicrométrico
- Papel lente,aceitede inmersión
- Alcohol isopropílico
- Placa petri
- 1 pinza
- 1 jeringade 1 ml
- 3 goteros
- 5 ml de KCl 0.5M
- 40 ml Aguade mar filtrada
- 4 láminasportaobjetos
- 4 láminascubreobjetos
- Papel toalla
PROCEDIMIENTO:
1. Reconocimientode las estructuras del erizode mar
El profesormostrará las estructurasexternasdel erizode mar.
Figura 1. Anatomía del Erizo de mar. Orientación (centro): Cara oral en la parte superior (diferenciar el
gonoporo) y Cara aboral en la parte inferior (notar la cara peristomal).
Respondaa laspreguntas:
a. ¿A qué grupotaxonómicopertenece el erizo?
b. ¿Qué característicasmorfológicastiene el erizo?

2. 2. Obtenciónde gametos
El profesorrealizará lo siguiente:
 En una placa Petri conteniendoaguade mar,colocar el espécimenconlacara aboral hacia abajo.
 Inyectara travésde lamembranaperistomial (zonaoral) 1 ml de 0,5 M de KCl CUIDADO: la inyección
accidental de KCl esfatal.
 En uno o dosminutosse observaráunlíquidoespesoenlacara aboral,donde se localizanlos
gonoporos.Si el líquidoesblanquecino,esesperma,mientrasque si esrojizocorrespondeaóvulos.
 Use un goteropara colectarlosespermatozoidesde lazonamásdiluidade laplacaPetri y coloque
una gota enuna láminaportaobjetospararealizarunmontaje húmedoparasuobservación.
 Con ungoterodiferente colecte losóvulosteniendo cuidadode aspirarlosmuysuavementepara
evitardañarlosyrealice unmontaje húmedoparasu observación.
Figura 2. Extracción de los gametos del Erizo de mar. (A) Sobre la placa Petri con agua de mar inyecte la
solución salina a través de la membrana peristomal. (B) A los pocos minutos comienza a observarse la
expulsión de gametos, el color blanquecino de los gametos expulsados nos indica que se trata de un
macho. (C) Desove del erizo hembra. Los gametos son rojizos. (Fotos M. Arana)
c. Diga si el erizotiene reproduccióndioicaomonoica
d. ¿Cómodiferencialoserizoshembrasde losmachos?
e.¿Qué tipode reproduccióntienenloserizos?
f. En qué condicionesse debentenerlosgametosparamantenersuviabilidad?
g. Dibuje losgametos a400 aumentos
3. Fecundación
Cada grupode trabajodebe seguirlasinstruccionesdel profesor yrealizarlosiguiente.
 Colocar1 ml de losóvulosde erizode mar extraídosenlaplaca Petri.Recuerde aspirarsuavemente
para evitardañar losgametos.
 Extraersuavemente conotrapipeta1 ml de espermatozoidesydepositarloenel vasoque contiene a
losóvulos.
 Agitarel vaso suavemente.Esperarunminuto.Sacaruna gotade la solucióndel fondodelvasode
precipitaciónycolocarlaenunaláminapara observarlaal microscopio.
 Dejarel vaso de precipitaciónconloshuevosfecundadosenunlugarseguroa temperatura
ambiente.
 Podráobservar,a lospocos minutosque losóvulosfecundadospresentanunamembranade
fecundación.Laprimeradivisióndel desarrolloembrionariose podráapreciarentre 1.5 y2 horas.

3. Figura 3. Óvulo fecundado en el que se ve la membrana de fecundación. Se observan a los
espermatozoides sobre la membrana. Foto: Sarita Cuadros. UPCH 2014-II
Estado de desarrollo Tiempo
Membranade fecundación 5 minutos
Primeradivisión 1.5 a 2 horas
Segundadivisión 2.5 a 3 horas
Blástula 24 horas
Gástrula 2 días
Larva Pluteus 4 a 5 días
Tabla 1. Tiempo de duración de los estados de desarrollo del erizo de mar
Figura 4. Desarrollo temprano del erizo de mar. a) Cigoto. Obsérvese la membrana de fecundación. b)
Primera citocinesis. c) Embrión de dos células. Foto: Sarita Cuadros UPCH 2014-II
i. Describa el momento de la fecundación
h. Dibuje sus observaciones e indique el aumento total