El documento detalla procedimientos y recomendaciones para la extracción y cultivo de sangre en hemocultivos, enfatizando la importancia de la toma adecuada de muestras y la reducción de contaminaciones. Se discuten medios de cultivo, sistemas de detección, y se ofrecen pautas específicas sobre condiciones y técnicas para maximizar la positividad y la precisión en el diagnóstico de bacteriemias. Además, se abordan preguntas frecuentes y consideraciones sobre la manipulación de equipos y muestras en diferentes situaciones clínicas.

1. Diagnóstico de bacteriemia Hemocultivos Dra. Aitziber Aguinaga Pérez Servicio de Microbiología Clínica Clínica Universidad de Navarra

2. Hemocultivos Cult. Sangre. Bact. Microorganismo responsable del síndrome clínico Segunda prueba más solicitada (1ª Orina) 1/1/2010-31/12/10: 1943 pruebas 83% (-) // 17% (+) +/-20% son contaminaciones Recomendaciones: <3% (SEIMC) La mayoría de Hospitales: 25-74% La probabilidad HC + corresponda con bacteriemia verdadera,  muestra se obtiene adecuadamente Loza E. Hemocultivos. SEIMC. 2003.

3. Extracción óptima: antes del inicio de los escalofríos Se recomienda extraer: - lo antes posible después del comienzo de la fiebre y los escalofríos, o - siempre que se sospeche una infección grave Antes del inicio de la terapia antimicrobiana (Evidencia A-I) Hemocultivos. Toma de muestras Mermel LA. CID 2009:49;1-45.

4. Preparación de los frascos: Confirmar frasco en buen estado (caducidad, medio no turbio, color fondo tubo azul-verdoso) Identificar el frasco con los datos del paciente (Cuidado con código de barras) Identificar la toma y lugar de extracción Retirar la tapa elevadiza del frasco. Desinfectar con una gasa alcohol o equivalente (clorhexidina). Secar al aire Hemocultivos. Toma de muestras Prob: introducción antiséptico en frasco

5. Hemocultivos. Toma de muestras Venopunción Localizar por palpación de vena elegida para punción Desinfectar con alcohol isopropílico o etílico 70% durante 30 seg. (zona +/- 10 cm diam) Desinfectar con clorhexidina digluconato (2%). Secar durante 1 min. Desinfección percutanea; alcohol/tintura yodo/clorhexidina (0.5%) > povidona iodada (A-I) Evitar tocar con los dedos el lugar de la venopunción, así como hablar o toser mientras se realiza la extracción Extracción 10 mL (adultos) e inoculación en frasco (3-5 mL sangre) (1º Fr anaerobio). Homogeneizar No cambio de agujas * Mermel LA. CID 2009;49:1-45. Spitanic SJ. CID. 1995;21:1103-6. Remeir LG. Clin Microbiol Rev. 1997;10(3):444-465.

6. Número e intervalo de extracciones 2-3 extracciones (S 95%) Utilizar lugares diferentes de venopunción Extracciones 30 min-1h Hemocultivos. Toma de muestras

7. Medios de cultivo: Caldos enriquecidos: con sustancias que faciliten en crecimiento de bacterias con requerimientos nutritivos y con sustancias para inhibir factores que se encuentran en la sangre y dificulten el crecimiento bacteriano Anticoagulante, SPS (polianetol sulfonato sódico): Inhibe actividad bactericida del suero Neutraliza algunos antibióticos Inactiva el complemento e inhibe la fagocitosis Neutraliza lisozimas 2% gelatina Medios para aislamiento de microorganismos después de terapia antibiótica Sistemas de retirada de antimicrobianos Adición de penicilinasas Hemocultivos. Toma de muestras

8. Hemocultivos. Toma de muestras 40 ml de medio suplementado con caldo tripticase soja (TSB) 40 ml peptona enriquecida y suplementada con TSB, BHI y carbón activo 40 ml peptona enriquecida y suplementada con TSB, BHI y carbón activo 20 ml peptona enriquecida y suplementada con TSB, BHI y carbón activo 1ª T 2ª T

9. Volumen X venopunción adultos = 10 ml Índice de positividad (HC) aumenta:  3-5%/mL adicional No se aplica, por la anemia que se puede provocar al paciente para mantener la proporción de volumen sangre/medio de cultivo Neonatos y niños, según peso y a la edad Se recomienda cultivar un volumen de sangre +/- 4,5% del volumen total de sangre del paciente 2-5 mL extracción La dilución final recomendada es de 1/5 a 1/10 (volumen pcte/volumen fco).(necesaria neutralizar prop. bactericidas del suero). Diluciones <1/5 reducen la positividad. Hemocultivos. Toma de muestras

10. Transporte inmediato Pueden mantenerse a t ambiente o incubados en estufa 35-37ºC durante cortos periodos de tiempo Los hemocultivos nunca deben ser refrigerados Incubación 5d a 37ºC con agitación (Bacterias) >7d a 37ºC con agitación (Levaduras) 42d a 37ºC sin agitación (Micobacterias) Hemocultivos. Toma de muestras

11. Diagnóstico BRC. Extracción sangre a través del CVC, limpiar conexiones alcohol/tintura yodo/clorhexidina (0.5%), y dejar q se seque antes de la extracción (A-I) Utilizamos toallitas impregnadas de alcohol isopropílico 70% Extracción en paralelo muestra CVC y sangre periférica. (A-II). Indicaciones Manipulación del CVC con guantes estériles Hemocultivos. Toma de muestras Mermel LA. CID 2009:49;1-45.

12. Métodos manuales (turbidez): Medios líquidos: TSB, BHI, Columbia, Schaedler. Medios bifásicos: recomendados para hongos y Brucella spp . frascos Castañeda septi-Check Hemocultivos. Sistemas de detección

13. Lisis-centrifugacion: Se emplean concentración Isolator, contiene: saponina, propilenglicol, polianetol sulfonato sódico (SPS) Hemocultivos. Sistemas de detección Evita coagulación Facilita lisis leucocitos y eritrocitos-liberación bacteriana Diagn. BRC. Cultivo Medula ósea Diagn. Bact micobacterias Microorg. Crecmto lento -No extraer menos de 6 mL -Procesamiento inmediato, si >4 h, Rto no representativo

14. Sistemas automatizados: Ventajas  Agitación, lectura continua, ahorro tiempo (sensores) Bact T/Alert (BioMerieux)  producción C0 2 radiométricos/colorimétricos/fluorescencia/infrarrojos Bactec (Becton Dickinson) Hemocultivos. Sistemas de detección

15. Tabla 1. Sistemas comerciales automáticos de HC. Hemocultivos. Sistemas de detección Sí Colorimétrico Producción de CO 2 BacT/Alert Sí Manométrico Producción y/o consumo de gas ESP Si Fluorescencia Producción de CO 2 , cambio de pH o potencial redox Vital Si Fluorescencia Producción de CO 2 Bactec-9240 No Infrarrojos Producción de CO 2 Bactec 660 No Radiométrico Producción de 14 CO 2 Bactec 460 Monitorización cont Mec. detección Ind. crecimiento Sistema

16. Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) SeptiFast Utilidad: bacterias gran patogenicidad, rapidez, sensibilidad Hemocultivos. Sistemas de detección HC basados en la detección de microcalorimetría Fluorescence in situ hibridization

17. Fundamento: Colorimétrico (CO 2 ) Medida unidades reflectancia /10 min Hemocultivos Bact/ALERT ® Cond. incubación:35-37ºC + agitación

18. Hemocultivos. Lectura y análisis 0 1 2 3 4 5 6 6000 5000 4000 3000 2000 1000 0 Tiempo análisis (días) Unidades de reflectacia F. latencia F. logarítmica F. estacionaria Umbral Estable Valor fijo Algoritmo de aceleración Algoritmo de velocidad Algoritmo umbral

19. Gram Gram AS a AS an AS a ACh a 24 h 24 h 48 h + - HEMOCULTIVO Procesamiento muestras 2 frascos/toma: aerobia/anaerobia (con/sin quelante).

20. Cuestiones ¿Se pueden extraer las dos tomas de un cultivo sangre bacteriológico en frascos con quelante de antibiótico? 1ª Toma 2ª Toma

21. ¿Se requiere de guantes estériles para el procedimiento de extracción de sangre a través de vena periférica? Cuestiones

22. Paciente portador de PAC/CVCT. El médico responsable nos pide extraer HC. ¿De donde tengo que extraerlos? Y ¿si hay sospecha de BRC? Cuestiones

23. Para descartar una BRC, cuando extraemos la sangre a través del CVC, ¿Hay que extraer y eliminar los primeros mL que rellenan la luz del CVC antes de extraer el volumen adecuado para los frascos de HC? Cuestiones

24. Para descartar una BRC, si hemos extraído sangre de las luces del CVC, y no conseguimos sacar sangre periférica, ¿Qué podemos hacer? ¿Y si no refluye el CVC? ¿Qué podemos hacer? Cuestiones

25. Cuestiones Acabamos de coger una vía periférica a un paciente que ingresa en urgencias. ¿Podemos extraer HC a través de la vía periférica? Y si el paciente no hace fiebre, ¿Podemos extraer el HC?

26. Queremos descartar una fungemia. ¿Tenemos frascos específicos para el aislamiento de Candida spp.? Cuestiones

27. Si en un paciente oncológico adulto únicamente conseguimos extraer de vena un volumen de 2 mL, ¿En qué frasco los inoculamos? Cuestiones

28. Puedo dejar los HC extraídos a primera hora de la mañana en la planta hasta el cambio de turno? ¿Y si los dejo en el frigorífico? Cuestiones

29. Muchas Gracias!