Trabajo de investigación

1. EFECTO DE LA APLICACIÓN DE TRES TRATAMIENTOS TÉRMICOS AL OREGANÓN
Plectranthus amboinicus (Lour.)
EN EL CRECIMIENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS MOHOS Y LEVADURAS.
Arias Leidy; Rojas Emily
Universidad Centroccidental “Lisandro Alvarado”, Decanato de Agronomía, Laboratorio de Microbiología Aplicada, Programa de Ingeniería
Agroindustrial. Apdo 3001. e-mail: lei.dy16@hotmail.com, emilylaflaca@hotmail.com.
Introducción
El Oreganón Plectranthus amboinicus (Lour.)es empleado tradicionalmente
en resfriados, expectorante, como diurético, Antiinflamatorio, depurativo, en el
tratamiento de cálculos renales y biliares. Antiespasmódico, para la artritis y
como antirreumático (1). .por todas estas propiedades es muy buscada encontrándoce en recintos donde no existe permiso sanitario, como, en las calles a la
interperie, arrojadas en el suelo, en material antihigiénico, en lugares cerrados,
pero unidos a otras hiervas ocasionando contaminación cruzada. Es por ello
que se hace necesario la investigación del efecto que puede causar la aplicación de tratamientos térmicos (cocción, fusión, ebullición), en el crecimiento
de microorganismos para determinar el tratamiento más efectivo en la inhibición de bacterias y mohos; se intento reproducir en el laboratorio los tratamientos que las personas le aplican a el Oreganón normalmente, ya que la mayoría
utiliza esta hierba en infusiones, decocciones y ebullición para el tratamien-
to de sus respectivas dolencias. Aunque algunos autores señalan que esta
hierba posee componentes activos que producen efecto bacteriostático sobre cepas de S
aureus
(2)
Materiales y Métodos
Tratamientos físicos aplicados:
Muestra: Oreganón fresco comprado en los establecimientos del área del centro
Macerado y sin macerar.
La muestra se les aplico un pre-acondicionamiento a 50g de muestra retirándole las hojas en mal estado y lavándolo, luego se tomaron 10 g para macerar
y 10g sin macerar haciendo diluciones seriadas peptonada 0,1% hasta 10 -5 y
ser sembrados en PCA (Agar Plate Count) a 37°C por 48h y YGC (Extracto
de levadura-glucosa-cloranfenicol) a 25°C por 5 días en la oscuridad y los 30g
restantes se maceraron para posteriormente ser aplicados los tratamientos térmicos respectivos.
Tratamientos térmicos.
Los 30g macerados fueron divididos en 3 porciones de 10g para luego ser
aplicados tres tratamientos a cada porción. Estos fueron aplicados con la finalidad de observar cual era más efectivo en la inhibición del crecimiento bacterias y hongos. Se adicionaron 90ml de agua destilada en 2 matraces para infusión y cocción y 96 ml para ebullición para compensar las pérdidas de agua por
evaporación y se llevaron a calentamiento hasta alcanzar una temperatura adecuada.
Tratamiento térmico
Temperatura ºC
Tiempo (min)
Infusión
55
5
Cocción
90
15
Ebullición
100
5
Cuadro1. Temperatura y tiempo aplicado a cada muestra.
Luego se dejo enfriar.
Para la determinación de aerobios mesófilos, mohos y levaduras mediante recuento estándar en placa, se les realizaron diluciones seriadas con agua peptonada hasta 10-5, posteriormente se sembró 1mL de cada dilución en la placa de
Petri y luego se le adicionó PCA atemperado y YGC las diluciones de 10 -3 y
10-5 de cada una de las muestras y se incubaron. Transcurrido el tiempo incubación correspondiente se realizo el recuento estándar en placas y la observación al microscopio, tinción Gram y tinción simple para levaduras y mohos.
Resultados
Macerado y sin macerar: en la determinación de aerobios mesófilos. Se
observaron colonias incontables, cocos y bacilos Gram positivos.
1
2
3
4
5
6
7
8
Figura 1 Aspergillus spp (macroscopica) figura 2 Aspergillus spp (microscopica).
Figura 3 Rhizopus spp (macroscopica) Figura 4 Rhizopus spp (microscopica).
Figura 5 Geotrichum spp (macroscopica) Figura 6 Geotrichum spp (microscopica).
Figura 7 Cladosporium spp (macroscopica) Figura 7 Cladosporium spp
Tratamiento
térmico
Mohos
% de
Incidencia
Geostrichum spp
50%
Cladosporium spp
UFC/g de
aerobios
mesófilos
Morfología
y afinidad
tintorial
Incontables
Cocos y
bacilos
Gram positivos
Cocos y
bacilos
Gram negativos
Cocos y
bacilos
Gram positivos
50%
Infusión
1,535X105
Geostrichum spp
50%
Cladosporium spp
Cocción
50%
1,07X105
Geostrichum spp
100%
Cladosporium spp
Ebullición
0%
Cuadro 2. Determinación de aerobios mesófilos, mohos y levaduras.
Discusión de Resultados
En las muestras testigo (sin macerar y macerado) se determinó gran cantidad
de aerobios mesófilos y mohos de diferentes tipos, esto debido a que las
muestras fueron adquiridas en lugares con malas condiciones sanitarias, estando en contacto con tubérculos y raíz y además no recibieron ningún tratamiento térmico que inhibiera el crecimiento de los mismos.
En la determinación de aerobios mesófilos infusión para cocción y ebullición se lograron evidenciar crecimiento de cocos y bacilos gram positivos
resistentes a altas temperatura, esto debido a que la planta no se encontraba en
buenas condiciones al momento de la compra aunado a esto las malas condiciones que presentaba el establecimiento tanto para la presentación de la hierba como la presentación del mismo local, donde las unían a todas las demás
hierbas (como raíces que están en contacto directo con el suelo) ocasionando
contaminación cruzada.
En la determinación de mohos y levaduras en las placas de infusión, cocción
y ebullición presentaron crecimiento de Geostrichum sps presentando un
porcentaje de incidencia del 50, 50 y 100% respectivamente, el cual es un
hongo que se encuentra en el suelo, aire, plantas entre otros por tal motivo
puede encontrarse en el oreganón, mas sin embargo es un hongo que causa
serias afecciones ya que se caracteriza por lesionar el aparato digestivo y respiratorio además de síntomas de diarrea. También se presento crecimiento de
Cladosporium spp con un porcentaje de incidencia de 50 y 50% en infusión y
concion de excepto en ebullición puesto que no resistió temperatura de 100 °
C estos se encuentran comúnmente en material vegetal muerto. Algunas especies son patógenas de plantas se manifiesta patológicamente por abscesos
cerebrales y en ocasiones por ulceras en la piel o lesiones en el pulmón. En
Venezuela el Oreganón (Plectranthus amboinicus Lour).no posee una norma
que indique la carga microbiana apta en esta hierba.
Conclusiones
19,96
Rhizopus spp
Geostrichum spp
10,07
39,92
El hongos más comun que mantuvo resistencia los tres tratamientos fue el Geostrichum sps,
30,03
0.33
Rhizopus spp
Geostrichum spp
33
33,33
Los tratamientos térmicos de infusión y cocción no fueron efectivos
para la inhibición de crecimiento bacterias y hongos ya que el
Geostrichum sps y Cladosporium spp resistieron los tratamientos aplicados, presentándose en un a 50% en cada una.
Cladosporium spp
Macerado
% de Incidencia
Cladosporium spp
Aspergillus spp
Sin macerar
Mohos
Aspergillus spp
Muestra testigo
El tratamiento más efectivo fue el de ebullicion puesto que inhibio
el crecimiento del hongo cladosporium spp en un 100% y disminuyo el crecimiento de aerobios mesófilos, puesto que en la
muestra control el numero de estos microorganismos era incontable y en ebullición 1,7x105 UFC/g.
33,33
Cuadro 2 %de incidencia de las muestras testigo.
Las hierbas compradas en los establecimientos no poseen ningún
control sanitario, ya que no reciben ningún acondicionamiento,
ni tratamiento de conservación de la calidad.
Literatura citada: 1. Menéndez Rosa y Pavón Vania . 1999. Plecthranthus amboinicus (lour.) spreng. Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM). Artículo de revisión. REV CUBANA PLANT MED; 3
(3):110-15. 2Gurgel Ana, da Silva Jackeline, Grangeiro Ana, Xavier Haroudo, Oliveira Rinalda, Pereira Maria & de Souza Ivone. (2009). Antibacterial Effects of Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng (Lamiaceae) in Methicillin Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) Department Pharmacological Science and Department of Antibiotics, Cidade Universitária, Pernambuco,Brazil.28 (3): 460-4