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UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA
FACULTAD DE INGENIERÍA
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E.A.P. INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL
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CULTIVO DE
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MICROORGANISMOS DEL
AMBIENTE
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CURSO:
Laboratorio de Microbiología
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DOCENTE: Mblgo. Carlos Azañero Díaz
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GRUPO:
¨D¨
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ALUMNA: Aburto Rodríguez Ruddy
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2. Cultivo de Microorganismos del Ambiente
I.
INTRODUCCIÓN
El control microbiológico del aire se integra como parte del proceso de
aseguramiento de la calidad, que tiene en cuenta un riesgo de naturaleza
microbiana, cualquiera sea el campo de actividad.
Los higienistas, en demanda de un dominio total del riesgo microbiológico, siempre
están consecutivamente interesados: En un producto en riesgo, En su medio
ambiente próximo, contaminante potencial por contacto Su medio el ambiente
lejano como el ordenamiento y los equipamientos de los locales. En este último
caso, el aire ambiente representa el vector principal de contaminación entre una
fuente contaminante y un receptor en riesgo.
Debido a los avances en el área técnica y científica nos lleva a cada vez más
situaciones con alto riesgo microbiológico: caso de un enfermo puesto bajo el
efecto de un tratamiento inmunodepresor o sufriendo una intervención quirúrgica
larga y arriesgada en el plano infeccioso; caso de una persona que trabaja en un
laboratorio con cepas microbianas altamente patógenas; caso de un producto
alimenticio ultra fresco donde solamente la preparación y acondicionamiento
aséptico garantizan la conservación.
Fuera de estos contextos de "alto riesgo microbiano" y de medio ambiente ultra
limpio, la medida exacta de la aérobiocontaminación interesa a los
epidemiologistas en los temas:
El estudio de la posible correlación entre la composición cuantitativa y cualitativa
de la flora microbiana (según la localización geográfica, de la urbanización, de la
estación, del confinamiento, etc.) y la emergencia de enfermedades respiratorias o
alergias. El conocimiento de las causas y los mecanismos de aparición y acción de
ciertas enfermedades profesionales, asociadas a la contaminación particular y
microbiana del aire respirado.
http://pdfcast.org/pdf/4-microorganismos-en-el-ambiente
Microbiología General
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3. Cultivo de Microorganismos del Ambiente
II.
OBJETIVO
Comprobar la ubicuidad de los microorganismos. Para ello se realizaran
análisis de diferentes ambientes que tienen que tienen incidencia en el
procesado de los alimentos, como son: Superficies de trabajo, aire y
manipuladores.
III. MATERIALES
Material de Laboratorio
Placas de agar para recuento en placa (PCA)
Placas de agar OGA
Placas de agar MacConkey
Hisopos estériles
Tubos con 10 ml de solución salina estéril
Papel de aluminio estéril con una abertura central de 9 cm2
IV. Fundamento teórico:
Análisis del Aire
Mecanismo de acción:El aire, además de partículas en suspensión es
portador de bacterias o sus esporas. Por ello puede ser causa tanto de
contaminación de alimentos y superficies como de infecciones en el
hombre (patologías respiratorias, etc.). El método de sedimentación en
placa es uno de los más sencillos para la determinación de
microorganismos en aire. A pesar de ello, los resultados obtenidos son
orientativos de las cifras de microorganismos presentes en el aire, ya que
estos niveles varían en función de las corrientes de aire y del tamaño de las
partículas de suspensión.
Microbiología General
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4. Cultivo de Microorganismos del Ambiente
Aplicaciones:Existen
diversos
métodos
para
el
análisis
de
aire:
Sedimentación, filtración, choque en líquidos y precipitación electrostática,
entre otros.
Análisis de Superficies
Mecanismo de acción: Para llevar a cabo una correcta manipulación de los
alimentos es necesario mantener una limpieza adecuada tanto en las
superficies de trabajo como en los utensilios que hay que emplear. A no ser
que los alimentos hayan sido esterilizados, todos los productos llevan
microorganismos. En la manipulación, el envasado y el almacenaje de los
alimentos, estos microorganismos se mantuvieron en todo momento en
niveles que aseguren la calidad microbiológica del alimento.
Aplicaciones:El objetivo de los análisis microbiológicos de superficies es
comprobar el estado higiénico del lugar de trabajo, de modo que evitemos
la contaminación cruzada durante el procesado de los alimentos. Existen
distintos métodos para el examen microbiológico de las superficies:
Método del hisopo, de la placa de contacto, de la jeringa de agar, de la
lengüeta (o película pegajosa)
Análisis de Manipuladores
Mecanismo de acción:Un alimento puede estar contaminado en su origen
o bien puede el manipulador quien lo contamine durante el procesado. L
persona que va manipular el alimento
tiene una abundante carga
microbiana en la piel, por ello resulta evidente la necesidad de que el
manipulador mantenga unas perfectas condiciones de higiene durante el
procesado de los alimentos.
Aplicaciones:El objeto del análisis de manipuladores es comprobar que la
persona que procesa un alimento no es una fuente de contaminación de
éste. Se puede estudiar: manos, uñas, y fosas nasales.
Microbiología General
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5. Cultivo de Microorganismos del Ambiente
V.
procedimiento:
1. Análisis de aire por sedimentación:
Destapamos 2 placas de PCA y 2 placas de OGA en el lugar cuyo nivel de
contaminación deseamos examinar durante diferentes intervalos de
tiempo: 0,5 y 1,0 horas. Tapamos las placas de PCA e incubamos durante
24-48 horas a 370 C. las placas de OGA se incubaron a temperatura
ambiente durante 4 días
En las placas de PCA se determinaron las bacterias aerobias mesófilas
viables totales ambientales y en OGA se determinaron los hongos (mohos y
levaduras) totales ambientales
2. Análisis de Superficies Planas y no Planas: Método del Hisopo.
Delimitamos la superficie que analizamos mediante una plantilla de papel
de aluminio estéril con una abertura de dimensiones conocidas (Ej. 9 cm2).
Humedecimos el hisopo estéril en una solución de 5 a 10 ml de solución
salina estéril y restregamos varias veces sobre la superficie delimitada por
la plantilla. Introducimos el hisopo en el tubo con solución salina estéril y
dejar durante 15 a 30 minutos de manera que los microorganismos se
liberen del algodón al caldo.
Sembramos 0.1 ml de dicho caldo en una placa de PCA y Agar MacConkey
(medio selectivo y diferencial para Entereobacterias).
Incubamos durante 24 a 48 horas a 370C (Recuento expresado como
UFP/9cm2).
3. Análisis de Manipuladores:
El alumno no se lavó las manos, ya que la técnica consistía en pasar la mano
por la superficie de placas con PCA y MacConkey.
Incubamos las placas 24-48 horas a 370C.
Observamos el crecimiento de colonias características en cada medio de
cultivo.
Microbiología General
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6. Cultivo de Microorganismos del Ambiente
VI. RESULTADOS:
1. Análisis de aire por sedimentación:
Muestras dePlaca PCA:
Técnica de placa descubierta: El análisis se
realizó dentro del Laboratorio de Microbiología
durante 15 minutos.
Cantidad de colonias: 1 UHF
Descripción: Aspergillus blanquecina.
Técnica de placa descubierta: El análisis se
realizó en las Terrazas de Agroindustria
durante 15 minutos.
Cantidad de colonias: 2UHF
Descripción: Aspergillus, transporte circular
ondulatorio.
Técnica de placa descubierta: El análisis se
realizó en un Kiosco de la UNS durante 15
minutos.
Cantidad de colonias: 0
Descripción: ----
Microbiología General
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7. Cultivo de Microorganismos del Ambiente
Muestras de Placa OGA:
Técnica de placa descubierta: El análisis se
realizó dentro del Laboratorio de Microbiología
durante 30 minutos.
Cantidad de colonias: 1 UHF
Descripción: pequeñas y blanquecinas; moho.
Técnica de placa descubierta: El análisis se
realizó en las Terrazas de Agroindustria
durante 30 minutos.
Cantidad de colonias: 20 UHF
Descripción: hay presencia de estos
organismos en abundancia, provenientes de
árboles y los hongos, próximos al jardín.
Bacterias Aspergillus, Penicillium.
Técnica de placa descubierta: El análisis se
realizó en un Kiosco durante 15 minutos.
Cantidad de colonias: 6 UHF
Descripción: colonias de distintos tamaños
entre grandes y pequeñas color blancas.
Bacterias Aspergillus, Penicillium.
Microbiología General
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8. Cultivo de Microorganismos del Ambiente
2. Análisis de Superficies Planas y no Planas:
Muestras de Placa PCA:
Método del Hisopo: El análisis se realizó
dentro del Laboratorio de Microbiología.
Cantidad de colonias: ninguna.
Descripción: ---
Técnica del Hisopo: El análisis se realizó en las
Terrazas de Agroindustria.
Cantidad de colonias: ninguna.
Descripción: ---
Técnica del Hisopo:El análisis se realizó a
kiosco de venta de alimentos envasados.
Cantidad de colonias: ninguna.
Descripción: ---
Microbiología General
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9. Cultivo de Microorganismos del Ambiente
3. Análisis de Manipuladores:
Muestra Placa PCA:
Técnica del Hisopo: El análisis se realizó a una
compañera del aula, Nadia Mendoza.
Cantidad de colonias: 7
Descripción: Se observó el crecimiento de
colonias pequeñas, blancas, uniformes algunas
esféricas y en forma ondulatoria. Bacterias
mesófilas.
Muestra Placa MacConkey:
Técnicadel Hisopo:El análisis se realizó a una
compañera del aula, Nadia Mendoza.
Cantidad de colonias: 2
Descripción: Se observó el crecimiento de
colonias transparentes.
Microbiología General
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10. Cultivo de Microorganismos del Ambiente
VII. DISCUSIÓN:
Según Morris 2000, JHI Estandarizar la medición deesporas de Aspergillus en
el aire. Se requieren sistemas de altovolumen de medición; los niveles de
esporas varíandurante el día.
El aire además de partículas en suspensión, es portador de bacterias en forma
vegetativa o esporulados, esporos de hongos y virus. Por ello puede ser causa
tanto de contaminación de alimentos como de infecciones en el hombre
(patologías respiratorias, etc.).Los microorganismos se encuentran presentes
en todos los ambientes: en el aire, en el agua, en la superficie de los objetos e
incluso sobre nuestra piel. Un alimento puede estar contaminado en su origen
o bien puede ser el manipulador quien lo contamine durante el procesado. La
persona que va a manipular un alimento tiene una abundante carga
microbiana en la piel, pero nunca deberán aislarse de ellas bacterias
patógenas. Por lo tanto resulta evidente la necesidad de que el manipulador
mantenga una perfecta condición de higiene durante el procesado de los
alimentos. Cuando se trabaja en Microbiología de los alimentos es importante
determinar el grado de contaminación ambiental, ya que de las condiciones
higiénicas del lugar de trabajo (utensilios, superficies, etc.) y del propio
manipulador van a depender en parte el número y tipo de microorganismos en
el alimento.
El agar MacConkey se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de
fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar
bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y alimentos.
Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
En este medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para
el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la
Microbiología General
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11. Cultivo de Microorganismos del Ambiente
mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que
inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva.
Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto
produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en
las colonias, y la precipitación de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias
incoloras.
Agar selectivo según Mossel y Col. (1970), este agar permite la demostración
y numeración de mohos y levaduras en todo tipo de material de investigación
(alimentos, material clínico, etc.).El agar-oxitetraciclina-glucosa-extracto de
levadura ha sido recomendado como medio de rutina para la investigación de
mantequilla.En la investigación de muestras de heces procedentes de
pacientes tratados con Tetraciclina, las Enterobacteriáceas sólo son inhibidas
de manera insuficiente. En tales casos, es preferible el empleo de Gentamicina
en vez de la Oxitetraciclina.
Microbiología General
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12. Cultivo de Microorganismos del Ambiente
VIII. CONCLUSIÓN:
Se comprobó la ubicuidad de los microorganismos, como por ejemplo: en las
Terrazas que están cerca de la Planta Piloto o el Kiosco que está en la UNS,
hay presencia de hongos, ya que al realizar el Análisis de Aire, se obtuvo
crecimiento en el agar OGA. También se determinó la presencia de bacterias
aerobias viables mediante al Análisis de Aire realizado en el Laboratorio, esto
debido a que como siempre se trabaja con cultivos de microorganismos estos
se van al aire lo cual se puede evitar teniendo una correcta ventilación del
ambiente ya mencionado.
El Análisis de Superficies indica presencia de bacterias, esto comprueba que
tan importante es el saneamiento en todos los ambientes habitables por las
personas.
En el Análisis de Manipuladoresse comprueba que todo las personas
presentan bacterias como es el caso de nuestra compañera solo que en
pequeñas cantidades, lo cual demuestra que la asepsia es indispensable para
conservar las salud.
IX. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:
MIDIGAN/ PARKERA/ MARTINKO, Broock – Biología de los Microorganismos,
Editorial Mc Graw Hill,10ma Edición, Impreso en España 1998. Capítulo 20,
pág.: 689-691,692.
http://www.mcd.com.mx/pdfs/AGAR%20MAC%20CONKEY.pdf
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/maconkeyagar.htm
http://pdfcast.org/pdf/4-microorganismos-en-el-ambiente
Microbiología General
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