Definición, función y para que esta indicado. Espero y les sirva. Gracias-Thanks-Mercy-Arigato

1. - FROTIS- CULTIVODE LA SECRECIÓN VAGINAL
- PCR
AUTOR: LEYVERS V. RAMÍREZ
[ESTUDIANTE DE MEDICINA]

2. FROTIS Y CULTIVO DE LA SECRECIÓN VAGINAL
Permite el Dx de
infecciones vaginales o
cervicales, determinar el
microorganismo causante y
la sensibilidad de éste a
antibióticos concretos.

3. La secreción vaginal normal está
compuesta por secreciones vulvares
de las glándulas sebáceas, sudoríparas,
de bartolino y de skene, transudado
de la pared vaginal, células exfoliadas
de la vagina y del cuello, moco
cervical, líquido endometrial y de las
trompas, y microorganismos de flora
normal con sus productos metabólicos.
Se utiliza para la identificación de
patógenos: gardnerella, trichomonas
y candida albicans.

6. 3 SITUACIONES IMPORTANTES
1. Saber cuándo se altera el equilibrio de esta
flora colonizante.
2. Búsqueda de agentes exógenos, transmitidos normalmente
por vía sexual.
3. Detección de portadoras de determinados
microorganismos.

7. TOMA DE MUESTRA
₪ Prepararse para el examen vaginal.
₪ Evitar relaciones sexuale ( 24-48 horas).
₪ No utilice ningún medicamento ni ducha vaginal antes del examen
(las duchas siempre se deben evitar debido al riesgo de infecciones
uterinas o tubáricas).
₪ Vacíe su vejiga (también es preferible un intestino vacío).
₪ Coloque los pies en los estribos de la mesa de exploración.
₪ Cubra la parte inferior del cuerpo con el ropaje o sábana
suministrada.
₪ EXPLICAR TODO PROCEDIMIENTO QUE SE LE REALICE A LA
PACIENTE.

8. ₪ Previa colocación del especulo: se
toma una muestra del fondo del saco
posterior con un aplicador estéril.
₪ La secreción se descarga en un tubo
que contiene 1 o 2ml o 0.5 ml de
solución salina, y se traslada al
laboratorio y se centrifuga.
₪ Se deposita una gota en el cubre y
porta objetos para observar el
microscopio.
₪ Se puede preparar una gota con una
gota de KOH 10 % ( o wiff ) y se
cubre con un cubre objeto para la
identificación de la levadura.

9. Anatomía

10. 90 °

13. RESULTADOS DEL
CULTIVO
• Microscopio.
• Examen en medios de
cultivo.
• Examinar todos los
medios a las 18-24
horas. Si no crecimiento
de patógenos, incubar
hasta las 48 h.

14. IDENTIFICACIÓN Y PRUEBAS DE SENSIBILIDAD DE LOS
MICROORGANISMOS

15. OTRAS AFECCIONES BAJO LAS CUALES SE
PUEDE REALIZAR ESTE EXAMEN:
• URETRITIS
CRÓNICA.
• EIP

17. TIPOS DE ESTUDIOS MICROBIOLÓGICOS:
• Cultivo bacteriano.
• Cultivo de levaduras.
• Cultivo de trichomonas.
• Despistaje de Streptococcus agalactiae.
• Cultivo de virus herpes simple (puesto que requiere toma
de muestra y medio detransporte y cultivos especiales solo
se hará por petición expresa del médico.

18. RIESGOS Y CONTRAINDICACIONES:
A lo sumo puede causarle una ligera molestia la introducción del espéculo en la
vagina, y puede experimentar un leve dolor en el momento en que el médico toca el
cuello del útero con los instrumentos que utiliza para recoger la muestra.
₪ En mujeres embarazadas.
₪ En mujeres vírgenes que no acepten la colocación del
espéculo vaginal o en niñas, se realizará a ciegas mediante
la introducción de un escobillón por el orificio vaginal.

20. Algunas veces llamada "fotocopiado
molecular", la reacción en cadena de
la polimerasa (RCP) es una técnica
rápida y económica utilizada para
"amplificar" - copiar - pequeños
segmentos de ADN. Debido a que se
necesitan considerables cantidades de
una muestra de ADN para análisis
moleculares y genéticos, los estudios
de segmentos aislados de ADN son casi
imposibles sin la amplificación por RCP.
A menudo proclamada como uno de
los avances científicos más
importantes en la biología molecular,
la RCP revolucionó el estudio del ADN.
CREADOR , KARY B. MULLIS,
FUE OTORGADO EL PREMIO
NOBEL DE QUÍMICA EN 1993.

21. PCR
Esta técnica ha tenido tanta
influencia en el desarrollo de la
biología y, por consiguiente, en la
medicina, como el descubrimiento de
la estructura de doble hélice del
material genético (ADN).
El hecho de poder amplificar mínimas
cantidades de ADN de manera
específica ha propiciado su
aplicación en la detección de
microorganismos difíciles de cultivar,
infecciones virales recientes,
polimorfismos que causan
enfermedades y marcadores de
cáncer, entre otras muchas
aplicaciones.

22. NOCIONES BÁSICAS SOBRE EL ADN
La PCR aprovecha ciertas propiedades
fundamentales del ADN. El ADN (lo mismo
que el ARN) es un ácido nucleico, y los
ácidos nucleicos se componen de «bloques
constituyentes» llamados nucleótidos. El
ADN existe como dos hebras
complementarias en forma de doble hélice
(dos espirales entrelazadas).
Cada una de estas hebras está hecha de
muchos nucleótidos conectados uno al
siguiente para formar una larga cadena de
ADN. La molécula de nucleótido tiene tres
partes diferentes: el fosfato y el azúcar, que
forman la columna vertebral o estructura
en forma de cinta o hebra en la imagen, y la
base.

23. Las bases de una hebra se unen a las
bases de la otra hebra, y esto da al ADN
su estructura estable de doble hélice.
(Véanse las dos hebras como las dos
cintas de unas zapatillas nórdicas que se
enroscan a lo largo de la pierna).
La naturaleza diferente del código del
ADN de un organismo depende del orden
o secuencia de las bases a lo largo de la
cadena de ADN.
Hay cuatro tipos diferentes de bases: A, T,
C y G (Adenina, Timina, Citosina y
Guanina). Estas bases están enganchadas a
las columnas respectivas, cada una
enrollada generándose la conocida forma
de doble hélice.

25. FUNCIÓN DE LA PCR
El VIH, como otros retrovirus, contiene ARN pero
no contiene ADN. Cuando el VIH está infectando
una célula, el enzima transcriptasa inversa de
este VIH transforma su ARN en ADN-
complementario, el cual es entonces insertado en
el ADN del huésped.
Si se usa la PCR para analizar tejido humano en
busca del VIH, se estaría buscando un corto
segmento de toda la hebra de ADN celular. Este
corto segmento representa el material genético
del VIH que ha sido incorporado al ADN de la
célula.
La PCR sólo busca una parte de todo el paquete
genético, o genoma, del VIH, y no todo el virus).

26. PRIMER PASO:
DESNATURALIZACIÓN:
este tiempo puede
variar entre ½ minuto
y 2 minutos).

27. SEGUNDO PASO:
ALINEAMIENTO.
dependiendo de
diversos parámetros
como la secuencia de
los primers, su
especificidad,...). La
duración de este paso
puede oscilar entre ½
minuto y 2 minutos.

28. TERCER PASO:
EXTENSIÓN.
Se vuelve a aumentar la
temperatura hasta los 72 °C y se
deja actuar a la Taq polimerasa
durante 1 ó 2 minutos.
La repetición de este ciclo
unas 40 veces, por ejemplo,
permite obtener, como resultado
de un experimento de
amplificación, millones de copias
del fragmento de interés.
- Se realiza de forma
automatizada.
Los tubos de reacción se
introducen en
un termociclador que de forma
automática.

30. NUEVAS INDICACIONES
Tiene un amplio espectro de aplicación en el diagnóstico. En el campo de la
microbiología, la PCR está llamada a sustituir completamente a gran cantidad de los
métodos actuales de detección de agentes patógenos. También facilita tener
resultados fiables en un intervalo de tiempo corto -horas-.

31. DETECTA:
Cabe destacar que la sensibilidad de esta técnica es mil veces mayor que la que
tiene un cultivo. Otras aplicaciones interesantes, y cada vez más extendidas, son
la determinación de la resistencia a antibióticos de bacterias aisladas de
pacientes y la detección de parásitos tales como Toxoplasma, Trypanosoma y
Cryptosporidium.

32. En el diagnóstico del cáncer la aplicación de la PCR ha sido esencial para determinar
la presencia de marcadores específicos del desarrollo de esta enfermedad, así como
la aparición de polimorfismos que inducen eventos oncológicos. Un ejemplo claro lo
constituyen los niveles de expresión de factores como HER-2 y la topo IIa, genes
importantes en el desarrollo del cáncer de mama, fácilmente detectables por PCR en
tiempo real.

33. DESVENTAJAS
• 1. La precisión de la PCR nunca ha sido verificada con un patrón-oro
apropiado.
• 2. La especificidad de la PCR jamás ha sido determinada.
• 3. Los iniciadores de la PCR no son específicos.
• 4. La PCR sólo detecta un pequeño fragmento del virus entero.
• 5. Hallar «ARN del VIH» con la PCR no significa que esté presente el VIH.
• 6. Un virus fuera de la célula no es un virus infeccioso.
• 7. La PCR no está estandarizada ni es reproducible.
• 10. La PCR es usada de forma indebida para «detectar» y cuantificar
virus imaginarios.

34. ¿ PREGUNTAS ?

35. BIBLIOGRAFÍA
• GUÍA PARA LA PCR1.
(POLIMERASA CHAIN REACTION: REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA).
• CÓMO ACTÚA LA PCR Y PORQUÉ NO PUEDE SER UTILIZADA COMO PRUEBA DE
INFECCIÓN POR VIH NI PARA MEDIR CARGA VIRAL ALGUNA.
POR CHRISTINE JOHNSON2.
• HTTP://WWW.UGR.ES/~MGARRIDO/PCR.HTM
• HTTP://WWW.EMPIREO.ES/PCR/