Laboratorio Clínico en el Diagnóstico de Enfermedades Virales

1. LABORATORIO EN EL DIAGNÓSTICO DE
ENFERMEDADES VIRALES

2. Clasificación de los virus

3. Morfología del virión Propiedades del genoma viral Propiedades fisicoquímicas del virión
Propiedades de las proteínas virales Organización del genoma y de la replicación Propiedades antigénicas.
Propiedades biológicas
organización genómica
del VHC

4. Virus que contienen DNA
• Parvovirus
• Poliomavirus
• C. Virus del
papiloma
• Adenovirus
• Hepadnavirus
• Herpesvirus
• Poxvirus

5. • Picornavirus
• AstrCalicivirus
• ovirus
• Herpesvirus
• Reovirus
• Arbovirus
• Togavirus
• Flavivirus
• Arenavirus
• Coronavirus
Virus que contienen RNA
• Retrovirus
• Ortomixovirus
• Bunyavirus
• Bornavirus
• Rabdovirus
• Paramixovirus
• Filovirus
• Otros virus
• Viroides
• Priones

6. DIAGNÓSTICO VIROLÓGICO
Un elemento crucial para realizar el diagnóstico de laboratorio de un
virus, cualquiera sea el método empleado, es la toma y el
procesamiento de una muestra clínica adecuada.
INFORMACIÓN
ESTRUCTURAL BIOLÓGICA ANTIGENICA GENÓMICA

7. DIAGNOSTICO VIROLÓGICO
SUCEPTIBLE
INFECTADO
AGUDO
PORTADOR INACTIVO
INFECTADO NO INFECTADO
CRONICO ACTIVO RECUPERADO

8. 1. CULTIVO CELULAR
• Se consiguió por primera vez hace 50
años
• Muchos virus de importancia clínica
son capaces de reproducirse en
cultivos celulares
• Se requiere uno o dos días para la
obtención de resultadosSE DIVIDE EN:
a. CULTIVOS PRIMARIOS
b. CULTIVOS DE LINEAS CELULARES DIPLOIDES
c. CULTIVO DE LINEAS CELULARES HETEROPLOIDES
MÉTODOS DE LABORATORIO PARA EL
DIAGNÓSTICO DE INFECCIONES VIRALES

9. A. CULTIVOS PRIMARIOS:
• se prepara del órgano original.
• Las células son separadas individualmente mediante
trituración y tto con tripsina → tubos de ensayo o “Shell-vials”
(células forman monocapa confluente) → se recubre con un
medio que mantiene su viabilidad (medio mínimo esencial de
Eagle en solución salina balanceada de Earl o de Hanks)

10. B. CULTIVOS DE LINEAS CELULARES
DIPLOIDES
• Derivan de pulmón o de prepucios de RN
• Se propagan en un cultivo celular rico en suero
C. CULTIVO DE LINEAS
CELULARES
HETEROPLOIDES
Derivan de tumores malignos y
son células inmortalizadas que
pueden cultivarse
indefinidamente, las mas
conocidas son Hep-2 y A549

11. 2. DETECCIÓN DE ANTÍGENOS Y DETECCIÓN
MOLECULAR
Es necesaria si hay disponible una terapia antivírica especifica
(infecciones causadas por VHS,VVZ, CMV, VRS) o cuando hay riesgo
de infección nosocomial, (virus de la gripe).
Los antígenos pueden ser detectados por:
INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA: se observa del espécimen-
calidad de muestra.
ENZIMOINMUNOENSAYO:
análisis de muestras
individuales .

12. MÉTODOS DE HIBRIDACIÓN Y AMPLIFICACIÓN: detectan a los virus
mediante el reconocimiento de secuencias especificas del genoma
ARN o ADN.
• HIBRIDACION: identifica mediante sondas especificas el virus de
papiloma humano, CMV, VHS Y Parvovirus B19
• AMPLIFICACIÓN: se
da mediante la
amplificación
exponencial de la
secuencia
oligonucleica del virus
elegida como diana:
PCR y bADN:
monitorización
cuantitativa del VIH y
virus de la hepatitis

13. PCR: método de elección para diagnostico de meningitis por
enterovirus y encefalitis por VHS, detección de virus de Epstein Barr
en LCF en personas con SIDA.

14. 3. SEROLOGÍA
AMBITOS DE APLICACIÓN:
• Diagnosticar infección reciente.
• Poner de manifiesto la existencia de inmunidad previa.
El diagnostico de infección
actual o reciente requiere
de la detección de IgM,
presentes en suero en la
primera semana de
infección.
Es la elección lógica para la
detección de: VEB, VHI,
Herpes virus humanos.

15. 4. EQUIPOS Y MATERIAL
CABINA DE FLUJO LAMINAR DE
CLASE II: protege al personal de los
aerosoles infectivo así como reduce
su contaminación con muestras.
CENTRIFUGA: Adaptada
para poner los shell vials

16. INCUBADORA: para mantener las
líneas celulares no inoculadas y
mantener el cultivo
MICROSCOPIO INVERTIDO CON
CONTRASTE DE FASES
CULTIVOS CELULARES:
• Solución salina balanceada
• Mezcla nutritiva con el medio mínimo esencial de Eagle.
• Suero bovino fetal

17. Obtención y Transporte de las
Muestras
Obtención
• Dentro de las 48-72 horas
• Cantidad posible de muestra de heces(10 cc, preferiblemente liquidas)

18. Transporte
• Mantenga las muestras refrigeradas
• Coloque las muestras en bolsas selladas sobre hielo

19. MÉTODOS DE DIAGNOSTICO VIRAL
DIRECTO

20. DENGUE
Vector: Aedes aegypti
Agente etiológico:
Flavivirus (cuatro serotipos 1-2-3-4)
El genoma viral consiste en una hebra
única de glucoproteína E (inmunogeno),
estimula respuesta inmune del individuo.

21. MÉTODOS DE LABORATORIO PARA
EL DIAGNÓSTICO DEL DENGUE
•Aislamiento del virus para:
determinar el serotipo del
virus infectante
Aislamiento en
ratones lactantes
inoculados por vía
intracerebral
Líneas celulares :
VERO, BSC-1,
BHK21, LLCMK2

22. Inoculación del mosquito Prueba de anticuerpos
fluorescentes

23. • Prueba ELISA
para el diagnóstico serológico
• Pueden detectar tanto la
presencia de Ac
específicos como de
antígenos virales
• Enzima reacciona con un
sustrato para convertirlo
en un producto coloreado
• Muy sensible

24. ELISA
Ac---------Ag

25. Placa ELISA

26. Recolección y procesamiento de muestras
para el diagnóstico de laboratorio
Tipo de
especímen
Momento de
recolección
Tipo de
análisis
Sangre de la fase aguda
(0 a 5 días después de la
aparición)
Cuando el paciente se presenta;
recoger la segunda muestra
durante la convalecencia
Aislamiento del virus
y/o serología
Sangre de la fase
convalesciente
( 6 días después de la
aparición)
Entre los días 6 y 21
posteriores a la aparición
Serología

27. Transmitida por el mosquito Aedes aegypti.
Casos graves caracterizados por
disfunción hepática y renal y hemorragia.
Para el cultivo se utilizan cultivos de
células de humano, mono, roedor, cerdos,
aves y células de mosquito.
El virus puede aislarse de la sangre y
realizar inoculación intracerebral de
ratones o con el empleo de linajes de
células.
Flavivirus
CULTIVOS CELULARES Y
AISLAMIENTO

28. ESPECIMEN PREFERIDO Y TRANSPORTE DE
MUESTRAS
Suero, LCR y biopsia
de tejido cerebral
fresco.
Las muestras deben obtenerse durante la
fase aguda de la enfermedad.
Todas las muestras, excepto las de sangre,
deben transportarse y almacenarse a 4°C.
Las muestras de sangre para el
aislamiento de virus deben mantenerse a
temperatura ambiente todo el tiempo.
El transporte debe realizarse de forma
inmediata.

29. Observación en microscopio electrónico
sobre muestras de tejido o ganglio.
EXAMEN MICROSCÓPICO
PRUEBAS INMUNOLÓGICAS
Diagnóstico seroinmunológico:
La detección de anticuerpo IgM mediante
la captura de ELISA en una sola muestra
proporciona un diagnóstico presuntivo y se
confirma por un incremento del cuádruplo
o más en los títulos de anticuerpo
neutralizante entre muestras de suero
obtenidos en la fase aguda y la fase de
convalecencia.
•Se usa PCR para detectar ARN específico
de los distintos grupos de virus
Fotografía por microscopio
electrónico del virus que causa la
Fiebre Amarilla

30. Se transmite mediante la picadura de los
mosquitos portadores Aedes aegypti
Alfavirus, ARN monocatenario con
envoltura y de sentido positivo.
Cultivo estirpes celulares de
vertebrados y de mosquito, pero
la mayoría son difíciles de aislar.
Por lo general pueden
desarrollarse en linajes celulares
comunes como Vero, BHK, HeLa
y MRC-5.
Aislamiento La inoculación
intracerebral de los ratones recién
nacidos o cobayos..
CULTIVOS CELULARES Y AISLAMIENTO

31. Líneas de células de
hígado de crías de
hámster.

32. ESPECIMEN PREFERIDO Y TRANSPORTE DE
MUESTRAS
El virus se encuentra en la
sangre sólo en las primeras
fases de la infección
Se pueden encontrar virus
en el LCR o en muestras
de tejido
El transporte se debe
realizar inmediatamente.

33. Serología: La prueba HI es la prueba
diagnóstica más sencilla, pero
identifica el grupo más que el virus
causante específico.
Los análisis serológicos más
sensibles detectan IgG específicos
del virus en suero o en el líquido
cefaloraquídeo con
enzimoinmunoanálisis de adsorción
(ELISA).
PRUEBAS INMUNOLOGICAS
Análisis de inmunoadsorción
ligada a enzimas y aglutinación
con látex.
Aglutinación con látex.
HI

34. La presencia de IgM
específica o un
incremento del título al
cuádruple entre el nivel
del suero de la fase
aguda y el de la fase
convaleciente indican
una infección reciente.
Para la detección y la
caracterización se puede
recurrir a la RT-PCR del
ARN genómico o del
ARN vírico en sangre u
otro tipo de muestras.

35. Virus del género Flavivirus, de la familia
Flaviviridae.
ARN monocatenario con envoltura y de
sentido positivo.
Se transmite por la picadura de mosquitos
vectores del género Aedes.
CULTIVOS CELULARES Y AISLAMIENTO
• Se utilizan cultivos de células de
humano, mono, roedor, cerdos,
aves y células de mosquito.
• El aislamiento viral es en líneas
celulares a partir de muestras de
suero, órganos o mosquitos.

36. ESPECIMEN PREFERIDO Y TRANSPORTE
DE MUESTRAS
.
Detectado en sangre entera
(tambien en suero y plasma),
orina, LCR, liquido amniótico,
semen y saliva
Muestras mantenerse
refrigeradas a temperaturas
de 2 a 8 °C. En lo posible se
debe evitar el
congelamiento y
descongelamiento repetido
de las muestras.

37. PRUEBAS INMUNOLOGICAS
Detección de ARN viral a partir de suero y
mediante técnicas moleculares RT- PCR
ELISA de captura del anticuerpo IgM
MAC-ELISA PARA ZIKA: Usado para la
detección cualitativa de los anticuerpos IgM
del virus del Zika en el suero o el líquido
cefalorraquídeo. No se puede confiar en la
prueba de lgM para distinguir si una
infección es reciente o de larga data.

38. Virus de ARN de la familia
Orthomyxoviridae
Poseen envoltura y un genoma de ácido
ribonucleico (ARN) segmentado de
sentido negativo
Se inoculan en
cultivos celulares
de riñon de mono
o en embrión de
pollo (efecto
citopatico y
hemadsorcion
con coloración de
eritrocitos)
Cultivo celular
convencional o
cultivos en
shellvial,
utilizando
anticuerpos
monoclonales
específicos para
los tipos A o B.
El aislamiento viral se
realiza a partir de
productos de las vías
aéreas. Por lo regular
los huevos
embrionados, estirpe
celular de riñon canino
Madin-Draby , células
renales de simio
primario han sido los
métodos de
aislamiento de
elección.
CULTIVOS CELULARES Y AISLAMIENTO
RIÑON CANINO
MADIN-DRABY

39. Exudado faríngeo, nasofaríngeo,
gargarismo, lavado broncoalveolar o
suero.
La muestra debe tomarse en las
primeras 72 horas de iniciado el
padecimiento y mantenerse a 4°C.
El transporte debe ser rápido en hielo
ESPECIMEN PREFERIDO Y TRANSPORTE DE
MUESTRAS
Inmunofiuorescencia directa
o mediante técnicas
enzimáticas (EIA) o
inmunocromatografía.
EXAMEN MICROSCÓPICO

40. PRUEBAS INMUNOLÓGICAS.
Diagnóstico
seroinmunológico: Mide la
capacidad de inhibición de
la aglutinación de
hematíes de pollo por el
virus que tiene el suero
del paciente
Pruebas serológicas para
detección de anticuerpos
IgG e IgM frente a los virus
A y B

41. Virus muy lábil, de cadena
simple de ARN en sentido
negativo de la familia de los
paramixoviridae
Carece de la actividad de
hemaglutinina
CULTIVOS CELULARES Y AISLAMIENTO
El cultivo es muy difícil y lo
mas practico para establecer
el diagnostico es por medio
de pruebas inmunológicas
Se puede aislar el virus
sincitial respiratorio de las
secreciones nasales.

42. Los linajes de células
heteroploides humanas HeLa y
HEp-2 son los más sensibles
para el aislamiento del virus.
Aislamiento más rápido
 Inoculación
amplificada con
centrífuga de ampollas
que contienen cultivo de
tejido que se multiplican
en cubreobjetos.
Secreciones nasofaríngeas
y lavado bronquioalveolar.
Debe ser transportado
inmediatamente en hielo.
ESPECIMEN PREFERIDO Y TRANSPORTE
DE MUESTRAS
Imagen de inmunofluorescencia de
células HeLa cultivadas en cultivo
de tejidos y teñidas con anticuerpo
a actina en verde, vimentina en rojo
y ADN en azul

43. PRUEBAS INMUNOLOGICAS
Análisis serológico: se
utiliza
inmunofluorescencia,
ELISA y pruebas de NT.
La detección de
antígenos del VRS en
secreciones
respiratorias mediante
DFA o EIA representa
otra posibilidad para el
diagnostico mas
sensible que el cultivo
El enzimoinmunoensayo
es rápido y fácil de
realizar.

44. Paramixovirus
CULTIVOS CELULARES Y ASILAMIENTO
• El cultivo de las SNF es el método con mayor
sensibilidad para el diagnostico, aunque la detección de
antígenos del VPI en muestras de SNF también una
buena sensibilidad, que oscila entre 69% y el 85%
• Para el cultivo viral se inoculan cultivos celulares HEp-2,
células Vero, fibroblastos humanos de pulmon, células
de riñon de mono y de liquido amniótico humano o
líneas celulares de riñon.
• Aíslado en muestras de lavados nasales y secreciones
respiratorias, y crece bien en células primarias de riñón
de mono.

45. Inmunofluorescencia
indirecta sobre
células HEp-2 Virus de para
influenza en distintos
cultivos celulares

46. Secreciones nasofaríngeas y
lavado bronquioalveolar.
Debe ser transportado
inmediatamente en hielo.
ESPECIMEN PREFERIDO Y TRANSPORTE DE
MUESTRAS
El serotipo del virus se puede
determinar utilizando un
anticuerpo específico que inhiba
la hemadsorción o la
hemaglutinación.
PRUEBAS INMUNOLOGICAS

47. Las técnicas rápidas de
RT-PCR  detectar e
identificar los virus
parainfluenza en las
secreciones
respiratorias.
Para búsqueda e
identificación de
anticuerpos ELISA
Las pruebas de
anticuerpos
monoclonales
tipificación de estos
virus
Estudios de secuencia de
material genético 
diagnostico mas especifico
de la infección por virus
parainfluenza

49. Microorganismo causante de
la hepatitis infecciosa
Microorganismo causante
de la hepatitis sérica

50. El HAV se identificó inicialmente en heces y muestras
de biopsias de hígado
ESPECIMEN PREFERIDO Y TRANSPORTE
DE MUESTRAS
Sangre obtenida a través de punción periférica. La muestra
debe ser analizada dentro de las 24 hrs. siguientes, en caso
contrario puede mantenerse refrigerada a 4ºC hasta una
semana. Se recomienda no congelar.
CULTIVOS CELULARES Y
AISLAMIENTO
El aislamiento del virus no se intenta debido a que no
existen sistemas eficaces de cultivos tisulares para ello.
Los linajes celulares de diversos primates respaldan el
desarrollo del HAV

51. Diagnóstico de laboratorio
La mejor forma de identificar una
infección aguda por el VHA consiste en
la detección de la IgM anti-VHA
mediante un análisis de
inmunoadsorción ligada a enzimas
(ELISA) o radioinmunoanálisis
Microscopia electrónica con
técnicas inmunológicas como
sistema de detección
Los análisis serológicos sensibles y
la técnica de reacción en cadena de
la polimerasa (PCR) permiten la
detección de HAV en las heces y
otras muestras y determinar
anticuerpos específicos en suero.

52. Este virus se propaga en un
cultivo celular in vitro por
inoculación directa de una
animal susceptible con un
espécimen infectados.
El cultivo se da en el tejido del
hígado del animal infectado, en
este se producen antígenos del
virus durante un prolongado
periodo.
Se utiliza un espécimen clínico
que contenga hepatitis B (
sangre, hígado, plasma, saliva,
suero)
CULTIVOS CELULARES Y
AISLAMIENTO
ESPECIMEN PREFERIDO Y
TRANSPORTE
DE MUESTRAS
MUESTRAS: Suero, plasma. Las muestras
pueden recolectarse ya al comienzo de la
sintomatología aguda.
Las muestras deben recolectarse en
envases sin anticoagulantes, para obtener
suero. Este debe ser extraído en
condiciones de asepsia, en frascos limpios
y estériles, plásticos y con tapa rosca.
En el envio de la muestra
simultáneamente debe tomarse la
precaución de colocar cada una protegida
por separado en un recipiente metálico o
de material aislante. Esto evitará rupturas,
pérdidas y contaminación del operador.
HBcAg purificado de núcleos
de hígado infectado (122 400
×). El diámetro de las
partículas del centro es de 22
nm. (Cortesía de HA Fields,
GR Dreesman y G Cabral.

53. Diagnóstico de laboratorio
Los HBsAg y HBeAg se secretan
en sangre durante la replicación
vírica. La detección del HBeAg
guarda una correlación mejor con
la presencia del virus infeccioso.
Los anticuerpos frente al HBsAg
indican la resolución de la
infección o que el individuo ha
sido vacunado
La detección de IgM anti-HBc
es el mejor método para
diagnosticar una infección
aguda reciente, especialmente
durante el período en el que
no se pueden detectar HBsAg
ni anti-HBs (período ventana).
La cantidad de virus en sangre puede determinarse por análisis
cuantitativos del genoma empleando la reacción
en cadena de la polimerasa (PCR) y técnicas relacionadas. El
conocimiento de la carga vírica puede ayudar a seguir la
evolución de la infección crónica por el VHB y la eficacia del
tratamiento antiviral

54. FAMILIA: Rhabdoviridae
Género: Lyssavirus
ARN virus
Ataca el sistema nervioso
central (encefalitis)
CULTIVOS CELULARES Y
AISLAMIENTO
Cultivo y aislamiento en líneas celulares.
En laboratorios especializados, se inoculan
líneas celulares de hámster y de ratón para la
multiplicación rápida (dos a cuatro días) del
virus de la rabia; esto es mucho más rápido
que el aislamiento del virus en los ratones

55. ESPECIMEN PREFERIDO Y TRANSPORTE DE
MUESTRAS
SALIVA: Usar una pipeta estéril para recolectar la saliva y
colocar en un recipiente estéril que debe ser sellado
adecuadamente. No debe agregarse ningún material
preservativo.
BIOPSIA DE NUCA: Tomar una sección de piel de 5 a 6 mm
de diámetro de la región posterior de la nuca en la línea del
cabello. La biopsia debe contener por lo menos 10 folículos
pilosos y ser lo suficientemente profunda como para incluir
los nervios cutáneos de la base del folículo.
Colocar la biopsia sobre una gasa estéril humedecida con
agua destilada estéril e introducir en un contenedor sellado.
No debe agregarse ningún material preservativo.

56. Diagnóstico de laboratorio
Diagnóstico anatomopatológico :
Los cuerpos de Negri ( cerebro o en
medula espinal) contienen antígenos
del virus de la rabia y se pueden
demostrar mediante
inmunofluorescencia.
PCR para amplificar partes de un
genoma de virus de la rabia de tejido
cerebral
Diagnóstico serológico:
Los anticuerpos séricos contra
la rabia se pueden detectar
mediante pruebas de
inmunofluorescencia .
Pieza de biopsia de la piel de la
nuca en la línea de implantación
del cabello.
Demostración de anticuerpos
específicos en LCR y/o
suero mediante ELISA
Inmunofluorescencia
positiva de Lyssavirus en
Hipotálamo (40 x)

57. VIRUS
GASTROINTESTINALES
SINDROME
GASTROINTESTINAL
Prodicida
por
ROTAVIRUS NIÑOS
ADENOVIRUS
ENTEROVIRUS
ASTROVIRUS
NOROVIRUS
CALICIVIRUS
DIAGNOSTICO MICROSCOPIA
ELECTRONICA
Observación de
partículas en muestras
de heces

58. ROTAVIRUS ADENOVIRUS CALCIVIRUS

59. VIRUS TISULARES
Líquido vesicular (en un
tubo capilar cerrado),
raspados (en un tubo),
frotis del cuello uterino,
secreción vaginal, heces,
suero
Vesículas,
erosiones
Exantema
con otra
morfología
Raspados de las lesiones
Frotis faríngeo (tomar con
un hisopo y depositar en
medio de Hanks), heces,
orina
Cultivo,
determinación de
anticuerpos, PCR
Preparación de los
raspados con el
método de Tzanck,
IFA, cultivo, PCR,
determinación de
anticuerpos
Piel, membranas mucosas:
OBTENCION DIAGNOSTICO
Enterovirus, v. del
sarampión, v. de la
rubéola, adenovirus,
parvovirus B19
Enterovirus
ETIOLOGÍA

60. FAMILIA: paramixovirus
Género: Morbillivirus
ARN virus
Caracteriza por típicas manchas
en la piel de color rojo, fiebre y
mal estado general
CULTIVOS CELULARES Y AISLAMIENTO
el aislamiento de los virus a partir de exudado orofaríngeo, conjuntiva o
de orina es más productivo en los primeros cinco días de la enfermedad.
Las células de riñón de mono o persona o un linaje de células
linfoblastoides , son óptimas para los intentos de aislamiento.
El sarampión crece con una variedad de cultivos celulares, y produce
células gigantes multinucleadas similares a las que se observan en los
tejidos del hospedador infectado.
Virus del sarampión en células
renales humanas ( tinción H-E ,
400 X). La célula gigante
multinucleada contiene
inclusiones nucleares acidófilas
(flecha vertical) e inclusiones
citoplasmáticas ( flecha
horizontal).

61. ESPECIMEN PREFERIDO Y TRANSPORTE DE
MUESTRAS
NASOFARNGEO: Usar hisopos, frotar
fosas nasales y faringes separadamente,
las células obtenidas se suspenden en el
medio de transporte viral escurriendo
contra la pared del recipiente. Conservar
a 4 °C.
ORINA: Ideal es la primera orina de la
mañana recolectada en envase estéril.
Enviar a laboratorio refrigerada a 4 °C

62. Diagnóstico de laboratorio
Detección de antígeno y ácido
nucleico:
Los antígenos de sarampión se detectan
directamente en células epiteliales de
secreciones respiratorias, la
nasofaríngea, conjuntivas y orina. Los
anticuerpos contra la nucleoproteína
son útiles porque es la proteína viral más
abundante en las células infectadas.
La detección de RNA viral mediante RT-
PCR es un método sensible que se
puede aplicar a diversas muestras
clínicas para el diagnóstico del
sarampión
Diagnóstico serológico:
Depende de un incremento al
cuádruple del título de anticuerpos
específicos entre los sueros de fase
aguda y de fase convaleciente o de
la demostración de anticuerpo de
IgM específico de sarampión en una
sola muestra de suero obtenida
entre una y dos semanas después
del inicio del exantema. Para esto se
usan las pruebas ELISA.

63. Enfermedad febril aguda que se caracteriza
por un exantema y linfadenopatía que afecta
a los niños y a los adultos jóvenes.
Para el cultivo se utilizan cultivos de
células de humano, mono, o conejo.
Utilizando células cultivadas a través del
método de centrifugación y cultivo, se
pueden detectar antígenos virales mediante
inmunofluorescencia tres a cuatro días
después de la inoculación.
Producida por un virus de la familia
Togaviridae, del genero Rubivirus.
CULTIVOS CELULARES Y
AISLAMIENTO

64. ESPECIMEN PREFERIDO Y TRANSPORTE DE
MUESTRAS
5ml para niños
mayores y adultos y
1ml para lactantes y
niños pequeños
Recoger 5 ml de sangre por venopunción en un tubo
estéril debidamente identificado.
Dejarlo en reposo el tiempo que precise para que
se retraiga el coágulo y luego centrifugar a 1000 x
g durante 10 minutos para separar el suero
Las muestras de suero deben enviarse al
laboratorio conservadas a 4C°, se pueden
almacenar hasta por 7 días entre 4-8C°.
Para el envío del suero se utilizarán cajas de
material impermeable o bien paquetes de
hielo congelados.

65. Utilizar RT-PCR para detectar ácido nucleico
del virus de la rubéola directamente en
muestras clínicas o en cultivos celulares
utilizados para el aislamiento del virus.
EXAMEN MICROSCÓPICO
PRUEBAS INMUNOLÓGICAS
La prueba HI es una prueba serológica
estándar para la rubéola. Sin embargo, el
suero debe tratarse preliminarmente para
eliminar los inhibidores inespecíficos
antes de las pruebas. Se prefieren las
pruebas de ELISA porque no es necesario
el tratamiento preliminar del suero si se
pueden adaptar para detectar IgM
específica. La detección de IgG es signo de
inmunidad, ya que sólo hay un serotipo de
virus de la rubéola.

66. FAMILIA: Herpesvirus
SUBFAMILIA: Alphaherpesviridae
ADN virus
Formación de vesículas
alrededor de la boca, de la
nariz o en la zona genital.
CULTIVOS CELULARES Y AISLAMIENTO
Se puede aislar de las lesiones herpéticas y también encontrarse en lavados
faríngeos, líquido cefalorraquídeo y heces, tanto durante la infección primaria como
durante los periodos asintomáticos . El HSV es fácil de cultivar y los efectos
citopáticos por lo general ocurren en sólo dos a tres días. Luego, se identifica el
agente mediante la prueba de Nt o tinción inmunofluorescente con antisuero
específico.
Cultivo. El cultivo en líneas celulares (convencional o en shell-viál) es un método
sensible y específico. Se pueden utilizar células MRC5, Vero o Hep 2 y posterior
demostración de efecto citopático y tinción con anticuerpos monoclonales.

67. ESPECIMEN PREFERIDO Y TRANSPORTE DE
MUESTRAS
Levantar ligeramente la costra de una lesión y con un palillo o unas
pinzas recogerla y colocarla en un tubo de ensayo o bolsa de plástico.
Las muestras de sangre se recogen sólo para comprobar el estado de
inmunización del paciente. La venopunción es una forma aceptable
para conseguir 1 ml de sangre en un tubo, otra forma es pinchando con
una lanceta y presionando un papel de filtro sobre la sangre hasta que
esta ha traspasado complemente el papel dejando una mancha circular.
Dejar secar la sangre y guardar el papel de filtro seco en una bolsa de
plástico.
Toma de una muestra del contenido líquido de las vesículas herpéticas o
del frotis de la base de las lesiones úlcero-costrosas. Esta muestra se fija
en un portaobjetos y se tiñe con tinción de Giemsa o azul de toluidina
Las muestras para el laboratorio se obtienen a partir de las lesiones de la piel o
mediante la toma de sangre.

68. Diagnóstico de laboratorio
CITOPATOLOGÍA: Teñir las muestras
obtenidas por raspado de la base de la
vesícula la presencia de células gigantes
multinucleadas indica que está presente
un herpesvirus. Análisis directo de las
muestras clínicas Los efectos
citopatológicos (ECP) característicos se
pueden identificar mediante un frotis de
Tzanck (un raspado de la
base de una lesión), de Papanicolaou
(Pap) o una muestra de
biopsia (tabla 51-2). Entre los ECP se
incluyen los sincitios,
el citoplasma «balonizante» e inclusiones
intranucleares de
Cowdry de tipo A .
Diagnóstico serológico: Es útil
en la infección primaria y para
diferenciar de la reactivación
(demostración de anticuerpos
IgM) y en cuadros de afectación
neurológica (en LCR y suero). Los
métodos disponibles son
inmunofluorescencia y ELISA
BIOLOGÍA MOLECULAR. Detección
de ADN viral en lesiones mediante
PCR. Útil en pacientes con
tratamiento antiviral y otras
infecciones por virus herpes, como
encefalitis herpética (en LCR) o
queratitis herpética (en raspado
corneal).

69. FAMILIA: Herpesvirus
SUBFAMILIA:
Betaherpesvirinae
ADN virus
Principalmente atacan a
las glándulas salivales
CULTIVOS CELULARES Y AISLAMIENTO
Cultivo se replica in vitro sólo en fibroblastos humanos, aunque el virus
suele aislarse de células epiteliales del hospedador
El CMV solamente crece en cultivos celulares de fibroblastos diploides y, por
lo general, se debe mantener por lo menos durante 4 o 6 semanas.
Aislamiento de virus: shell-vial utilizando anticuerpos específicos frente a
antígenos tempranos y fibroblastos de pulmón humano (MRC5). Muestras:
capa leucocitaria de sangre periférica, orina, secreciones respiratorias,
oculares o biopsias (hígado, colon, estómago, pulmón), según la clínica.
Citomegalovirus en fibroblastos
humanos( tinción H y E, 228X)
que muestra células gigantes con
inclusiones acidofilas en los
núcleos ( flechas pequeñas) y
citoplasma ( flecha grande), la
ultima es característicamente
grande y redonda.

70. ESPECIMEN PREFERIDO Y TRANSPORTE DE
MUESTRAS
SECRECIONES RESPIRATORIAS: Usar hisopos,
frotar fosas nasales y faringes
separadamente, las células obtenidas se
suspenden en el medio de transporte viral
escurriendo contra la pared del recipiente.
ORINA: Ideal es la primera orina de la
mañana recolectada en envase estéril.
Toma de una muestra de sangre periferica.

71. Diagnóstico de laboratorio
HISTOLOGÍA
célula citomegálica, la cual es una célula
aumentada de tamaño (25 a 35 mm de
diámetro) que contiene un cuerpo de
inclusión intranuclear basófilo central
denso, en «ojo de búho». Las inclusiones
se observan con facilidad por medio de la
tinción de Papanicolaou o de
hematoxilina-eosina
Diagnóstico serológico:
Normalmente la seroconversión es
un detector excelente de una
infección primaria por CMV. Los
títulos de anticuerpo IgM específico
del CMV pueden ser muy elevados
en los pacientes con SIDA
Examen microscópico. Detección de
antígeno inmediatamente temprano pp65
de citomegalovirus en leucocitos de
sangre periférica (antigenemia), muestras
respirato rias o biopsias (menos sensible)
por inmunofluorescencia.
Diagnóstico antigénico y
genómico: Por
inmunofluorescencia o ELISA o del
genoma vírico por PCR u otras
técnicas relacionadas en células
procedentes de una biopsia o bien
de muestras de sangre, lavado
broncoalveolar u orina

72. FAMILIA: Herpesvirus
GÉNERO: Varicellovirus
ADN virus
Varicela(niños, adolescentes y
adultos jóvenes) y herpes zóster y
neuralgia posherpética(adultos)
CULTIVOS CELULARES Y AISLAMIENTO
El virus se propaga en los cultivos de
tejido embrionario humano y produce
cuerpos de inclusión intranuclear
característicos.
El virus se puede aislar del líquido
vesicular en las primeras etapas de la
evolución de la enfermedad utilizando
cultivos de células humanas durante
tres a siete días.
El cultivo en líneas celulares
(convencional o en shell-viál) es
un método sensible y
específico. Se pueden utilizar
células MRC5, Vero o Hep 2 y
posterior demostración de
efecto citopático y tinción con
anticuerpos monoclonales.
Virus varicela-zoster en
células de riñón humano
(tinción de H y E ,
228X), con una célula
gigante multinucleada
que contiene
inclusiones
intranucleares acidofila
(flechas)

73. ESPECIMEN PREFERIDO Y TRANSPORTE DE
MUESTRAS
Levantar ligeramente la costra de una lesión y con un palillo o unas
pinzas recogerla y colocarla en un tubo de ensayo o bolsa de plástico.
Las muestras de sangre se recogen sólo para comprobar el estado de
inmunización del paciente. La venopunción es una forma aceptable para
conseguir 1 ml de sangre en un tubo, otra forma es pinchando con una
lanceta y presionando un papel de filtro sobre la sangre hasta que esta
ha traspasado complemente el papel dejando una mancha circular. Dejar
secar la sangre y guardar el papel de filtro seco en una bolsa de plástico.
Toma de una muestra del contenido líquido de las vesículas herpéticas o
del frotis de la base de las lesiones úlcero-costrosas. Esta muestra se fija
en un portaobjetos y se tiñe con tinción de Giemsa o azul de toluidina
Las muestras para el laboratorio se obtienen a partir de las lesiones de la piel o
mediante la toma de sangre.

74. Diagnóstico de laboratorio
En los frotis teñidos de descamación o
exudado de la base de las vesículas (frotis
de Tzanck), se observan células gigantes
multinucleadas
Diagnóstico serológico:
Es posible detectar una elevación del título
de anticuerpo específico en el suero del
paciente mediante diversas pruebas, como
el anticuerpo fluorescente y el
enzimoinmunoanálisis
Biología molecular. Detección de ADN viral
en lesiones mediante PCR. Útil en
pacientes con tratamiento antiviral y otras
infecciones por virus herpes, como
encefalitis herpética (en LCR) o queratitis
herpética (en raspado corneal).

75. FAMILIA:
Papilomaviridae
ADN virus
Infectan la piel y
membranas mucosas
CULTIVOS CELULARES Y AISLAMIENTO
Los papilomavirus no crecen en los cultivos
celulares
ESPECIMEN PREFERIDO Y TRANSPORTE DE MUESTRAS
La muestra adecuada para la detección del VPH es el
cepillado o la biopsia, dependiendo de la localización,
recogidas habitualmente en medio líquido, en
recipientes estériles de cierre hermético.

76. La muestra de orina en la mujer, aunque es muy fácil
de tomar, ha mostrado una sensibilidad inferior y por
esto no se recomienda para el cribado de CCU
El cepillado anal, tanto en mujeres como en hombres,
se realizará de varias zonas tomadas al azar.
La biopsia de verrugas se enviarán en un bote estéril
sobre una gasa con un fondo de solución salina en
condiciones asépticas.
Previamente a la toma de la muestra, los viales de
citología líquida se mantendrán a temperatura ambiente.
El transporte de las muestras debe realizarse lo antes
posible al laboratorio de Microbiología a temperatura
ambiente.

77. Diagnóstico de laboratorio
La confirmación microscópica de
una verruga se basa en su
aspecto histológico característico,
el cual consta de hiperplasia de
células espinosas y un exceso de
producción de queratina
(hiperqueratosis)
En los frotis de Papanicolau se
puede detectar células epiteliales
escamosas coilocitóticas
(citoplasma vacuolado), las cuales
tienen forma redondeada y
aparecen agrupadas.
La utilización de sondas moleculares de ADN y el análisis de la reacción
en cadena de la polimerasa en muestras de frotis cervical e hísticas
constituyen los métodos de elección para confirmar el diagnóstico y
clasificar la infección por PVH

78. TEST TIRA REACTIVA

79. PRUEBAS SEROLOGICAS
Detección de anticuerpos anti VIH-1, su presencia reflejan
estado de portación actual.
Se realiza mediante pruebas de screening, las que si resultan
positivas luego son confirmadas por test de mayor
especificidad.
La seropositividad se define mediante la reactividad repetida
a las pruebas de screening (2 TEST positivos) confirmados
posteriormente con una prueba confirmatoria.

80. ELISA
DIRECTO
INDIRECTO
Detectar antígenos
Detectar anticuerpos

81. TEST DE SCREENING
El método más utilizado es el
enzimoinmunoanálisis (EIA),
existiendo técnicas de primera ,
segunda y tercera generación
dependiendo del origen de los
antígenos virales.
Sensibilidad de las técnicas
actuales alcanza un 99 %.
Los EIA de tercera generación
son los utilizados en la
actualidad por su mayor
sensibilidad y especificidad.
Existen también pruebas de
detección rápida basadas en
principios de aglutinación y las
de inmunoadherencia (dot-
blot), siendo menos especificas
que las anteriores.

83. TEST CONFIRMATORIOS
El Western blot es el más utilizado en la
confirmación de los resultados obtenidos
por screening.
El WB, permite distinguir contra que
antígenos virales se dirigen los anticuerpos
de la muestra a estudiar.
Las limitaciones del WB son la complejidad
de la técnica, su alto costo, la necesidad de
personal altamente especializado. Además
la variabilidad de la reactividad de las
bandas ( gp160,gp120,p24, p17 y la gp41.
Existe diferente valor predictivo diagnóstico
la existencia de las diferentes bandas. Las
bandas de proteínas de la envoltura son las
más especificas con bajo % de falsos (+)

84. BIBLIOGRAFÍA
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Masson;2010.
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Médica. 26th ed.Mexico, D.F:Mc GrawHill;2010.
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Editorial Medica Panamericana; 2007.
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Marbán; 2005.
5. Murray P RKPM. Microbiologia Medica. 7th ed. Barcelona: Elseiver
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diagnóstico para el virus del Zika. [Online].; 2017 [cited 2017 Agosto 19].
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7. Organizacióm Mundial de la Salud. Pruebas de laboratorio para la
infección por el virus. [Online].; 2016 [cited 2017 Agosto 18]. Available
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