las mutasiones y otros conceptos

1. UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
MAESTRÍA EN BIOLOGÍA MOLECULAR
Curso de mutagenesis.
Dra.
Bach. Blgo. Cotaquispe Nalvarte Rony
DAÑO OXIDATIVO DEL ADN ESPERMÁTICO Y
ADUCTOS DE ADN

4. Hidrocarburos aromáticos policíclicos
(HAP)son materiales orgánicos y ampliamente distribuidos en el medio
ambiente en mezclas complejas formados en la combustión como
Escape de vehículos, humo de tabaco, alimentos cocinados y agua y
aire.
Los PAH pueden someterse al metabolismo y forman productos
intermedios activos, que se han comunicado covalentemente al ADN
en linfocitos y tejidos de órganos incluyendo gónadas.

6. Formación de aductos
• HAP tienen el potencial de causar
daño al ADN.
• Cuando no se reparan, los aductos de
ADN pueden causar mutaciones, en el
p53 gen supresor y otros genes, que
en última instancia pueden inducir
cáncer.
• varios compuestos de PAH interviene
en la capacidad reproductiva de los
varones de manera adversa, la calidad
del semen y la integridad del ADN.

7. • La exposición a los HAP ha sido daño oxidativo del ADN y posible
Rupturas ADN simple y doble.
• Los estudios en animales detectaron aductos de PAH-ADN En tejidos
testiculares y afectan la espermatogénesis.
• Estudios epidemiológicos limitados también han detectado PAH-ADN
aductos en esperma humano

10. Métodos
• la fragmentación del ADN espermático y desnaturalización en el
entorno de la clínica incluyen el desoxinucleotidilo terminal
transferase dUTP ensayo de marcado final (TUNEL) Y la esperma
cromatina estructura de ensayo (SCSA)
• 8-hidroxi-2 urinario desoxiguanosina (8-OHdG), es uno de los
productos más abundantes de daño oxidativo al ADN; Ha sido
utilizado como biomarcador para representar el estrés oxidativo
sistémico.

12. objetivo
• evaluar la integridad del ADN espermático trabajadores de hornos de
coque expuestos crónicamente a HAP a los sujetos de control.
• Mediante Fragmentación del ADN, desnaturalización, 8-oxodGuo, y
los aductos voluminosos se evaluaron para determinar el ADN nuclear
Integridad de los espermatozoides.

14. 2. Materiales y métodos
2.1. Los trabajadores del horno de coque (n = 112) expuestos
crónicamente a los HAP, mientras que los administradores y el personal
de seguridad (n = 67) el grupo de control con exposición mínima a los
HAP.
• Criterios para la selección de sujetos humanos se incluyó ser un
hombre entre 25 Y 50 años de edad, sin disfunción reproductiva, y
siendo empleado en la planta más de un año.
2.2. Medición de 1-hidroxibenceno (I-OHP)
• Las muestras de orina se recogieron en polipropileno esterilizado de
50 ml tazas justo antes de la recogida de la muestra de esperma.

15. • Recolección y análisis de semen
Las muestras de semen fueron producidas por masturbación después
de 3 a 5 días de abstinencia sexual y se permitió licuar a temperatura
ambiente.
• Mordida dUTP mediada por la desoxinucleotidil transferasa terminal
Ensayo de etiquetado final (TUNEL) el ensayo TUNEL se utilizó para
detectar la fragmentación del ADN espermático.
• Ensayo de estructura de cromatina de esperma (SCSA)
El SCSA se utilizó para detectar la desnaturalización de ADN

16. • Detección de aductos de 8-oxo-dGuo en espermatozoides
Se aislaron ADN de esperma de acuerdo con el procedimiento
recomendado por el comité Europeo, con modificaciones para
minimizar la oxidación del ADN durante los procedimientos de
aislamiento del ADN.
• Detección de aductos de 8-oxo-dGuo en la orina
También se midieron las concentraciones urinarias de 8-oxo-dGuo en la
orina utilizando un método validado de LC-MS / MS con SPE

17. • Detección de aductos de ADN voluminosos
La presencia de aductos de ADN voluminosos fue determinada por la
32P-post-marcaje método

18. Resultado