El documento describe los diferentes tipos de microscopios utilizados en histología, incluyendo microscopios ópticos, de fluorescencia, electrónicos y otros. Explica sus componentes, principios y usos para visualizar estructuras a nivel celular y subcelular.

1. HISTOLOGÍA
MICROSCOPIO
Dr. Abraham Rodríguez
2021

2. MICROSCOPIO
Es un instrumento que amplifica una
imagen y permite ver más detalles de
lo que es posible a simple vista.
Pudiendo ser:
• Simple (una sola lente)
• Compuesto (lentes múltiples)
El poder de resolución del ojo humano, es decir, la distancia
a la que deben estar dos objetos para que se vean por
separado (0,2 mm)

4. EL PODER DE RESOLUCIÓN ES LA CAPACIDAD DE UNA
LENTE DE MICROSCOPIO O SISTEMA ÓPTICO PARA
OBTENER IMÁGENES SEPARADAS DE OBJETOS QUE
ESTÁN MUY CERCA UNOS DE OTROS.
La resolución depende:
⮚Del sistema óptico
⮚De la longitud de onda de luz
⮚Como el espesor de la muestra
⮚La calidad de la fijación
⮚La intensidad de la tinción
❖ LA LENTE OCULAR AUMENTA LA IMAGEN PRODUCIDA POR LA LENTE
OBJETIVO, PERO NO PUEDE AUMENTAR LA RESOLUCIÓN.

5. - Es el microscopio utilizado por la mayor parte de los
estudiantes e investigadores.
SUS COMPONENTES SON:
❖Fuente luminosa: para la iluminación de la muestra (p.
Ej., Una lámpara en la base del microscopio)
❖Lente condensador: para enfocar el haz de luz a la
altura de la muestra (concentra los rayos luminosos)
❖Platina: sobre la que se coloca el portaobjetos
❖Lente objetivo: para recoger la luz que ha atravesado la
muestra (Da aumentos o magnificación de la imagen Ej:
4x, 10x, 40x, 100x)
❖Lente ocular: a través de la cual se puede examinar
directamente la imagen formada por la lente de objetivo.
MICROSCOPIO DE CAMPO
CLARO.

10. TODA MUESTRA DE TEJIDO PREPARADO PARA SU EXAMEN POR
MICROSCOPÍA ÓPTICA DEBE CORTARSE EN REBANADAS MUY FINAS. POR
TANTO, DE UNA MUESTRA TRIDIMENSIONAL DE TEJIDO SE OBTIENEN
CORTES BIDIMENSIONALES

11. OTROS SISTEMAS ÓPTICOS
• MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES
• MICROSCOPÍA DE CAMPO OSCURO
• MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA
• MICROSCOPIO ULTRAVIOLETA
• MICROSCOPIO CONFOCAL DE BARRIDO
• MICROSCOPIO DE POLARIZACIÓN

12. MICROSCOPIO DE CONTRASTE
DE FASES
• El microscopio de contraste de fases permite el
examen de células y tejidos no teñidos y es
especialmente útil para estudiar células vivas.
• La luz que atraviesa regiones de índice de
refracción relativamente alto (las zonas más
densas) se refracta y queda fuera de fase con
respecto al haz de luz que ha pasado por la
muestra.
• Capta las longitudes de onda que están fuera de
fase para generar contraste.
• Las partes oscuras de la imagen corresponden a las
regiones densas de la muestra; las claras
corresponden a regiones menos densas.

13. https://youtu.be/UGEa8qQn-10

14. MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO
• La lente objetivo no capta luz directa proveniente de la
fuente luminosa, sólo la luz refractada por las estructuras
de la muestra penetra en el objetivo.
• El microscopio de campo oscuro está equipado con un
condensador especial que ilumina el preparado con
mucha intensidad y de forma oblicua. Así, el campo de
visión aparece como un fondo oscuro en el que las
pequeñas partículas en la muestra que reflejan parte de la
luz en el objetivo aparecen brillantes.
• En las imágenes de campo oscuro pueden detectarse
partículas individuales más pequeñas debido al mayor
contraste obtenido.
• En clínica se utiliza para la detección de cristales de la
orina, como los de ácido úrico y oxalato y en la
identificación de bacterias específicas, como
espiroquetas; en particular, Treponema pallidum, el
microorganismo causante de la sífilis, una enfermedad de
transmisión sexual.

16. MICROSCOPIO DE
FLUORESCENCIA
• Aprovecha la capacidad de ciertas moléculas de
fluorescer bajo la luz ultravioleta. Una molécula que
fluoresce emite luz de longitudes de onda dentro del
espectro visible cuando se expone a una fuente
ultravioleta (UV).
• El microscopio de fluorescencia se utiliza para la
detección de moléculas con fluorescencia natural
(autofluorescencia) como la vitamina A y algunos
neurotransmisores. Sin embargo, debido a que las
moléculas autofluorescentes no son muchas, la aplicación
principal de este microscopio consiste en examinar la
fluorescencia secundaria, como en la detección de
antígenos o anticuerpos en los procedimientos de tinción
inmunocitoquímica
• También puede usarse para visualizar partes de la

18. MICROSCOPIO ULTRAVIOLETA
(UV)
• La imagen en el microscopio ultravioleta (UV) depende de
la absorción de luz UV por las moléculas en la muestra. La
fuente UV tiene una longitud de onda de alrededor de 200
nm. Así, el microscopio UV puede llegar a una resolución
de 0,1 μm
• La muestra no Se puede inspeccionar directamente a
través de una lente ocular ya que la luz UV no es visible y
lesiona el ojo. los resultados, por lo general, se registran
de forma fotográfica
• La microscopía UV es útil en la detección de ácidos
nucleicos, específicamente las bases de purina y
pirimidina de los nucleótidos.
• Las mediciones espectrofotométricas UV se hacen por lo
general a través del microscopio UV para determinar de
forma cuantitativa la cantidad de ADN y ARN en las
células individuales
• La microespectrofotometría de Feulgen se utiliza en

20. MICROSCOPIO CONFOCAL DE
BARRIDO
• Combina componentes de un microscopio óptico de
campo claro con un sistema de barrido para
diseccionar una muestra ópticamente. Permite la
visualización de una muestra biológica en tres
dimensiones.
• La diferencia principal entre un microscopio
convencional y uno confocal es la adición de una
abertura de detector (orificio puntiforme) , que está
en conjunción con el punto focal de la lente; por lo
tanto, es confocal.
• Este orificio de posición precisa sólo permite que
pase la luz “en foco” hacia el detector se puede
diseccionar, literalmente, capa por capa todo el
espesor de la muestra.
• También es posible utilizar una computadora para

22. MICROSCOPIO DE
POLARIZACIÓN
• Tiene su fundamento en el hecho de que las
moléculas o los conjuntos de moléculas muy bien
ordenados pueden rotar el ángulo del plano de la luz
polarizada.
• Tanto el polarizador como el analizador pueden
rotarse; la diferencia entre sus ángulos de rotación
se utiliza para determinar el grado por el cual una
estructura afecta el haz de luz polarizada.
• La capacidad de una matriz de cristal o sustancias
paracristalinas de rotar el plano de luz polarizada se
llama birrefringencia (refracción doble).
• El músculo estriado y las inclusiones cristaloides en
las células intersticiales (células de Leydig)
testiculares, entre otras estructuras comunes,
exhiben birrefringencia.

24. MICROSCOPÍA
ELECTRÓNICA
• Hay dos tipos de microscopios electrónicos
que proporcionan datos morfológicos y analíticos
en las células y tejidos:
✔EL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE TRANSMISIÓN (MET)
✔EL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO (MEB)
• El adelanto principal en el ME en comparación con el microscopio óptico
es que la longitud de onda del haz de ME es unas 2 000 veces menor que
la de haz de luz del microscopio óptico, lo que aumenta la resolución por
un factor de 10 a la 3 veces.

25. MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE
TRANSMISIÓN (MET)
El MET utiliza la interacción de un haz de electrones con la muestra para
producir una imagen. La óptica del microscopio electrónico de transmisión es,
en principio, similar a la del microscopio óptico, excepto que el MET utiliza un
haz de electrones en lugar de unhaz de luz. El principio del microscopio es el
siguiente:
• Una fuente de electrones (cátodo, cañón de electrones), como un filamento
de tungsteno calentado, emite electrones.
• Los electrones son atraídos hacia un ánodo.
• Una diferencia eléctrica entre el cátodo y el ánodo imparte a los
electrones un voltaje de aceleración de entre 20 000 y 200 000 voltios,
generando el haz de electrones.
• El haz pasa a través de una serie de lentes electromagnéticas que cumplen la
misma función que las lentes de cristal de un microscopio óptico. La lente
condensador moldea y cambia el diámetro del haz de electrones que
alcanza el plano de la muestra. A continuación, el haz que ha pasado a
través de la muestra es enfocado y aumentado por una lente objetivo para
después volver a ser aumentado por una o más de una lente proyector.
La imagen final se ve en una pantalla fluorescente recubierta de fósforo o se
captura en una placa fotográfica. Las partes de las muestras que han sido
atravesadas por los electrones aparecen claras; las zonas oscuras de la

26. SE UTILIZA EN LA MICROBIOLOGÍA, PARA OBSERVAR
LA ESTRUCTURA DE LOS VIRUS. TAMBIÉN ES USADO
EN LA ANATOMÍA PATOLÓGICA, PARA DIAGNOSTICAR
PARTIENDO DE LA ULTRAESTRUCTURA CELULAR. ES
POSIBLE OBTENER IMÁGENES DE LAS COLUMNAS DE

28. EL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO (MEB)
• En la microscopía electrónica de barrido, el haz de electrones
no atraviesa la muestra, sino que se explora (barre) su
superficie.
• Son tridimensionales y muestran la estructura superficial de
una muestra examinada
• La muestra es recubierta con una capa de metal delgado, y es
barrida con electrones enviados desde un cañón. Un detector
mide la cantidad de electrones enviados que arroja la
intensidad de la zona de muestra, siendo capaz de mostrar
figuras en 3 dimensiones, proyectados en una TV. Permite
obtener imágenes de gran resolución en materiales pétreos,
metálicos y orgánicos. La luz se sustituye por un haz de
electrones, las lentes por electroimanes y las muestras se
hacen conductoras metalizando su superficie.
• El barrido se consigue con el mismo tipo de exploración que
hace recorrer el haz de electrones sobre la superficie de un
tubo de televisión. Los electrones reflejados desde la superficie
(electrones retrodispersos) y los electrones que son
expulsados de la superficie (electrones secundarios) son