Este documento describe diferentes tipos de microscopios especiales, incluyendo microscopios de campo oscuro, contraste de fase, interferencia, polarización, fluorescencia, luz ultravioleta y electrónicos. Explica el funcionamiento óptico de cada uno y sus usos, como la detección de treponemas en el microscopio de campo oscuro y el estudio de estructuras vivas sin teñir en el microscopio de contraste de fase. También compara las ventajas del microscopio electrónico sobre el óptico, como su mayor poder de resol

1. MICROSCOPIOS ESPECIALES

3. TRAYECTO OPTICO SEGUIDO POR EL
MICROSCOPIO OPTICO



Luz artificial y condensador que concentra la
luz
Objetivo: forma imagen real aumentada e
invertida (real por luz pasa por el lugar de la
imagen)
Ocular: diverge los rayos, forma imagen
virtual, aumentada e invertida (virtual porque
los rayos no pasan por la imagen).

4. TIPOS DE MICROSCOPIOS
ESPECIALES
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
De campo oscuro
De contraste de fase
De Interferencia
De polarizaciòn
De fluorescencia
Ultravioleta
Electrónico

5. 1. MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO.

Posee un condensador especial (parabólico de
Siedentof) desvía los rayos de luz para que no
penetren en el objetivo.

El resultado: Objetos aparecen brillantes sobre un
fondo oscuro.

Uso: determinación del treponema pallidum (sífilis).

6. Treponema Palidum

7. 2. MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE
Permite ver estructuras vivas sin colorear.
Son de bajo costo.
No mide la masa.(datos cualitativos)
Se agrega un diafragma anular al objetivo y al condensador.
Transforma las diferencias de contraste de fase en diferencias de
amplitud.

9. 3. MICROSCOPIO DE
INTERFERENCIA
Se usa como interferómetro para medir el grosor o índice
de refracción del objeto (datos cuantitativos)
Permite ver estructuras vivas sin colorear
y calcular masa del objeto
Permite ver el contraste de fase de la luz que
atraviesa objeto y las convierte en diferencias de amplitud
(intensidad y brillo)

10. 4. MICROSCOPIO DE POLARIZACION


Posee 2 filtros: polarizador (transforma la luz
en polarizada) y un analizador (registra las
variaciones de la polarizaciòn)
Luz polarizada al pasar el objeto produce:
desviación luz (estructuras birrefringentes o
anisotròpicas) y no desviación de la luz
(isotropicas)

11. MICROSCOPIO DE POLARIZACION

13. 5. MICROSCOPIO DE
FLUORESCENCIA
Secundaria: uso de
fluocromos
(anaranjado de acrilina,
quinacrina)
 Se utiliza en:

Inmunoflurescencia (AgAc),
 citogenética

identificación de sustancia
químicas y proteínas.

Algunas sustancias
absorben energía de la luz
UV. Y emiten
fluorescencia.
 Tipos de fluorescencia:

Primario o auto
fluorescencia:
Vit. A (verde) clorofila (roja


14. 6. MICROSCOPIO DE LUZ
ULTRAVIOLETA
Sus lentes son de cuarzo
Utiliza la luz ultravioleta de pequeña
longitud de onda
Mayor resolución que la luz visible

15. MICROSCOPIO DE LUZ
UTRAVIOLETA

Se utiliza para ver ácidos nucleicos
en células vivas. para cuantificarlos
utiliza el espectrofotómetro

Se ven las estructuras en pantalla
fluorescente y placas fotográficas.

16. DIFERENTES TIPO DE CAMPOS:

17. 7. MICROSCOPIO
ELECTRONICO.

18. LIMITACIONES DEL ME.
1.
2.
3.
Emplea un sistema de alto vació, esto
imposibilita el estudio de células vivas.
Tiene bajo poder de penetración el haz
electrones, por ello espesor del tejido debe
ser 50 – 150 nm.
Da imágenes en blanco y negro.

19. PREPARACION DE LA MUESTRA
PARA EL ME




Fijación: Técnica doble fijación, la primera con
glutaraldehido, seguido de fijación en tetraòxido de
osmio.
Medio de Inclusión: Resina (en vez de cera)
Corte: ultramicrotomo (cuchilla de diamante)
Tinción: Teñido tejido con átomos de metales
pesados (tungsteno, acetato uranio y hidróxido de
plomo).

20. VENTAJAS DEL ME
Su alto poder de resolución de 0.2 nm.
Emplea electrones, que produce longitud de onda de 0.005 nm (0.5 Aº)
Consigue aumentos de mas de 500,000 veces.

21. 



A menor longitud onda mayor poder
resolución, por lo tanto mayor aumento.
LO de luz visible : 500 nm
LO luz ultravioleta: 260 nm
LO del electrón : 0.005 nm

22. PODER DE RESOLUCIÒN (PR)

Distancia mínima entre dos puntos próximos
que pueda verse separados.
 PR del ojo : 0.2 mm.
 PR del MO : 0.2 um.
 PR del ME : 0.2 nm.

23. ELEMENTOS DEL ME PARA
PRODUCIR TRAYECTO OPTICO
1.
2.
3.
Un filamento tungsteno (cátodo) emite
electrones de alto voltaje (50,000 a 100,000
voltios)
Un ánodo que forma flujo de electrones
Un lente condensador electromagnético,
concentra el haz y lo dirige al objeto

24. 4. Un lente objetivo electromagnético que
amplia el cono del haz de electrones
5. Lente de proyección (Ocular del MO) que
amplia la imagen
6. Pantalla fluorescente o placa fotográfica que
registra la imagen.
7. Posee un sistema de vacío.

26. TIPOS DE MICROSCOPIOS
ELECTRONICOS
1.
Microscopio electrónico de transmisión
(MET)
2.
Microscopio electrónico de Barrido (MEB)

27. 1. MET

Es el microscopio estándar mencionado

Permite ver ultra estructuras celulares en un
plano.

28. 2. MEB

Los electrones no atraviesan el objeto, la
imagen se forma indirectamente por
acumulación puntiforme de detalles de la
superficie del preparado.

29. FUNCIONAMIENTO MEB

Basa en que la muestra es recorrida por haz
de electrones finos (10 nm ) que se dispersan,
provoca electrones secundarios, que son
medidos por un detector adaptado a un
amplificador con pantalla de TV. La imagen
formada se registra fotográficamente.

31. VENTAJAS DEL MEB
1.
2.
3.
4.

Tiene gran profundidad de
campo
Produce imagen de alta
resolución
Da imagen tridimensional
Haz no atraviesa el
preparado
< capacidad de aumento
que MET.